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1、流式细胞术流式细胞术特点特点l在保持细胞及细胞器或微在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能粒的结构及功能不被破坏不被破坏的状态下，通过的状态下，通过荧光荧光探针探针的协助，从分子水平上获的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行取多种信号对细胞进行定定量分析量分析或纯化或纯化分选分选Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.流式流式应用应用常见范围常见范围l细胞大小细胞大小 颗粒度颗粒度l细胞表面分子：细胞表面分
2、子：CD 系列系列l细胞浆内分子：胞内细胞因子细胞浆内分子：胞内细胞因子l细胞核内分子：细胞核内分子：P53l细胞功能检测：细胞功能检测：细胞周期、凋亡细胞周期、凋亡l细胞分选：细胞分选： CSC分选分选Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.周期检测周期检测样品制备样品制备 细胞：细胞： 六孔板六孔板 八成满足够八成满足够 组织：组织： 胰酶消化胰酶消化 300目筛网目筛网 约约1X10X106 6 PBS
3、PBS漂洗两次漂洗两次漂洗两次漂洗两次 70% 70%酒精酒精酒精酒精4 4固定过夜（次日上机检测）固定过夜（次日上机检测）固定过夜（次日上机检测）固定过夜（次日上机检测） -20固定固定固定固定 一月内检测、样品多、一月内检测、样品多、一月内检测、样品多、一月内检测、样品多、 不能同时收集不能同时收集不能同时收集不能同时收集Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.PBS漂洗两次漂洗两次周期试剂盒周期试剂盒-
4、染色步骤染色步骤1000rpm 离心离心5 min50L PI（0.1mg/ml）0.5ml PBS悬浮细胞悬浮细胞混匀，室温混匀，室温静止静止5分钟分钟上机检测上机检测2.5L RNase A( 10g/L) 3737消化消化消化消化1hr1hrEvaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.凋亡检测凋亡检测样品制备样品制备 细胞细胞 六孔板六孔板 八成满足够八成满足够 注意注意：培养液中的悬浮细胞一起收集：培养液
5、中的悬浮细胞一起收集 组织组织 胰酶消化胰酶消化+300目筛网目筛网Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.样品处理步骤样品处理步骤冰盒中冰盒中运送运送Annexin V-FITC 5L混匀混匀Binding Buffer500L悬浮细胞悬浮细胞 PBS洗两遍洗两遍培养液培养液悬浮细胞悬浮细胞Propidium Iodide5L混匀混匀 上机检测上机检测避光反应避光反应515min Evaluation on
6、ly.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.对照组设置对照组设置l实验分组l同型对照 免疫荧光标记中的阴性对照免疫荧光标记中的阴性对照 未标记单抗未标记单抗 用来设定十字门的位置（用来设定十字门的位置（R3R3区区98%-99%98%-99%） Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011
7、 Aspose Pty Ltd.未设置同型对照出现的问题未设置同型对照出现的问题l补偿不足导致补偿不足导致 分群不佳分群不佳 Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.周期图分析周期图分析Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd
8、.凋亡图分析凋亡图分析lAnnexin- PI双染法lAnnexin 磷脂酰丝氨酸lPI DNA l 左上为细胞碎片 l 右上为晚期凋亡细胞l 左下为活细胞 l 右下为早期凋亡细胞Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.CD分子标记图分子标记图lR1 CD24+/CD44-lR2 CD24+/CD44+lR3 CD24- /CD44-lR4 CD24- /CD44+Evaluation only.Create
9、d with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.SP检测检测lR1 -Hoechst33342+维拉帕米lR2 -Hoechst33342Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 相关实验室相关实验室l细胞细胞凋亡凋亡和和周期周期- 学校先知楼学校先知楼6楼楼 王玲老师王玲老师 86862029l细胞细胞周期周期医院中心实验室医院中心实验室-传染病房传染病房5楼楼 杨海伟老师杨海伟老师 Evaluation only.Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.
