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1、无菌制剂成品密封系统完好性验证药智论坛Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望主要内容主要内容定义和目的定义和目的适用范围适用范围试验方法试验方法结果评价结果评价贮存稳定性贮存稳定性恶劣条件下的成品密封性验证恶劣条件下的成品密封性验证生产中的在线检漏生产中的在线检漏如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛一、概述一、概述微生物侵入试验是对最终灭菌容器的密封件系微生物侵入试验是对最终灭菌容器的密封件系统统 完好性的挑战性试验。目的是考察并确认容器完好性的挑战性试验。目的是考察并
2、确认容器密密 封系统的完好性。封系统的完好性。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛二、适用范围二、适用范围本验证适用于无菌制剂生产中使用的输液本验证适用于无菌制剂生产中使用的输液瓶、西林瓶等需用多组件完成密封的容器瓶、西林瓶等需用多组件完成密封的容器完好性测试。完好性测试。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛三、试验方法三、试验方法在验证试验中，取输液瓶或西林瓶，灌入在验证试验中，取输液瓶或西林瓶，灌入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵液
3、中，取出、培养并检查是否有微生物侵入。入。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（一）试验样品的制备（一）试验样品的制备1.1.在生产线上取足够量的容器，灌装在生产线上取足够量的容器，灌装SCDM/2SCDM/2（大豆（大豆 胰蛋白胨肉汤）培养基，使用自动压塞和压盖设胰蛋白胨肉汤）培养基，使用自动压塞和压盖设 备将容器密封；备将容器密封；2.2.将灌装后的容器经最长灭菌程序灭菌。将灌装后的容器经最长灭菌程序灭菌。121121、 30 30；如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛3.3.取出、放冷，将每一试样倒转，使培养基取出、放冷，将每一试样倒转，使培养基与瓶口充分接触，在与瓶口充分接触，
4、在30303535下倒置培养下倒置培养1414天天; ;4.4.选选5050个试样小心去除铝盖个试样小心去除铝盖, ,注意不要破坏注意不要破坏其密封口。将去铝盖时不慎损坏窗口密封其密封口。将去铝盖时不慎损坏窗口密封性的所有试样剔除。按上述性的所有试样剔除。按上述3 3中要求培养样中要求培养样品。在培养期内，当试验中发现任何带盖品。在培养期内，当试验中发现任何带盖试样长菌时试样长菌时, ,则试验无效则试验无效, ,须弃去全部试样，须弃去全部试样，重新从头开始试验。重新从头开始试验。 如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（二）确认培养基促菌生长能力（二）确认培养基促菌生长能力营养性试验营养性试
5、验1.接种接种所有试样培养所有试样培养14天均不长菌时，随机取天均不长菌时，随机取20个带盖个带盖试样每个试样内接种试样每个试样内接种0.1ml的铜绿假单胞菌的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）ATCC 9027,菌液浓度菌液浓度10100CFU/0.1ml。试验菌选择原则：试验菌选择原则：（1）所选菌种的体积大小，越小越好。）所选菌种的体积大小，越小越好。（2）运动能力强。）运动能力强。（3）适宜的培养基。）适宜的培养基。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛2.2.培养培养 在在30303535下培养下培养7 7天，或培养至所有试天，或培养至所有试样样 都呈阳性
6、结果。都呈阳性结果。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛3.3.判定判定若若7 7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。可判为合格。使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的质，来鉴定并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（三）挑战菌悬浮液的制备（三）挑战菌悬浮液的制备1.1.从铜绿假单胞菌从铜绿假单胞菌(Pseu
7、domonasaeruginosa)ATCC 9027的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入 含含lOml lOml 无菌培养基的试管中，在无菌培养基的试管中，在30303535下下 培养培养161618h18h。2.2.将每管的培养物分别转入含将每管的培养物分别转入含1000ml 1000ml 相同培养相同培养 基基(SCDM(SCDM2)2)的容器内，于的容器内，于30303535下培养下培养 22 2224h24h。在培养结束时，能明显见容器内培。在培养结束时，能明显见容器内培 养基出现浑浊。养基出现浑浊。3.3.培养结束后的菌悬液即可用来作容器密封系培
8、养结束后的菌悬液即可用来作容器密封系 统完好性试验。统完好性试验。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（四）微生物侵入试验操作步骤（四）微生物侵入试验操作步骤本试验须在生物安全柜内或其他不影响生产环境本试验须在生物安全柜内或其他不影响生产环境的地方进行。的地方进行。1.1.将新鲜的铜绿假单胞菌将新鲜的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027 的菌悬液倒入合适的盆的菌悬液倒入合适的盆中，用金属丝架固定试样容器，使试倒置在菌悬中，用金属丝架固定试样容器，使试倒置在菌悬液中。液中。2.2.将将5050个经最长灭菌程序灭菌的试样倒置，并浸入个经最长灭菌程序灭菌
9、的试样倒置，并浸入菌悬液中。该组试样为菌悬液中。该组试样为A A 组。组。 试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内表面，试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液中，见图中，见图4 45454。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛3.3.同时将同时将2525个去铝盖的试样容器倒置入菌悬液中，个去铝盖的试样容器倒置入菌悬液中， 该组试样为该组试样为B B组。组。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛4.4.实验开始时取一份菌悬液，平板计数每毫升所实验开始时取一份菌悬液，平板计数每毫升所含的活菌数。按含的活
10、菌数。按2.3.1 2.3.1 确认试验用微生物是铜绿确认试验用微生物是铜绿假单胞菌假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)(Pseudomonas aeruginosa)。5.5.将将A A组和组和B B组试样容器在菌悬液中持续浸泡约组试样容器在菌悬液中持续浸泡约4h4h。6.6.浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓度。浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓度。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛7.7.从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外残余的菌悬液，然后用含残余的菌悬液，然后用含0.50.5过乙酸的过乙酸的 7070异丙醇消毒容器外表面。异丙
11、醇消毒容器外表面。8.8.取装满培养基有铝盖和去铝盖的样品各取装满培养基有铝盖和去铝盖的样品各两个，作阳性对照。阳性对照用样品制备两个，作阳性对照。阳性对照用样品制备方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表用含用含0.50.5过乙酸的过乙酸的7070异丙醇消毒。此后，异丙醇消毒。此后，接种入接种入1010I00CFUI00CFU铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027(Pseudomonas aeruginosa)ATCC 9027，按，按步骤步骤2 2进行培养基的营养试验。进行培养基的营养试验。如果想要下载更多
12、的资源请百度一下药智论坛9.9.将消毒后的容器放在塑料袋中，置将消毒后的容器放在塑料袋中，置30303535培养培养7 7天。操作中应特别注意不要天。操作中应特别注意不要损坏损坏B B组无铝盖试样胶塞的密封性。组无铝盖试样胶塞的密封性。10.10.挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛11.11.将挑战试验用的试样培养将挑战试验用的试样培养7 7天，观察检查试样天，观察检查试样容器内培养基中微生物的生长情况。容器内培养基中微生物的生长情况。（1 1）对每一试样进行观察检查，有生长记作）对每一试样进行观察检查，有生长记作+ +，无生长
13、计作。无生长计作。（2 2）如果试样容器长菌，按）如果试样容器长菌，按2.3.1 2.3.1 方法确认生方法确认生长菌是挑战微生物长菌是挑战微生物铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌。（3 3）如果所有容器都不长菌，则从浸过菌悬液）如果所有容器都不长菌，则从浸过菌悬液的的A A 组取组取10 10 个试样，个试样，B B 组组5 5个试样，分别按个试样，分别按2 2进行培养基的营养检查。进行培养基的营养检查。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛四、结果评价四、结果评价（一）（一） 步骤三步骤三. .（二）（二）.2.2、步骤三、步骤三. .（四）（四）.8.8、步骤三步骤三. .（四）（四）.11.
14、11.（3 3）中进行的营养试验）中进行的营养试验都合格，试样的挑战试验才有效。都合格，试样的挑战试验才有效。（二）（二） 在挑战试验开始时，挑战用菌悬液浓在挑战试验开始时，挑战用菌悬液浓度度( (活菌数活菌数) )必须达到必须达到1 1106CFU/ml106CFU/ml。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（三）挑战试验中（三）挑战试验中A A 组和组和B B 组如有长菌，需记录组如有长菌，需记录长菌的试样数。在长菌的试样数。在A A 组中如出现长菌试验，则需组中如出现长菌试验，则需按下述要求作进一步调查。按下述要求作进一步调查。1.1.仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查容仔细去除
15、微生物生长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。器封口是否有缺损，造成微生物侵入。2.2.将观察到试样容器封口的缺陷，采用拍照或及将观察到试样容器封口的缺陷，采用拍照或及其他适当详细记录。其他适当详细记录。3.3.如果任何挑战试验中长菌的容器不是由于容器如果任何挑战试验中长菌的容器不是由于容器封口明显的物理性缺损所致，容器密封系统挑封口明显的物理性缺损所致，容器密封系统挑战试验作失败论处。战试验作失败论处。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛五、贮存稳定性五、贮存稳定性1.1.将剩余未经过挑战试验的容器放入箱中，保存将剩余未经过挑战试验的容器放入箱中，保存在室温，黑暗处。
16、在室温，黑暗处。2.2.在适当的时间间隔在适当的时间间隔( (如如12 12 个月、个月、24 24 个月、个月、36 36 个月等个月等) )取出一些容器，重复挑战试验。取出一些容器，重复挑战试验。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛六、恶劣条件下的成品密封性验证六、恶劣条件下的成品密封性验证（一）高温高湿储存（一）高温高湿储存将足够量的试样倒置放入恒温恒湿仪，设定温将足够量的试样倒置放入恒温恒湿仪，设定温度度33333535，相对湿度，相对湿度90%90%95%95%，分别于，分别于7 7天、天、1414天、天、2121天、天、2828天、天、4242天、天、5656天、天、9090天
17、各取天各取2020瓶瓶/ /支，按前述三支，按前述三. .（四）步骤进行微生物侵入（四）步骤进行微生物侵入试验。试验。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（二）长途运输（二）长途运输为考察长途运输的方式、途经环境和运输时间对为考察长途运输的方式、途经环境和运输时间对容器密封性的影响，可以考虑将培养基试样随成容器密封性的影响，可以考虑将培养基试样随成品一同运输，返回后，按照三品一同运输，返回后，按照三. .（一）（一）.3.3和和4 4的方的方法进行培养。法进行培养。在培养期内，当试验中发现任何试样长菌时，可在培养期内，当试验中发现任何试样长菌时，可判定长途运输对密封性产生不良影响，应查找具
18、判定长途运输对密封性产生不良影响，应查找具体原因，采取措施改进密封系统、包装方式或运体原因，采取措施改进密封系统、包装方式或运输方式，对改进后的措施反复验证，直至证明措输方式，对改进后的措施反复验证，直至证明措施有效，从而保证产品质量。施有效，从而保证产品质量。在培养期内，未发现试样长菌，可进行微生物侵在培养期内，未发现试样长菌，可进行微生物侵入试验，以进一步考察和评价运输对密封性的影入试验，以进一步考察和评价运输对密封性的影响。响。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（三）加压、减压法（三）加压、减压法在进行微生物侵入试验时，可采用加压或减压在进行微生物侵入试验时，可采用加压或减压装置，
19、通过加压或减压操作，增加菌液侵入容装置，通过加压或减压操作，增加菌液侵入容器的几率，在最差条件下进行验证，以证实密器的几率，在最差条件下进行验证，以证实密封件及其连接方式、索盖等设备和操作能够充封件及其连接方式、索盖等设备和操作能够充分满足最差条件下的容器密封要求。分满足最差条件下的容器密封要求。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛1.1.加压法加压法当容器倒置于菌悬液中，对菌悬液适当加压，当容器倒置于菌悬液中，对菌悬液适当加压，如容器密封性较差，按前述步骤操作后，培养如容器密封性较差，按前述步骤操作后，培养结果应为阳性。结果应为阳性。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛2 2减压法减
20、压法容器正立放置于减压装置内，进行减压操作，达容器正立放置于减压装置内，进行减压操作，达到规定压力后保持适当时间，在负压状态下抽入到规定压力后保持适当时间，在负压状态下抽入菌悬液，没过容器后逐渐恢复常压。如容器密封菌悬液，没过容器后逐渐恢复常压。如容器密封性较差，按前述步骤操作后，培养结果应为阳性。性较差，按前述步骤操作后，培养结果应为阳性。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛七、生产中的在线检漏七、生产中的在线检漏（一）适用范围（一）适用范围适用于采用灭菌柜进行灭菌操作的安瓿、输液适用于采用灭菌柜进行灭菌操作的安瓿、输液瓶或袋的无菌制剂。瓶或袋的无菌制剂。如果想要下载更多的资源请百度一下
21、药智论坛（二）检漏方法（二）检漏方法1.1.色水法色水法 将灭菌柜腔体内抽至一定的真空，形成负压，通将灭菌柜腔体内抽至一定的真空，形成负压，通入色水，恢复常压，药品出箱后，逐支进行人工入色水，恢复常压，药品出箱后，逐支进行人工和机器灯检，如药品颜色异常，则为泄露，予以和机器灯检，如药品颜色异常，则为泄露，予以剔除。中药注射剂多为浅黄色至棕红色，所以不剔除。中药注射剂多为浅黄色至棕红色，所以不宜选择暖色的染料调制色水，多使用蓝色等冷色宜选择暖色的染料调制色水，多使用蓝色等冷色调的染料调制色水。对于颜色较深的中药注射剂调的染料调制色水。对于颜色较深的中药注射剂也有不使用色水，而直接使用纯化水充当色
22、水的也有不使用色水，而直接使用纯化水充当色水的做法，操作与前述一致，如果药品颜色变浅，则做法，操作与前述一致，如果药品颜色变浅，则说明泄露，予以剔除。说明泄露，予以剔除。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛 2 2抽真空法抽真空法 将药品倒置装入灭菌柜，灭菌后将腔体抽真空将药品倒置装入灭菌柜，灭菌后将腔体抽真空至一定程度，保持一定时间的负压，取出药品，至一定程度，保持一定时间的负压，取出药品，逐支进行人工和机器灯检，如装量减少，则说逐支进行人工和机器灯检，如装量减少，则说明泄露，予以剔除。明泄露，予以剔除。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛（三）验证方法（三）验证方法挑战性试验。制作
23、一定数量的不同程度泄露的挑战性试验。制作一定数量的不同程度泄露的药品，如轻微泄露药品，如轻微泄露10%10%，中度泄露，中度泄露10%10%，严重泄，严重泄露露10%10%，完好，完好70%70%。将全部样品编号，放入灭菌。将全部样品编号，放入灭菌柜灭菌，采用色水法或抽真空法进行检漏，分柜灭菌，采用色水法或抽真空法进行检漏，分别统计不同泄露程度药品的剔除率及总剔除率，别统计不同泄露程度药品的剔除率及总剔除率，剔除率大于剔除率大于1/10001/1000的为验证失败，在线检漏方的为验证失败，在线检漏方法无效。重新设计、制定检漏方法。法无效。重新设计、制定检漏方法。如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛谢谢！谢谢！如果想要下载更多的资源请百度一下药智论坛
