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1、培养基配方培养基配方KHKH2 2POPO4 41.4g1.4gNaNa2 2HPOHPO4 42.1g2.1gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2g0.2g葡萄糖葡萄糖10.0g10.0g尿素尿素1.0g1.0g琼脂琼脂15.0g15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL1000mL在微生物学中，将允许特定种在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。其他种类微生物生长的培养基。选择培养基选择培养基选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞.使之进行繁殖所用的培养
2、基,称为选择培养基. 加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等分离酵母菌、霉菌等真菌真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物 1 1直接计数法：直接计数法：最常用最常用显微镜直接计数法显微镜直接计数法。先将待测样品制成悬液，然后取一先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计
3、据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。算出单位体积内的微生物总数。测定微生物数量的方法：测定微生物数量的方法：背景知识背景知识2 2间接计数法：间接计数法：最常用最常用稀释平板计数法稀释平板计数法。土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数2 2实验设计实验设计土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中某样品细菌的分离与计数土壤中某样品细菌的分离与计数从肥沃、湿润的土壤中取样。从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土先铲去表层土3cm3cm左右，再取样，将左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。样品装入事先准备好的信封
4、中。实验步骤实验步骤1 1土壤取样土壤取样制备制备5 5个牛肉膏蛋白胨培养基和个牛肉膏蛋白胨培养基和1515个选择培养基，准备好个选择培养基，准备好无菌试管和无菌试管和移液管移液管。实验步骤实验步骤2. 2.制备培养基制备培养基制备制备5 5个牛肉膏蛋白胨培养基和个牛肉膏蛋白胨培养基和1515个选择培养基，准备好个选择培养基，准备好无菌试管和无菌试管和移液管移液管。 注：每个稀释度下需要注：每个稀释度下需要3 3个选择培个选择培养基，养基，1 1个牛肉膏蛋白胨培养基。选个牛肉膏蛋白胨培养基。选用稀释倍数为用稀释倍数为10103 310107 7的稀释液。的稀释液。实验步骤实验步骤2. 2.制备
5、培养基制备培养基为什么分离不同的微生物为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？用的稀释范围相同吗？ 因为土壤中各类微生物的数量因为土壤中各类微生物的数量( (单单位：株位：株/kg)/kg)是不同的，是不同的，例如在干旱土壤例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为数约为21852185万，放线菌数约为万，放线菌数约为477477万，万，霉菌数约为霉菌数约为23.123.1万。万。因此，为获得
6、不同因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，进行分离，同时还应当有针对性地提供同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。选择培养的条件。测定土壤中细菌的数量，一般选测定土壤中细菌的数量，一般选用用10104 4、10105 5和和10106 6倍的稀释液进行平板倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用培养；测定放线菌的数量，一般选用10103 3、10104 4和和10105 5倍稀释液；测定真菌的倍稀释液；测定真菌的数量，一般选用数量，一般选用10102 2、10103 3和和10104 4倍稀释倍稀释液液。注：注： 样品的稀释样
7、品的稀释将将10g10g土样加入盛有土样加入盛有90mL90mL无菌生理无菌生理盐水的锥形瓶中盐水的锥形瓶中, ,充分摇匀，吸取上清液充分摇匀，吸取上清液1mL1mL，转移至盛有，转移至盛有9mL9mL水的无菌试管中，水的无菌试管中，依次等比稀释至依次等比稀释至10107 7稀释度，并按照由稀释度，并按照由10107 7至至10103 3稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取0.1mL0.1mL进行进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。序涂布平板，不必更换移液管。实验步骤实验步骤3. 3.微生物的培养与观察微生物的培养与观察将涂布
8、好的培养皿放在将涂布好的培养皿放在3030下下培养。比较牛肉膏培养基和选择培培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。好记录。挑选选择培养基中不同形态的挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。观察能否变红。不同种类的微生物，往往需要不不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般同的培养温度和培养时间。细菌一般在在30373037的温度下培养的温度下培养12d12d；放线；放线菌一般在菌一般在25282528的温度下培养的温度下培养57d57d；而霉菌一般在；而霉菌
9、一般在25282528的温度下培的温度下培养养34d34d。注：注：一般来说，在一定的一般来说，在一定的培养条件下培养条件下( (相同的培养相同的培养基、温度及培养时间基、温度及培养时间) )，同种微生物表现出稳定同种微生物表现出稳定的菌落特征。的菌落特征。EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落生紫色带金属光边的菌落当菌落数目稳定时，选取菌落数当菌落数目稳定时，选取菌落数在在3030030300的平板进行计数。在同一稀的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对释度下，至少对3 3个平板进行重复计数，个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的然后
10、求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。稀释度计算出样品中细菌的数目。实验步骤实验步骤4. 4.细菌的计数细菌的计数每克土壤样品菌数每克土壤样品菌数 =某稀释倍数的某稀释倍数的菌落平均数菌落平均数 稀释倍数稀释倍数 细菌培养时细菌培养时所用的稀释液体积所用的稀释液体积实验录像 一一 无菌操作无菌操作1. 1.取土用的小铁铲的盛土样的信封在取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。使用前都需要灭菌。2. 2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3. 3.在稀释土壤溶液的过程中
11、，每一步在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。都要在火焰旁操作。操作提示操作提示 二二 做好标记做好标记注明培养基种类、培养日期、平板注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。培养样品的稀释度等。 三三 规划时间规划时间1. 1.某同学在稀释倍数为某同学在稀释倍数为10106 6的培养基的培养基中测得平板上菌落数的平均数为中测得平板上菌落数的平均数为234234，那，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为所用稀释液的体积为0.1ml0.1ml）()()A.2.34A.2.3410108 8B.2.34B.2.3410109 9
12、C.234C.234D.23.4D.23.4练一练练一练1. 1.某同学在稀释倍数为某同学在稀释倍数为10106 6的培养基的培养基中测得平板上菌落数的平均数为中测得平板上菌落数的平均数为234234，那，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为所用稀释液的体积为0.1ml0.1ml）()()A.2.34A.2.3410108 8B.2.34B.2.3410109 9C.234C.234D.23.4D.23.4练一练练一练2. 2.用稀释涂布平板法来统计样品中用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比活菌的数目，其结果与实际值相比
13、（ ）A.A.比实际值高比实际值高B. B.比实际值低比实际值低C.C.和实际值一致和实际值一致D.D.比实际值可能高也可能低比实际值可能高也可能低2. 2.用稀释涂布平板法来统计样品中用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比活菌的数目，其结果与实际值相比（ ）A.A.比实际值高比实际值高B. B.比实际值低比实际值低C.C.和实际值一致和实际值一致D.D.比实际值可能高也可能低比实际值可能高也可能低下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A.KHA.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H
14、2 2O O、葡萄糖、尿素、琼脂、水葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KHB.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、葡萄糖、琼脂、水葡萄糖、琼脂、水C.KHC.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、尿素、琼脂、水尿素、琼脂、水D.KHD.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水练一练练一练下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是下列能选择出分解尿素的细菌
15、的培养基是A.KHA.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、葡萄糖、尿素、琼脂、水葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KHB.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、葡萄糖、琼脂、水葡萄糖、琼脂、水C.KHC.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、尿素、琼脂、水尿素、琼脂、水D.KHD.KH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4.7H.7H2 2O O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水练一练练一练1关于灭菌和消毒的不正确的理解是A消毒和灭菌实质上是相同的 B灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子C接种环用烧灼的方法灭菌 D常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法A A2.将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是（ ）A.对比观察培养基有没有被微生物利用 B.对比分析培养基上是否生有杂菌C.没必要放入未接种的培养基 D.为了下次接种时再使用 BB3在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为（ ）溶化 调pH 加棉塞 包扎 培养基的分装 称量A BCDB B
