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1、巩固练习1 1、培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气所、培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气所采用的灭菌、消毒方法依次是采用的灭菌、消毒方法依次是( ) ( ) 化学消毒化学消毒 灼烧灭菌灼烧灭菌 干热灭菌干热灭菌 紫外线灭菌紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法巴氏消毒法A A B B C C D D2 2、获得纯净培养物的关键是、获得纯净培养物的关键是 ( )( )将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基等进行灭菌等进行灭菌 接种纯种细菌接种纯种细菌 适宜环境条件下培养适宜环境条件下培养 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵巩固
2、练习成分成分含量含量成分成分含量含量NaNONaNO3 33 g3 gFeSOFeSO4 40.01 g0.01 gK K2 2HPOHPO4 41 g1 g(CH(CH2 2O)O)30 g30 g琼脂琼脂15 g15 gH H2 2O O1 000 ml1 000 mlMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.5 g0.5 g青霉素青霉素0.10.1万单位万单位3 3、下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：、下表所示为某微生物培养基的配方，请回答： （1 1）物理性质，该培养基属于）物理性质，该培养基属于_培养基。依用培养基。依用途划分，则属于途划分，则属于_培养基。培养基。根据培养
3、基原料，所培养微生物的同化作用的类型根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型是是_。（异养型。（异养型/ /自养型）自养型）固体固体选择选择异养型异养型纯化大肠杆菌1、本实验所用的培养基是、本实验所用的培养基是牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基2、本实验可分成、本实验可分成配制培养基配制培养基和和纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌两个阶段。两个阶段。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算： 根据配方比例，计算配制根据配方比例，计算配制100mL100mL培养基的用量培养基的用量2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：将各成分加水溶解并定容至将各成分加水溶解并定容至100mL10
4、0mL。4.4.灭菌：灭菌：培养基、培养皿培养基、培养皿5.5.倒平板：倒平板：1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至定容至1000mlNaCl5g蛋白胨蛋白胨10g牛肉膏牛肉膏5g琼脂琼脂20.0g思考思考3 3：在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，：在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？动作要迅速，原因是什么？ （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基防止牛肉膏吸收空气中的水分防止牛肉膏吸收空气中的水分思考思考4 4：溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么：溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？ 防止琼脂糊底
5、而导致烧杯破裂防止琼脂糊底而导致烧杯破裂5.倒平板待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作在火焰旁右手拿在火焰旁右手拿 _，左手，左手_._. 锥形瓶锥形瓶拔出棉塞拔出棉塞5.倒平板待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作锥形瓶的瓶口锥形瓶的瓶口_。迅速通过火焰迅速通过火焰5.倒平板待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作左手将培养皿左手将培养皿_,_,右手右手_,_,立刻盖上皿盖。立刻盖上皿盖。打开一条缝隙打开一条缝隙将培养基倒入培养皿将培养基倒入培养皿5.倒平板待培养基冷却至50左右时在酒精灯火焰附近操作待平板冷却凝固后，待平板冷却凝固后，将平板将平板_。倒过来放置倒过来放置5
6、.倒平板思考思考5 5：锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？：锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 消灭瓶口杂菌，防止杂菌感染培养基。消灭瓶口杂菌，防止杂菌感染培养基。思考思考6 6：倒平板的目的是什么？：倒平板的目的是什么？ 防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。思考思考7 7：若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培：若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？养微生物？为什么？ 不能，空气中的杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染不能，空气中的杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内的培养基。皿内的培养基。二、纯化大肠杆菌
7、1.1.平板划线法平板划线法用带有微生物的用带有微生物的接种环接种环在在固固体体培养基表面通过培养基表面通过连续划线连续划线而而纯化分离微生物的一种方法。纯化分离微生物的一种方法。 1.1.将将接种环接种环在酒精在酒精灯火焰上灼烧直至灯火焰上灼烧直至烧红烧红 2.2.在酒精灯火焰旁冷却接在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。菌种试管的棉塞。二、纯化大肠杆菌1.1.平板划线法平板划线法3.3.将菌种试管口通过火焰达将菌种试管口通过火焰达到到消灭试管口杂菌消灭试管口杂菌的目的的目的 4.4.将冷却的接种环伸入到将冷却的接种环伸入到菌液中沾取一环菌液菌液中沾
8、取一环菌液 二、纯化大肠杆菌1.1.平板划线法平板划线法5.5.将菌种试管口再次通过火焰将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞后塞上棉塞 6.6.将皿盖打开一条缝隙，把接种将皿盖打开一条缝隙，把接种环环伸入平板内划伸入平板内划3 35 5条平行线条平行线，盖上皿盖，不要划破培养基。盖上皿盖，不要划破培养基。 二、纯化大肠杆菌1.1.平板划线法平板划线法7.7.灼烧接种环，冷灼烧接种环，冷却后从却后从第一区划线第一区划线末端开始向第二区末端开始向第二区域内域内划线。重复上划线。重复上述过程，完成三、述过程，完成三、四、五区域内划线。四、五区域内划线。注意不要将第注意不要将第五区五区的划线与第一区划的
9、划线与第一区划线相连。线相连。 8.8.将平板将平板倒置倒置放在培养箱中放在培养箱中培养培养 思考思考8 8：取菌种前灼烧接种环的目的是什么？：取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 二、纯化大肠杆菌消灭接种环上的微生物。消灭接种环上的微生物。为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 消灭接种环上的残留菌种。消灭接种环上的残留菌种。取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？ 防止高温杀死菌种防止高温杀死菌种最后灼烧接种环的目的是？最后灼烧接种环的目的是？防止细菌污染环境和操作者防止细菌污染环境和操作者在第在第1 1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？次划线后都从上次划线末端开始的目的是？获得由单个细菌形成的标准菌落获得由单个细菌形成的标准菌落
