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1、实验实验7.97.9体外孵育的小白鼠肝脏切片对体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用戊巴比妥钠的代谢作用 【目的】 1. 通过肝组织与戊巴比妥钠体外孵育，以睡眠开始及维持时间为指标，了解肝脏对戊巴比妥钠的代谢作用。 2. 通过将戊巴比妥钠分别与损伤肝脏或正常肝脏体外孵育不同时间，进一步分析肝药酶活性和孵育时间长短对药效的影响。 【原理】 肝组织内含有细胞色素P450混合功能氧化酶，致戊巴比妥钠代谢失活，影响其催眠作用。 【器材与药品】 剪刀、手术剪、无齿小镊、培养皿、10ml试管、10ml离心管、试管架、恒温水浴箱、离心机、天平秤、10ml移液管、0.25ml注射器、玻璃搅棒、95氧气
2、和5二氧化碳混合气体、0.4戊巴比妥钠溶液、硫代乙酰胺（TAA）。【实验动物】 小白鼠、体重1822g。【实验步骤】 1取离心管及试管各5支，分别标记为A、B、C、D、E管。 2颈椎脱臼法处死小鼠，用镊子小心分离出肝脏，置于生理盐水中，用滤纸吸干水份，去除胆囊，然后将肝脏置于培养皿中，分别称取1g置于A、B离心管口剪碎。同法取TAA损伤肝脏小鼠，各取1g置于C、D离心管口剪碎。 3 A、 B、 C、 D、 E各管准确加入 0.4戊巴比妥钠生理盐水溶液5ml（每克肝组织加入5ml），同时置于37恒温水浴中孵育。 A、C各 30分钟， B、D、E各 1小时，培养期间每 10分钟通入气体一次。4将上
3、述孵育液离心（3000rpm，5分钟），然后转移上清液于相应的A、B、C、D、E试管内。5取小鼠10只，称重后均分为A、B、C、D、E五组，按0.1ml/10g剂量分别腹腔注射相应A、B、C、D、E试管内的溶液。 管号 处理 潜伏期（min） 持续时间（min）A 正常肝/30minB 正常肝/60minC 损伤肝/30minD 损伤肝/60minE 未处理/60min体外孵育肝切片对戊巴比妥钠作用的影响【注意事项】 1肝组织分离操作应迅速，以免延误时间影响药酶活性。 2肝切片孵育过程中应经常用玻璃棒搅动离心管中的内容物，以使肝切片与药物充分发挥作用。 3通气时肝培养液内气泡需小而均匀，勿超过培养液的液面。【讨论】 1.戊巴比妥钠经肝、肾、损坏肝组织孵育后，分别对小鼠的睡眠发生什么影响？为什么？ 2.药物在肝脏中的转化有哪些类型？戊巴比妥属何种类型？ 3.戊巴比妥在肝内的代谢，对药物的相互作用有何影响？
