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1、蛋白蛋白质的性的性质实验一一 蛋白蛋白质及氨基酸的及氨基酸的呈色反响呈色反响一、实验目的了解蛋白质的根本构造单位及主要衔接方式了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反响原理学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验原理双缩脲反响两分子尿素加热到180左右时，生成双缩脲并放出一分子氮，双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反响称为双缩脲反响蛋白质分子中有肽键，其构造与双缩脲类似，也能发生此反响，因此该反响可用于蛋白质的定性或定量测定v茚三酮反响v一切的-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反响生成蓝紫色物质，除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反响产生黄色物质v该反响非常灵敏，是一种常用的氨基酸定量
2、测定方法v该反响分为两步：第一步是氨基酸被氧化构成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被复原成复原型茚三酮；第二步是所构成的复原型茚三酮结合另一分子水合茚三酮和氨缩合生成有色物质水合茚三酮蓝紫色v黄色反响Pauly反响v含有苯环构造的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步构成深橙色的硝醌酸钠v多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反响，苯丙氨酸不易硝化，需参与少量浓硫酸才有黄色反响硝基酚(黄色) 邻硝醌酸钠(橙黄色)v考马斯亮蓝反响v考马斯亮蓝G-250具有红色和蓝色两种颜色，在酸性溶液中其以游离态存在，呈棕红色；当它与蛋白质经过疏水作用结合后变为蓝
3、色v考马斯亮蓝G-250染色灵敏度比氨基黑高3倍，反响速度快，约在2min左右时间内到达平衡，室温1h内坚持稳定v在0.011.0mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A505nm值成正比，所以常用来测定蛋白质的含量三、实验器材试管及试管架试管夹酒精灯滴管电炉滤纸四、实验资料与试剂尿素10NaOH溶液1CuSO4溶液2卵清蛋白溶液0.5甘氨酸溶液0.1茚三酮水溶液0.1茚三酮乙醇溶液鸡蛋清溶液头发指甲0.5苯酚溶液浓硝酸0.3色氨酸溶液0.3酪氨酸溶液考马斯亮蓝G-250溶液五、实验操作双缩脲反响取少量尿素结晶，放入枯燥的试管，微火加热使尿素熔化，熔化的尿素开场硬化时停顿加热，尿素放出氮，构成双缩脲冷
4、却后，参与1mL 10NaOH溶液，振荡混匀，再参与1滴 1CuSO4溶液，振荡，察看实验景象向另一支试管中参与约1mL 2卵清蛋白溶液和约2mL 10NaOH溶液，摇匀，再参与2滴1CuSO4溶液，随加随摇，察看实验景象茚三酮反响取2支试管，分别参与2卵清蛋白溶液和0.5甘氨酸溶液各1mL，再各加0.5mL 0.1茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热12min，察看实验景象在一块小滤纸上滴一滴0.5甘氨酸溶液，风干后，在原处滴一滴0.1茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，察看实验景象v黄色反响Pauly反响v取6支试管，按下表参与各试剂：察看各管的景象，假设反响较慢，可略微放置或用微火加热待各管出现黄色后，于室温下逐滴参与10NaOH溶液至碱性，察看颜色变化v考马斯亮蓝反响v取2支试管，按下表参与各试剂：察看实验景象，并解释六、实验思索经过本实验他掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法？它们的原理是什么？
