长期毒性作用及其试验方法

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1、 第十四章第十四章长期毒性作用及其试验方法长期毒性作用及其试验方法 long-term toxicity impact and test method 7/24/20241 第一节第一节 基本概念和目的基本概念和目的 第二节第二节 试验设计原则及方法试验设计原则及方法7/24/20242 第一节第一节基基 本本 概概 念念 和和 目目 的的7/24/20243 长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量长期毒性作用是指药物以一定的等级剂量连续连续多日多日给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种给予受试动物所产生的有害作用。为观察这种有害作用而设计的毒理学试验称之为长期毒性试验。有害作用而设计的毒理学

2、试验称之为长期毒性试验。一、定义一、定义 急性毒性试验急性毒性试验 是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或2424小时内小时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的毒性反应。多次给予受试药物后，一定时间内所产生的毒性反应。7/24/20244123给给 药药 的的 期期 限限 不不 同同长期毒性试验与急性毒性试验长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别的根本差别7/24/20245根据给药期限的长短，可分为：根据给药期限的长短，可分为：n亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验给药期限不超

3、过给药期限不超过90天天 或不超过试验动物平均寿命的或不超过试验动物平均寿命的10%；n慢性毒性试验慢性毒性试验给药期限超过给药期限超过90天天 或超过试验动物平均寿命的或超过试验动物平均寿命的10%；n终生毒性试验终生毒性试验n数代毒性试验数代毒性试验7/24/20246123给给 药药 的的 期期 限限 不不 同同给给 药药 的的 剂剂 量量 范范 围围 不不 同同长期毒性试验与急性毒性试验长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别的根本差别7/24/20247蓄积作用蓄积作用 (accumulation action)(accumulation action) 当较长时间连续、反复给药时，或者

4、说给药的当较长时间连续、反复给药时，或者说给药的时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出时间间隔和剂量超过机体消除药物的能力，就会出现药物进入机体的速度现药物进入机体的速度 ( (或总量或总量) ) 超过排除的速度超过排除的速度 ( (或总量或总量) ) 的现象，此时药物就有可能在体内逐渐增的现象，此时药物就有可能在体内逐渐增加并贮存起来，即蓄积作用。加并贮存起来，即蓄积作用。 7/24/20248 蓄积作用的表现形式蓄积作用的表现形式作用量积蓄作用量积蓄功能性蓄积功能性蓄积7/24/20249123给给 药药 的的 期期 限限 不不 同同给给 药药 的的 剂剂 量量 范范 围围 不不 同

5、同观观 察察 的的 毒毒 效效 应应 不不 同同长期毒性试验与急性毒性试验长期毒性试验与急性毒性试验的根本差别的根本差别7/24/202410急性毒性试验是以死亡为观察终点的急性毒性试验是以死亡为观察终点的质反应质反应过程过程长期毒性试验重点观察体重、血液生化等长期毒性试验重点观察体重、血液生化等量反应量反应指标（量变指标（量变质变质变）7/24/202411二、目的与意义二、目的与意义7/24/2024121预测受试物可能引起的临床不良反应预测受试物可能引起的临床不良反应2判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织判断受试物反复给药的毒性靶器官或组织提示临床试验中需重点监测的指标提示临床试验中需重

6、点监测的指标43推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围为临床试验中的解毒或解救措施提供参考为临床试验中的解毒或解救措施提供参考5长期毒性试验的目的7/24/202413第二节第二节试试 验验 设设 计计 原原 则则 及及 方方 法法7/24/202414一、一般原则和要求一、一般原则和要求基本原则基本原则全面、严谨、合理全面、严谨、合理整体性整体性随机随机、对照、重复、对照、重复7/24/202415一、一般原则和要求一、一般原则和要求基本原则基本原则整体性整体性长期毒性试验不能与药效学、药代动长期毒性试验不能与药效学、药代动力性和其他毒理

7、学研究割裂，试验设力性和其他毒理学研究割裂，试验设计应充分考虑其他药理毒理研究的试计应充分考虑其他药理毒理研究的试验设计和研究结果。长期毒性试验的验设计和研究结果。长期毒性试验的结果应该力求与其他药理毒理试验结结果应该力求与其他药理毒理试验结果互为印证、说明和补充。果互为印证、说明和补充。7/24/202416一、一般原则和要求一、一般原则和要求n n选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物n n三个剂量三个剂量三个剂量三个剂量n n给药途径应与临床拟用途径相同给药途径应与临床拟用途径相同给药途径应与临床拟用途径相同给药途径应与临床拟用途径相同基本要求基本要求7/24/

8、202417一、一般原则和要求一、一般原则和要求 至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。n n选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物选用两种实验动物基本要求基本要求7/24/202418一、一般原则和要求一、一般原则和要求n n三个剂量三个剂量三个剂量三个剂量剂量至少分为高、中、低三个档次。剂量至少分为高、中、低三个档次。剂量至少分为高、中、低三个档次。剂量至少分为高、中、低三个档次。高剂量组应能充分反映药物的毒性，高剂量组应能充分反映药物的毒性，高剂量组应能充分反映药物

9、的毒性，高剂量组应能充分反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。低剂量组不出现毒性反应。低剂量组不出现毒性反应。低剂量组不出现毒性反应。同时设一溶剂同时设一溶剂同时设一溶剂同时设一溶剂 ( ( 或赋形剂或赋形剂或赋形剂或赋形剂 ) ) 对照组或对照组或对照组或对照组或已知药物毒性对照组。已知药物毒性对照组。已知药物毒性对照组。已知药物毒性对照组。基本要求基本要求7/24/202419一、一般原则和要求一、一般原则和要求n n给药途径应与临床拟用途径相同给药途径应与临床拟用途径相同给药途径应与临床拟用途径相同给药途径应与临床拟用途径相同 口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为每口服给药大鼠一般常

10、用灌胃，灌胃的容量为每天天12ml/100g，也可将受试药物混在饲料或水中给予，也可将受试药物混在饲料或水中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服入。但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服入。 静脉注射大鼠时可采用腹腔或皮下代替，各剂静脉注射大鼠时可采用腹腔或皮下代替，各剂量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。基本要求基本要求7/24/202420理想动物的标准：理想动物的标准：n对受试物的生物转化与人体相近；对受试物的生物转化与人体相近；n对受试物敏感；对受试物敏感；n已有大量历史对照数据。已有大量历史对照数据。二、实验动物二、

11、实验动物 7/24/202421我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.1.种类及品系种类及品系二、实验动物二、实验动物 7/24/202422我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.1.种类及品系种类及品系二、实验动物二、实验动物 Wistar大鼠SD大鼠 7/24/202423我国药

12、政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.1.种类及品系种类及品系二、实验动物二、实验动物 一类新药：Beagle犬 二类新药：杂种狗 7/24/202424我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物我国药政部门规定的基本原则是选用两种动物, , 一种为啮一种为啮齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。齿类，首选大白鼠；另一种为非啮齿类，首选狗。1.1.种类及品系种类及品系二、实验动物二、实验动物 在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系

13、统在吸入给药时，猴是首先推荐的动物，因为它在呼吸系统的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。的解剖学和生理学方面比其它动物更接近人类。如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。7/24/2024257/24/2024267/24/202427 Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强 缺点：价格昂贵7/24/2024282. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。二、实验动物二、实验动物 7/24/202

14、4292. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄二、实验动物二、实验动物 长期毒性试验的给药期限较长；长期毒性试验的给药期限较长；1原因原因：处于生长发育阶段的动物对药物处于生长发育阶段的动物对药物的毒性反应较敏感；的毒性反应较敏感；2年龄较大的动物反应性降低年龄较大的动物反应性降低, , 存存在许多自发性疾病干扰试验结果。在许多自发性疾病干扰试验结果。3一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。7/24/202430n啮啮齿类动物最好在断奶后不久即开始给药齿类动物最好在断奶后不久即开始给药 大鼠大鼠起始周龄要求在起始周龄要求在 49周龄；周龄；

15、 n犬犬的起始月龄为的起始月龄为49月龄，一般不超过月龄，一般不超过 12 月月 龄；龄；如选用杂种狗，起始年龄可稍大些。如选用杂种狗，起始年龄可稍大些。二、实验动物二、实验动物 2. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄7/24/202431n起始体重应在体重均值起始体重应在体重均值 20% 的范围内。的范围内。二、实验动物二、实验动物 2. 2. 起始月起始月( (周周) )龄龄7/24/2024323. 3. 性别及数量性别及数量 （1 1）性别）性别二、实验动物二、实验动物 一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中一般来讲是兼用两种性别的动物，每个剂量组中 雌雄性别的动物数必须一致

16、。雌雄性别的动物数必须一致。7/24/202433 在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖细胞在特殊情况下如药物对雄性（或雌性）生殖细胞的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物对雌雄两的毒效应已确知，或者急性试验已证明药物对雌雄两性动物的毒性有明显差别时，就应主要选用敏感性别性动物的毒性有明显差别时，就应主要选用敏感性别的动物进行试验。的动物进行试验。 二、实验动物二、实验动物 3. 3. 性别及数量性别及数量 （1 1）性别）性别7/24/202434超过超过 90 天的试验天的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各只（雌雄各 20 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组

17、 810 只（雌雄各只（雌雄各 45 只）。只）。 90 天以内的试验天以内的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少20只（雌雄各只（雌雄各 10 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 6 只（雌雄各只（雌雄各 3只）；只）；二、实验动物二、实验动物 3. 3. 性别及数量性别及数量 （2 2）数量）数量7/24/202435超过超过 90 天的试验天的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少 40 只（雌雄各只（雌雄各 20 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 810 只（雌雄各只（雌雄各 45 只）。只）。 90 天以内的试验天以内的试验 啮齿类动物每组至少啮齿类动物每组至少2

18、0只（雌雄各只（雌雄各 10 只）；只）； 非啮齿类每组非啮齿类每组 6 只（雌雄各只（雌雄各 3只）；只）；二、实验动物二、实验动物 3. 3. 性别及数量性别及数量 （2 2）数量）数量指导原则指导原则：一般大鼠为雌、雄各：一般大鼠为雌、雄各30只，只， Beagle犬或猴各犬或猴各36只。只。7/24/202436n恢复期观察的动物数；恢复期观察的动物数；n给药期的长短，过长，试验过程中的自然死亡动物数。给药期的长短，过长，试验过程中的自然死亡动物数。注意注意7/24/2024374. 4. 饲养管理饲养管理 严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素是

19、非常重要的。是非常重要的。二、实验动物二、实验动物 7/24/202438酮症酸中毒酮症酸中毒室内温度室内温度饲料或饲料配方饲料或饲料配方湿湿 度度光光 照照通风条件通风条件饮水质量饮水质量环境因素环境因素环境因素环境因素4. 4. 饲养管理饲养管理二、实验动物二、实验动物 7/24/202439光光 照照通风条件通风条件酮症酸中毒酮症酸中毒室内温度室内温度饲料或饲料配方饲料或饲料配方湿湿 度度饮水质量饮水质量环境因素环境因素环境因素环境因素4. 4. 饲养管理饲养管理二、实验动物二、实验动物 适宜温度为适宜温度为 1826 。 相对湿度为相对湿度为 40%70%。光照宜持续光照宜持续 12

20、h明亮，明亮，12 h黑暗。黑暗。通风条件良好。通风条件良好。所用饲料应符合动物的营养标准。所用饲料应符合动物的营养标准。7/24/202440光光 照照通风条件通风条件酮症酸中毒酮症酸中毒室内温度室内温度饲料或饲料配方饲料或饲料配方湿湿 度度饮水质量饮水质量环境因素环境因素环境因素环境因素4. 4. 饲养管理饲养管理二、实验动物二、实验动物 啮齿类动物啮齿类动物雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过5 5只只7/24/202441酮症酸中毒酮症酸中毒4. 4. 饲养管理饲养管理二、实验动物二、实验动物 犬犬光光 照照通风条件通风条件酮症酸中毒酮症酸中毒室内温度室内温

21、度饲料或饲料配方饲料或饲料配方湿湿 度度饮水质量饮水质量环境因素环境因素环境因素环境因素单笼饲养，定量喂食。单笼饲养，定量喂食。 Beagle 犬实验前至少驯养犬实验前至少驯养 12 周周; 杂种狗应先检疫，驱虫。杂种狗应先检疫，驱虫。7/24/202442n试验前观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精试验前观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精神状况、心电图，检测心、肝、肾功能神状况、心电图，检测心、肝、肾功能2 2次；次；n选择正常、健康、雌性无孕的动物作为受试动物。选择正常、健康、雌性无孕的动物作为受试动物。7/24/202443 雪貂雪貂作为实验动物的资料介绍，还在本世纪，虽作为实验动

22、物的资料介绍，还在本世纪，虽然它还未被广泛应用，但它对人类健康的贡献无疑是然它还未被广泛应用，但它对人类健康的贡献无疑是很重要的（很重要的（北美常用北美常用）。）。 7/24/202444 雪貂是食肉类动物，属于鼬科。经驯化供实验的雪貂是食肉类动物，属于鼬科。经驯化供实验的雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲肠、汗腺，雄雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲肠、汗腺，雄貂缺乏前列腺。通常雪貂的实验和繁殖期为貂缺乏前列腺。通常雪貂的实验和繁殖期为5 5至至6 6年，年，而整个寿命约而整个寿命约1414年。雄貂体重可为雌貂的两倍。年。雄貂体重可为雌貂的两倍。 雪貂在早期用于传播病毒性疾病的研究，如犬瘟雪

23、貂在早期用于传播病毒性疾病的研究，如犬瘟和人类流感，对其它一些病毒性疫病，雪貂也提供了和人类流感，对其它一些病毒性疫病，雪貂也提供了独特的、合适的模型，如麻疹、疱疹性口炎，阿留申独特的、合适的模型，如麻疹、疱疹性口炎，阿留申病和牛鼻气管炎。雪貂已应用于病毒学、生殖生理、病和牛鼻气管炎。雪貂已应用于病毒学、生殖生理、药理学等研究，最近报导特殊适合毒理学试验。还可药理学等研究，最近报导特殊适合毒理学试验。还可作为小脑发育不全、流行性感冒等动物模型来研究人作为小脑发育不全、流行性感冒等动物模型来研究人类相应的疾病。类相应的疾病。 7/24/202445三、给药期限三、给药期限 按我国药政管理部门的要

24、求，长期毒性试验的按我国药政管理部门的要求，长期毒性试验的给药期限一般为临床疗程的给药期限一般为临床疗程的34倍时间。创新药品倍时间。创新药品试验周期应不少于试验周期应不少于90天，天， 超过超过180天的新药可以在天的新药可以在试验开始试验开始90天后，同时进行天后，同时进行I期临床试验。期临床试验。 创新药物是指具有自主知识产权专利的药物。创新药物是指具有自主知识产权专利的药物。相对于仿制药，创新药物强调化学结构新颖或新的相对于仿制药，创新药物强调化学结构新颖或新的治疗用途，在以前的研究文献或专利中，均未见报治疗用途，在以前的研究文献或专利中，均未见报道。道。 7/24/202446我国药

25、政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定 临床拟用临床拟用 毒性试验期限毒性试验期限 给药时间给药时间 啮齿类动物啮齿类动物 非啮齿类动物非啮齿类动物5 5天天 2 2周周 2 2周周2 2周周 1 1月月 1 1月月 2-42-4周周 3 3月月 3 3月月 1-31-3月月 6 6月月 6 6月月 3 3月月 6 6月月 9 9月月 7/24/202447我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定我国药政部门关于一般药物重复给药毒

26、性试验期限的规定我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定我国药政部门关于一般药物重复给药毒性试验期限的规定 临床拟用临床拟用 毒性试验期限毒性试验期限 给药时间给药时间 啮齿类动物啮齿类动物 非啮齿类动物非啮齿类动物5 5天天 2 2周周 2 2周周2 2周周 1 1月月 1 1月月 2-42-4周周 3 3月月 3 3月月 1-31-3月月 6 6月月 6 6月月 3 3月月 6 6月月 9 9月月 每天给药最好固定时间。每天给药最好固定时间。7/24/202448四、剂量水平的选择四、剂量水平的选择 三个剂量组是必不可少的：三个剂量组是必不可少的：n一个是足以引起明显的一个是足以

27、引起明显的毒性反应毒性反应的高剂量，但死亡的高剂量，但死亡率应控制在率应控制在 10% 以内；以内；n一个是不引起毒性作用的低剂量一个是不引起毒性作用的低剂量(一般为动物有效剂一般为动物有效剂量或临床治疗量的量或临床治疗量的23倍倍)；n为表明毒性作用的量为表明毒性作用的量效关系，在上述两个剂量之效关系，在上述两个剂量之间插入一个间插入一个(或多个或多个)中间剂量。中间剂量。 7/24/202449亚慢性毒性试验基础亚慢性毒性试验基础n最大剂量最大剂量：选择：选择9090天试验中体重增长不到天试验中体重增长不到10%10%的剂量；的剂量；n中剂量中剂量：1/41/4最大剂量；最大剂量；n低剂量

28、低剂量：1/81/8最大剂量。最大剂量。7/24/202450最高剂量组的基本要求最高剂量组的基本要求 仅出现轻度毒性，不改变试验动物的正常寿命，仅出现轻度毒性，不改变试验动物的正常寿命，或至少在给药的前四分之一时间内不影响动物的体或至少在给药的前四分之一时间内不影响动物的体质，外观无异常，可有血清酶活力的改变或轻度体重质，外观无异常，可有血清酶活力的改变或轻度体重增长抑制（增长抑制（10%）。）。7/24/202451 在选择合适的剂量时还应考虑到：在选择合适的剂量时还应考虑到： 药药物物在在体体内内的的生生物物蓄蓄积积作作用用。对对于于高高蓄蓄积积性性药药物物应应适适当当减减少少其其剂剂量

29、量，否否则则在在长长期期毒毒性性试试验验结结束束时时各各剂剂量均有可能出现毒性作用；量均有可能出现毒性作用； 药药物物是是否否有有可可能能被被特特殊殊的的酶酶所所“解解毒毒”或或“活活化化增毒增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。 药药物物在在消消化化道道中中的的稳稳定定性性。与与胃胃肠肠道道内内容容物物有有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。亲和性的药物，则应酌情增加剂量。 7/24/202452可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1 1）半数致死量（）半数致死量（LDLD5050）法）法 根据急性毒性的根据急性毒性的LD50值决定三个剂量。

30、一般在大鼠值决定三个剂量。一般在大鼠3个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采个月长期毒性试验中，高、中、低三个剂量可分别采用约用约LD50的的1/10、1/50和和1/100剂量，狗各剂量组可采用剂量，狗各剂量组可采用大鼠相应各组的大鼠相应各组的1/21/3剂量。剂量。7/24/202453可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 根据急性毒性试验所提供的相关信息，如毒性的根据急性毒性试验所提供的相关信息，如毒性的量量效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动物等，先效关系，毒性出现的剂量范围及敏感动物等，

31、先过渡到过渡到7 7天至天至2121天的短期蓄积性试验，再将获得的参数天的短期蓄积性试验，再将获得的参数外推于长期毒性试验。外推于长期毒性试验。7/24/202454急性毒性试验急性毒性试验蓄积毒性试验蓄积毒性试验和和/ /或或7 7天短期重复给药试验天短期重复给药试验9090天重复给药试验天重复给药试验180180天或更长期重复给药试验天或更长期重复给药试验7/24/202455可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 Traina法法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量第一步：确定大鼠亚急性毒性试

32、验的最高剂量 根据大鼠的急性毒性试验找出根据大鼠的急性毒性试验找出最大无症状剂量最大无症状剂量，再分别以该，再分别以该剂量剂量及其及其1/3和和1/10量给三组大鼠（雌雄各半）连续服药量给三组大鼠（雌雄各半）连续服药23周。周。（此剂量下的动物仅出现轻微的毒性反应，如食耗量略减，体重增长率此剂量下的动物仅出现轻微的毒性反应，如食耗量略减，体重增长率略慢等略慢等）7/24/202456可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 Traina法法 Traina法法 第一步：确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量第一步：

33、确定大鼠亚急性毒性试验的最高剂量 第二步：确定犬亚急性毒性试验的最高剂量第二步：确定犬亚急性毒性试验的最高剂量 以大鼠以大鼠亚急性毒性试验的最高剂量为起点亚急性毒性试验的最高剂量为起点，给狗单次服用，给狗单次服用，根据观察结果适当增减剂量（对数间隔），找出狗单次服药的最根据观察结果适当增减剂量（对数间隔），找出狗单次服药的最大无症状剂量，再分别以此剂量大无症状剂量，再分别以此剂量及其及其1/3和和1/10量给少数狗连续服量给少数狗连续服药药23周。周。7/24/202457可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验

34、过渡法 Traina法法 Homburger法法 选择一个剂量给雌雄各选择一个剂量给雌雄各5 5只大鼠，连续服药只大鼠，连续服药2 2周。周。 如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡；如果无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现死亡； 如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。如果第一个剂量就出现动物死亡，再成倍减少剂量，直至无死亡出现。7/24/202458可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 Traina法法 Homburger法法 选择一个剂量给雌雄各选择一个剂量给雌雄各5

35、5只大鼠，连续服药只大鼠，连续服药2 2周。周。 如果如果无动物死亡无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现，再成倍增加剂量，直至出现死亡死亡； 如果第一个剂量就出现如果第一个剂量就出现动物死亡动物死亡，再成倍减少剂量，直至，再成倍减少剂量，直至无死亡无死亡出现。出现。 以以无动物死亡无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTDMTD）。）。7/24/202459可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）

36、短期蓄积试验过渡法 Traina法法 Homburger法法 选择一个剂量给雌雄各选择一个剂量给雌雄各5 5只大鼠，连续服药只大鼠，连续服药2 2周。周。 如果如果无动物死亡无动物死亡，再成倍增加剂量，直至出现，再成倍增加剂量，直至出现死亡死亡； 如果第一个剂量就出现如果第一个剂量就出现动物死亡动物死亡，再成倍减少剂量，直至，再成倍减少剂量，直至无死亡无死亡出现。出现。 以以无动物死亡无动物死亡的剂量为最大非致死量，以首次出现动物的剂量为最大非致死量，以首次出现动物死亡的死亡的剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（剂量为最小致死剂量，求算最大耐受量（MTDMTD）。）。 MTD = lg MTD

37、 = lg-1-1(lg(lg最小致死剂量最小致死剂量+lg+lg最大非致死剂量最大非致死剂量)/2)/27/24/202460可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法 Traina法法 Homburger法法 Weil法法 取初断乳大鼠取初断乳大鼠3030或或4040只，随机分为只，随机分为34组，每组雌雄各组，每组雌雄各5 5只。连只。连续给药续给药7 7天。天。 观察死亡率、体重、肝肾指数和进食量的改变。找出观察死亡率、体重、肝肾指数和进食量的改变。找出7 7天药物天药物最小有效量（最小有效量（M

38、IEMIE）。）。 MIE 90 MIE 90天天 = MIE 7 = MIE 7天天7/24/202461可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（）药代动力学（MBS）法）法 根据药代动力学最大有效安全浓度（根据药代动力学最大有效安全浓度（MCDMCD）大鼠大鼠3个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别个月长期毒性试验时，低、中、高三个剂量可分别 采用大鼠的采用大鼠的1.0 、3.36.6 和和1020 MCD;狗狗一般可采用大鼠一般可采用大鼠1/21/3的剂量。的剂量。注意：国内应

39、用不多。注意：国内应用不多。7/24/202462可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（）药代动力学（MBS）法）法根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量根据大鼠急性毒性试验的最大耐受量(MTD)(MTD) ( (最大无症状剂量最大无症状剂量) )大鼠大鼠长期毒性试验的三个剂量分别为长期毒性试验的三个剂量分别为1、1/3及及1/10 MTD；狗和猴狗和猴可采用大鼠可采用大鼠1/21/3的剂量。的剂量。（4）最大耐受量（）最大耐受量（MTD）法）法注意：蓄积性大的药物参考价值小。注意：蓄积性

40、大的药物参考价值小。7/24/202463可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量（）半数致死量（LD50）法）法（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学（）药代动力学（MBS）法）法根据临床拟用剂量根据临床拟用剂量（3个月长期毒性试验）个月长期毒性试验） 大鼠大鼠低、中、高三个剂量可分别采用低、中、高三个剂量可分别采用50100倍、倍、2550倍和倍和 1020倍临床拟用剂量倍临床拟用剂量狗狗可分别采用可分别采用3050倍、倍、1525倍和倍和510倍临床拟用剂量倍临床拟用剂量猴猴可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量进行试验可采用与狗相近的剂量或略低于狗的剂量

41、进行试验（4）最大耐受量（）最大耐受量（MTD）法）法（5）临床拟用剂量（）临床拟用剂量（ACD）法）法7/24/202464可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学法（）药代动力学法（MBS法）法） 根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数根据人和动物的等效剂量比值，再按一定倍数扩大。扩大。（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法）（6）等效剂量法）等效剂量法7/24/202465不同不同动物的物的剂量折算系数量折算系数 动

42、物种属动物种属 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 猫猫 猴猴 狗狗 人人标准标准 K( K(剂量折算系数剂量折算系数) ) 1 1 7 7 64 64 124124 388388体重体重 K(kg K(kg体重剂量折算系数体重剂量折算系数) ) 1 1 0.62 0.62 0.37 0.37 0.30 0.30 任何任何 R( R(动物体型系数动物体型系数) ) 0.099 0.099 0.104 0.104 体重体重 W( W(标准体重标准体重kg)kg) 2 2 4 4 1212 7070注：有些资料记载的动物体型系数（注：有些资料记载的动物体型系数（R R）为此表中）为此表中R R 值

43、的值的1000 1000 倍，如小鼠倍，如小鼠R R 为为5959，大鼠，大鼠R R 为为9090，这不影响药物剂量的折算。这不影响药物剂量的折算。7/24/202466对于标准体重的动物：对于标准体重的动物： 每只用量（每只用量（mg/mg/只）只）D DB B D DA A K KB BK KA A千克体重剂量（千克体重剂量（mg/kgmg/kg）d dB B d dB B K KB BK KA AK KA A，K KB B，R RA A，R RB B 值由上表查找值由上表查找7/24/202467对于任何体重的动物：对于任何体重的动物： 每只用量（每只用量（mg/mg/只）只）D DB

44、B D DA A R RB B( (W WB B) )2/32/3R RA AW WA A千克体重剂量（千克体重剂量（mg/kgmg/kg）d dB B d dA AR RB B( (W WB B) )2/32/3R RA AW WA A式中式中D DB B、d dB B 分别是欲计算的分别是欲计算的B B 种动物的每只剂量及公斤体种动物的每只剂量及公斤体重剂量，重剂量，D DA A、d dA A 分别是已知分别是已知A A 种动物的每只剂量及公斤体种动物的每只剂量及公斤体重剂量，重剂量，W WA A、W WB B 是已知动物体重，是已知动物体重，R RA A、R RB B 是体型系数，可是体

45、型系数，可由上表查得由上表查得。 7/24/202468可供参考的具体方法可供参考的具体方法（1）半数致死量法（）半数致死量法（LD50法）法）（2）短期蓄积试验过渡法）短期蓄积试验过渡法（3）药代动力学法（）药代动力学法（MBS法）法）（4）最大耐受量法（）最大耐受量法（MTD法）法）（5）临床拟用剂量法（）临床拟用剂量法（ACD法）法）（6）等效剂量法）等效剂量法7/24/202469五五、给药方法、给药方法n长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床使用长期毒性试验的给药途径一般应尽量与预期临床使用的途径相一致。的途径相一致。n临床用药途径为静脉或肌注时，临床用药途径为静脉或肌注时，3

46、3个月及以上的试验个月及以上的试验，由于试验周期长大鼠给药有困难，可用腹腔或皮下注由于试验周期长大鼠给药有困难，可用腹腔或皮下注射代替。射代替。n临床用药途径为口服时，可采用口服、灌胃或片剂、临床用药途径为口服时，可采用口服、灌胃或片剂、胶囊给药，也可混于饲料中给予。胶囊给药，也可混于饲料中给予。7/24/202470五五、给药方法、给药方法n灌胃灌胃给药可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但给药可将供试药物制成一种溶液或混悬液，但必须注意给药容量不应超过必须注意给药容量不应超过 12ml/100g 体重体重/天。天。优点：优点：给药剂量精确；给药剂量精确； 时间易于掌握；时间易于掌握； 从药动

47、学角度出发符合临床给药的实际情况。从药动学角度出发符合临床给药的实际情况。缺点：缺点：技术要求高（误入气管）；技术要求高（误入气管）； 属外界刺激。属外界刺激。7/24/202471五五、给药方法、给药方法n混于饲料混于饲料给药则需计算给药则需计算食耗。食耗。食食 耗：耗：从断奶至成年期食耗不同。从断奶至成年期食耗不同。药物量：药物量：要求每周或每两周根据各组动物的平均体重要求每周或每两周根据各组动物的平均体重 进行调整。进行调整。n灌胃灌胃7/24/202472n预计动物体重（预计动物体重（W W）W W3rd3rd = W = W2nd2nd+ 1/2(W+ 1/2(W2nd2nd- W-

48、 W1st1st) )n预计食耗（预计食耗（FCFC）FCFC3rd3rd = FC = FC2nd2nd+ 1/2(FC+ 1/2(FC2nd2nd- FC- FC1st1st) )n预计食耗率（预计食耗率（R R）R R3rd3rd = FC = FC3rd3rd/W/W3rd 3rd =g=g饲料饲料/kg/kg体重体重/ /动物动物/ /天天 n预计药物浓度（预计药物浓度（C C）C C3rd3rd = =给药剂量（给药剂量（mg/kg体重体重/动物动物/天）天）R3rd （ g饲料饲料/kg体重体重/动物动物/天）天）7/24/202473注意事项注意事项n药物在饲料中的含量不应超过

49、药物在饲料中的含量不应超过5%5%；n药物的异味药物的异味n对饲料进行阶段性检查，确保药物在饲料中的稳定性。对饲料进行阶段性检查，确保药物在饲料中的稳定性。饲料抽样：新鲜配制饲料抽样：新鲜配制 存放一定时间存放一定时间7/24/202474五五、给药方法、给药方法n混于饲料混于饲料稀释剂：稀释剂：惰性的，如乳糖、甘露醇、干酪、淀粉、惰性的，如乳糖、甘露醇、干酪、淀粉、 白陶土、碳酸钙、磷酸钙。白陶土、碳酸钙、磷酸钙。n灌胃灌胃n胶囊或片剂胶囊或片剂给药，将受试物与稀释剂混合。给药，将受试物与稀释剂混合。明胶胶囊，（赋型剂）片剂明胶胶囊，（赋型剂）片剂7/24/202475五五、给药方法、给药方

50、法n一般情况：一般情况：长期毒性试验均强调每天给药，每周必长期毒性试验均强调每天给药，每周必须给药须给药 7 天。给药期限长（天。给药期限长（3个月）的药物每周至个月）的药物每周至少应给药少应给药6天。天。给药频率给药频率n特殊情况：参考体内代谢速度。特殊情况：参考体内代谢速度。7/24/202476六六、观察及测定指标、观察及测定指标 试验前，啮齿类动物至少应进行试验前，啮齿类动物至少应进行5天的适应性观天的适应性观 察，非啮齿类动物至少应驯养观察察，非啮齿类动物至少应驯养观察12周，应对周，应对 动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。动物进行一般观察及血液生化学指标的检测。 试验期间，至

51、少应每天或每两天作一次详细的试验期间，至少应每天或每两天作一次详细的 观察。观察。 试验结束时，必须留试验结束时，必须留1/3的动物做恢复期的观察的动物做恢复期的观察 试验，其观察期时间一般不超过试验，其观察期时间一般不超过28天（可逆性）。天（可逆性）。7/24/202477（一）日常观察一）日常观察 1. 一般观察内容一般观察内容 包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道包括对实验动物被毛、皮肤、眼睛、粘膜、孔道 ( 及其分泌物及其分泌物 ) 、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和、呼吸、循环、自主神经系统、躯体和肢体活动情况以及精神行为进行仔细地观察；对动物粪肢体活动情况以及精神行为进行仔

52、细地观察；对动物粪便的量、色泽和内含物，散失的食物，饮水瓶中残余的便的量、色泽和内含物，散失的食物，饮水瓶中残余的水以及一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象，都水以及一切可以反映动物生活情况变化的各种迹象，都必须加以注意。所有出现的症状都必须记录在案。必须加以注意。所有出现的症状都必须记录在案。观察及测定指标观察及测定指标7/24/2024781. 一般观察内容一般观察内容 如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖如果发现动物死亡，必须尽可能快地进行尸体剖检，以减少组织检，以减少组织自溶自溶。将组织置于。将组织置于 10% 的中性福尔的中性福尔马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖检不能立即

53、马林或其它适宜的固定液中。如果尸体剖检不能立即进行，则必须将动物进行，则必须将动物冷藏冷藏起来以延缓组织自溶起来以延缓组织自溶 。（一）日常观察一）日常观察 观察及测定指标观察及测定指标7/24/2024791. 1. 一般观察内容一般观察内容 对濒死的动物也应立即处死作尸体剖检。对濒死的动物也应立即处死作尸体剖检。（一）日常观察一）日常观察 尸体剖检后行组织病理学检查、评价。尸体剖检后行组织病理学检查、评价。观察及测定指标观察及测定指标7/24/2024802. 2. 生长率生长率 （一）日常观察一）日常观察 观察及测定指标观察及测定指标食耗量食耗量饮水量饮水量体重体重 低毒药物的毒性表现

54、7/24/202481（一）日常观察一）日常观察 观察及测定指标观察及测定指标3.食耗食耗食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗的计算食耗的计算 将加入供食器具中饲料的重量减去剩余的饲料重量再除以给食天数 7/24/202482将给药组和对照组的食耗加以比较将给药组和对照组的食耗加以比较，有助于说明有助于说明药物是否影响实验动物的食欲。药物是否影响实验动物的食欲。 （吸收、合成代谢）（吸收、合成代谢） （一）日常观察一）日常观察 观察及测定指标观察及测定指标3.食耗食耗食耗常用来评价给药对食欲及食物利用率的影响食耗常用来评价给药对食欲及食物利用

55、率的影响食耗的计算食耗的计算 7/24/202483（二）测定指标（二）测定指标 1. 1. 器官重量器官重量 观察及测定指标观察及测定指标7/24/202484年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则规定药物研究技术指导原则规定长期毒性试验中需长期毒性试验中需称重并计算脏器系数的器官称重并计算脏器系数的器官l脑脑l肝脏肝脏l肾上腺肾上腺l脾脏脾脏l附睾附睾l子宫子宫l心脏心脏l肾脏肾脏l胸腺胸腺l睾丸睾丸l卵巢卵巢l肺脏肺脏观察及测定指标观察及测定指标目的：确定靶器官甲状腺、甲状腺、前列腺前列腺7/24/202485长期毒性试验中进行长期毒性试验中进行病理组织学检查的组织或器官病理组织学检

56、查的组织或器官：l脑（大脑、小脑、脑干）脑（大脑、小脑、脑干）l垂体垂体l甲状腺甲状腺l食管食管l胃胃l肝脏肝脏l肾脏肾脏l脾脏脾脏l气管气管l主动脉主动脉l附睾附睾l卵巢卵巢l前列腺前列腺l坐骨神经坐骨神经l眼（眼科检查发现异常时）眼（眼科检查发现异常时）l给药局部给药局部l淋巴结淋巴结l脊髓脊髓l胸腺胸腺l甲状旁腺甲状旁腺l唾液腺唾液腺l小肠和大肠小肠和大肠l胆囊胆囊l肾上腺肾上腺l胰腺胰腺l肺肺l心脏心脏l睾丸睾丸l子宫子宫l乳腺乳腺l膀胱膀胱l视神经视神经l骨髓骨髓注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官注：为啮齿类动物可不进行组织病理学检查的组织或器官7/24/202486

57、 器官重量降低，表示该器官萎缩或发育不良；器官重量降低，表示该器官萎缩或发育不良； 器官重量增加提示可能有充血、水肿、增生、肥大、酶诱导变器官重量增加提示可能有充血、水肿、增生、肥大、酶诱导变 化或新生物等。化或新生物等。 将动物处死后取出上述器官，除去附着的组织、除将动物处死后取出上述器官，除去附着的组织、除尽余血后立即称重（尽余血后立即称重（注意勿使组织干燥注意勿使组织干燥注意勿使组织干燥注意勿使组织干燥）。（二）测定指标（二）测定指标 观察及测定指标观察及测定指标 1. 1. 器官重量器官重量 7/24/2024872. 2. 血液学血液学（二）测定指标（二）测定指标 u常规的血液学参数

58、常规的血液学参数u骨髓涂片骨髓涂片观察及测定指标观察及测定指标 1. 1. 器官重量器官重量 7/24/202488年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则规药物研究技术指导原则规定定血液学指标血液学指标l红细胞计数红细胞计数l红细胞容积红细胞容积l平均红细胞血红蛋白平均红细胞血红蛋白l网织红细胞计数网织红细胞计数l血小板计数血小板计数l血红蛋白血红蛋白l平均红细胞容积平均红细胞容积l平均红细胞血红蛋白浓度平均红细胞血红蛋白浓度l白细胞计数及分类白细胞计数及分类l凝血酶原时间凝血酶原时间红细胞压积红细胞压积观察及测定指标观察及测定指标7/24/202489 血液学指标血液学指标观察时间观察时

59、间非非啮啮齿齿类类动动物物一一般般于于整整个个试试验验周周期期中中每每隔隔 2 个个月月采血测定一次各项指标。采血测定一次各项指标。啮啮齿类动物齿类动物试验周期为试验周期为 6 个月时，可于试验中期、试验末个月时，可于试验中期、试验末 期以及恢复期分别剖杀部分动物期以及恢复期分别剖杀部分动物 ( 约约 1/4 、 2/4 、 1/4)，进行各项检查；进行各项检查；试验周期为试验周期为 3 个月时，可于试验未期以及恢复个月时，可于试验未期以及恢复 期分别剖杀部分动物期分别剖杀部分动物 ( 约约 2/3、1/3)，取血，取血检查。检查。（二）测定指标（二）测定指标 观察及测定指标观察及测定指标7/

60、24/2024903. 3. 血液生化学血液生化学 注意事项：注意事项：q采血时从各组中随机捉取动物，样本不能采血时从各组中随机捉取动物，样本不能溶血、凝血溶血、凝血q使用足够数量的动物使用足够数量的动物q采样前禁食采样前禁食 12 小时小时q使用合适的统计学分析方法，注意剂量使用合适的统计学分析方法，注意剂量反应关反应关 系；将所得资料和数据与同种、同龄、同性别、系；将所得资料和数据与同种、同龄、同性别、 同生理状况的实验动物的资料加以比较分析同生理状况的实验动物的资料加以比较分析 （二）测定指标（二）测定指标 观察及测定指标观察及测定指标2. 2. 血液学血液学 1. 1. 器官重量器官重

61、量 7/24/202491年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定规定血液生化学指标血液生化学指标l天门冬氨酸氨基转换酶天门冬氨酸氨基转换酶l碱性磷酸酶碱性磷酸酶l尿素氮尿素氮l总蛋白总蛋白l血糖血糖l总胆固醇总胆固醇l谷氨酰转移酶谷氨酰转移酶l氯离子浓度氯离子浓度l丙氨酸氨基转换酶丙氨酸氨基转换酶l肌酸磷酸激酶肌酸磷酸激酶l肌酐肌酐l白蛋白白蛋白l总胆红素总胆红素l甘油三酯甘油三酯l钾离子浓度钾离子浓度l钠离子浓度钠离子浓度观察及测定指标观察及测定指标7/24/2024923. 3. 血液生化学血液生化学 （二）测定指标（二）测定指标 4. 4. 尿液分析尿液分析

62、观察及测定指标观察及测定指标2. 2. 血液学血液学 1. 1. 器官重量器官重量 7/24/202493尿液分析指标尿液分析指标l尿液外观尿液外观lpHpH值值l尿蛋白尿蛋白l尿胆原尿胆原l潜血潜血l比重比重l尿糖尿糖l尿胆红素尿胆红素l酮体酮体l白细胞白细胞年组织编写年组织编写 药物研究技术指导原则药物研究技术指导原则规定规定观察及测定指标观察及测定指标7/24/202494七七、恢复期观察、恢复期观察 最后一次给药物后最后一次给药物后24小时，每组活杀部分动物检小时，每组活杀部分动物检测上述各项指标，留下测上述各项指标，留下1/31/4动物进行恢复期观察。动物进行恢复期观察。观察期一般不

63、超过观察期一般不超过28天，而后再活杀检查天，而后再活杀检查上述上述所有指所有指标，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性标，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。毒性反应。 7/24/202495综合评价综合评价 长期毒性试验是药物非临床安全性研究长期毒性试验是药物非临床安全性研究的有机组成部分，是药物非临床毒理学研究中综的有机组成部分，是药物非临床毒理学研究中综合性最强、获得信息最多和对临床指导意义最大合性最强、获得信息最多和对临床指导意义最大的一项毒理学研究。对其结果进行评价时，应结的一项毒理学研究。对其结果进行评价时，应结合受试物的药学特点，药效学、药代动力学和其合受

64、试物的药学特点，药效学、药代动力学和其他毒理学研究的结果，以及已取得的临床研究的他毒理学研究的结果，以及已取得的临床研究的结果，进行综合评价。结果，进行综合评价。7/24/202496本章学习要点本章学习要点n掌握相关基本概念、掌握相关基本概念、长期毒性期毒性试验与急性毒性与急性毒性试验的根本差的根本差别、长期毒性期毒性试验设计的基本原的基本原则（总原原则）、）、给药期限及恢复期期限及恢复期观察察n熟悉熟悉试验设计的一般原的一般原则和要求、和要求、剂量水平的量水平的选择及及给药方法方法n了解慢性毒性了解慢性毒性试验的目的和意的目的和意义、实验动物的物的选择、长期毒性期毒性试验的的观察及察及测定

65、指定指标7/24/202497本章复习本章复习n长期毒性试验；蓄积作用长期毒性试验；蓄积作用n长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异n蓄积作用的表现形式有几种？蓄积作用的表现形式有几种？n我国药政部门对长期毒性试验动物数的要求我国药政部门对长期毒性试验动物数的要求n长期毒性试验时检查脏器指数的器官包括哪些？长期毒性试验时检查脏器指数的器官包括哪些？n恢复期观察恢复期观察n剂量水平的选择有哪几种具体方法参考？剂量水平的选择有哪几种具体方法参考？7/24/202498本章复习本章复习n长期毒性试验的目的和意义。长期毒性试验的目的和意义。n长期毒性试验的基本原则、基本要求？长期毒性试验的基本原则、基本要求？n如何确定长期毒性试验的试验期限？如何确定长期毒性试验的试验期限？7/24/202499