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1、体外受精和早期胚胎培养最终Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望试管婴儿试管婴儿1978年年7月月26日，世日，世界首例试管婴儿界首例试管婴儿“路路易斯布朗易斯布朗”在英国在英国诞生，现已成为母亲。诞生，现已成为母亲。转基因试管牛转基因试管牛我国首例转基因试管我国首例转基因试管牛牛“滔滔滔滔”于于1999年年2月月19日在上海诞生日在上海诞生19881988年年3 3月月1010日我国首例试管婴儿日我国首例试管婴儿试管动物技术试管动物技术 是指通过人工操作是指通过人工操作使
2、使卵子和精子卵子和精子在在体体外外条件下条件下成熟成熟和和受受精精，并通过培养发，并通过培养发育成育成早期胚胎早期胚胎后，后，再经再经移植移植产生后代产生后代的技术。的技术。快速繁殖动物优良品种快速繁殖动物优良品种目的：目的：技术手段：技术手段： 体外受精体外受精和和早期胚胎培养早期胚胎培养 一、体外受精一、体外受精1.1.卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养2.2.精子的采集和获能精子的采集和获能3.3.受精受精 二、早期胚胎培养二、早期胚胎培养1.1.采集的方法有哪些采集的方法有哪些? ?2.2.采集到的细胞能直接受精吗？采集到的细胞能直接受精吗？1.1.采集的方法有哪些采集的方法有哪
3、些? ?2.2.采集到的精子能直接和卵子受精吗？采集到的精子能直接和卵子受精吗？在体外受精要准备什么条件？在体外受精要准备什么条件？在体外如何培养胚胎？在体外如何培养胚胎？1.1.卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养用用促性腺激素促性腺激素注射注射处理后，从处理后，从输卵管输卵管中冲中冲取取卵子卵子，直接直接与获能的精子在体外受精。与获能的精子在体外受精。 如：小鼠、兔、猪、羊等如：小鼠、兔、猪、羊等方法一：方法一：超数排卵法超数排卵法1.1.卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养方法二：方法二：从从屠宰的母畜卵巢屠宰的母畜卵巢中直接采集中直接采集卵母细胞卵母细胞。适用于大家畜和大动物，
4、如牛适用于大家畜和大动物，如牛牛卵巢中采卵牛卵巢中采卵牛卵巢牛卵巢方法三：方法三：借助借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具，等工具，从从活体活体动物的卵巢中吸取动物的卵巢中吸取卵母细胞。卵母细胞。适用于大家畜和大动物，如牛适用于大家畜和大动物，如牛 B B超活采仪超活采仪方法二和三采集的卵母细胞需方法二和三采集的卵母细胞需经体外人工培养成熟经体外人工培养成熟2.2.精子的收集和获能精子的收集和获能1) 1) 收集的方法收集的方法: :假阴道法假阴道法、手握法手握法和和电刺激电刺激等等2) 2) 获能处理获能处理: :培养法：培养法：把精子放入获能液中。把精子放入获
5、能液中。 （适用对象：啮齿动物、家兔和猪）（适用对象：啮齿动物、家兔和猪） 化学法：化学法：把精子放入一定浓度的肝素或钙离子载体把精子放入一定浓度的肝素或钙离子载体A23187A23187溶液溶液中，化学药物诱导。中，化学药物诱导。 （适用对象：牛、羊）（适用对象：牛、羊） 3.3.受精受精 在在获能溶液获能溶液或或专用的受精溶专用的受精溶液液中完成受精中完成受精过程过程离心的目的是什么？离心的目的是什么？卵母细胞的培养的卵母细胞的培养的目的是什么？目的是什么？保存剩余的卵子和精子的方法是什么？保存剩余的卵子和精子的方法是什么？活活体体采采集集的的牛牛卵卵母母细细胞胞卵母细胞的成熟培养：卵母细
6、胞的成熟培养：CO2培养箱培养箱卵母细胞的成熟培养：卵母细胞的成熟培养：CO2培养箱培养箱三、胚胎的早期培养三、胚胎的早期培养1.1.受精卵的发育培养：受精卵的发育培养：检查受精状况和受精卵的发育能力。检查受精状况和受精卵的发育能力。2.2.培养液的成分：培养液的成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、氨基酸、核苷酸、血清血清等等3.3.适时移植：适时移植：向受体移植或冷冻保存。向受体移植或冷冻保存。动物胚胎培养液动物胚胎培养液动物细胞培养液动物细胞培养液盐类盐类营养物质营养物质调节物质调节物质特有成分特有成分无机盐、有机盐无机盐、有机盐氨基酸、核苷酸
7、氨基酸、核苷酸维生素、激素维生素、激素糖、氨基酸糖、氨基酸血清、血浆血清、血浆促生长因子促生长因子血清血清无机盐、微量元素无机盐、微量元素 不同动物胚胎移不同动物胚胎移植时间不同植时间不同牛、羊：牛、羊：桑椹胚或囊桑椹胚或囊胚阶段胚阶段小鼠、家兔：小鼠、家兔：卵裂期卵裂期或囊胚阶段或囊胚阶段试管婴儿：试管婴儿：8 8个或个或1616个细胞阶段个细胞阶段 胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取胚胎培养发育到适宜阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。出向受体移植或冷冻保存。成熟卵子成熟卵子人工体外受精人工体外受精雌、雄原核融合雌、雄原核融合体内移植体内移植试管牛试管牛采集良种母牛的卵母细胞采集良种母
8、牛的卵母细胞卵母细胞的体外培养卵母细胞的体外培养采集良种公牛精子采集良种公牛精子精子体外获能精子体外获能体外受精体外受精良种牛体外受精胚胎良种牛体外受精胚胎胚胎移植胚胎移植受体牛受体牛良种犊牛良种犊牛成熟期牛成熟期牛屠宰加工厂屠宰加工厂市场市场采集卵巢中的卵母细胞采集卵巢中的卵母细胞“试试管管牛牛”工工厂厂化化生生产产的的技技术术流流程程图图有性生殖有性生殖 无性生殖无性生殖 核移植技术、核移植技术、胚胎移植胚胎移植遵循遵循 体外受精体外受精胚胎移植胚胎移植 试管动物试管动物 克隆动物克隆动物生殖方式生殖方式技术手段技术手段遗传物质遗传物质遗传规律遗传规律不遵循不遵循比较试管动物和克隆动物比较试管动物和克隆动物来自来自2 2个个体个个体 主要来自核供体主要来自核供体
