dd第四次实验血钙血磷测定

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1、遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 第四次实验第四次实验 钙、磷、试剂空白测定钙、磷、试剂空白测定目的与要求目的与要求1.1.掌握钙、磷的测定原理和操作方法掌握钙、磷的测定原理和操作方法 2. 2.掌握试剂空白测定的应用掌握试剂空白测定的应用 3. 3.了解钙、磷的测定的临床意义了解钙、磷的测定的临床意义遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 一

2、、血清钙离子测定一、血清钙离子测定 甲基麝香草酚蓝比色法甲基麝香草酚蓝比色法邻甲酚酞络合酮法（临检中心推荐）邻甲酚酞络合酮法（临检中心推荐）原子吸收光谱法原子吸收光谱法离子选择电极法离子选择电极法遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (一一) )实验原理实验原理 血清中钙离子在碱性溶液中能与血清中钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚蓝染料结合，生成有色甲基麝香草酚蓝染料结合，生成有色复合物。复合物。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o

3、w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (二二) )试剂试剂 显色试剂显色试剂碱性试剂碱性试剂标准液标准液MTB 8-8-羟基喹啉羟基喹啉 乙醇胺乙醇胺 碳酸钙碳酸钙 2.50 mmol/L工作液：显色试剂与碱性试剂等量混合工作液：显色试剂与碱性试剂等量混合遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (三三) )操作操作1. 1. 检测参数检测参数主波长：主波长：612nm 612nm 温度：温度： 室温。室温。2

4、.2.空白管空白管 标准管标准管 样本管样本管工作液工作液2.0ml去离子水去离子水20ul）工作液工作液2.0ml工作液工作液2.0ml钙标准钙标准液液20ul血血20ul遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 3.3.分别混匀各管，室温放分别混匀各管，室温放5 5分钟，分钟，以空白管校零，记录各管吸光度。以空白管校零，记录各管吸光度。4.4.结果结果 钙钙 ( (mmolmmol/L)=/L)=样本管吸光样本管吸光度度标准管吸光度标准管吸光度标准液浓度标准液浓度遵遵义

5、义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (四四) )临床意义临床意义1.1.参考值：参考值： 2.12.9mmol/L2.12.9mmol/L。 生命危急值：生命危急值：1.7mmol/L1.7mmol/L，3.3mmol/L3.3mmol/L。 2.2.增高：甲旁亢、多发性骨髓瘤、增高：甲旁亢、多发性骨髓瘤、VitDVitD增增多症、代酸等多症、代酸等3.3.降低：甲旁减、尿毒症、佝偻病等。降低：甲旁减、尿毒症、佝偻病等。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实

6、验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (五五) ) 方法评价方法评价1.1.重复性、准确度较好、简便、易于自动化。重复性、准确度较好、简便、易于自动化。2.2.线性：在样本浓度线性：在样本浓度0-3.75mmol/L0-3.75mmol/L范围内范围内, , 线性良好。线性良好。3.3.精密度：批内精密度：批内 CV5CV5。批间相对误差。批间相对误差5 54.4.易受干扰。易受干扰。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n

7、 g g t t Email: 三、无机磷的测定三、无机磷的测定磷钼酸还原法磷钼酸还原法临检中心推荐临检中心推荐染料结合法染料结合法氧化酶法氧化酶法同位素质谱法决定性方法同位素质谱法决定性方法原子吸收光谱法原子吸收光谱法遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (一一) )实验原理：实验原理：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成在铵反应生成在340nm340nm处有吸收峰的磷处有吸收峰的磷钼酸铵，其吸光度的变化与无机磷含钼酸铵，其吸光

8、度的变化与无机磷含量成正比。量成正比。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (二二) )试剂试剂磷试剂磷试剂硫酸硫酸 220mmol/L220mmol/L钼酸铵钼酸铵 1.0mmol/L1.0mmol/L表面活性剂表面活性剂 适量适量校准液：校准液：磷酸二氢钾磷酸二氢钾 1.29mmol/L1.29mmol/L 防腐剂防腐剂 适量适量遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n

9、g g t t Email: ( (三三) )测定步骤测定步骤混匀，以混匀，以37103710在在340nm340nm波长处比色。波长处比色。结果结果无机磷含量无机磷含量=A=A样本样本/A/A校准校准CC校准校准 空白管空白管校准管校准管标本管标本管磷试剂磷试剂纯化水纯化水校准液校准液标标 本本(ml)1.01.01.00.020.020.02遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (四四) )临床意义临床意义1.1.参考值：成人：参考值：成人：0.97-1.62m

10、mol/L0.97-1.62mmol/L 儿童：儿童：1.45-2.10mmol/L1.45-2.10mmol/L2.2.增高：甲旁减、慢性肾炎晚期、多发性骨增高：甲旁减、慢性肾炎晚期、多发性骨髓瘤、骨折愈合期等。髓瘤、骨折愈合期等。3.3.减低：甲旁亢、肾小管变性病变时等。减低：甲旁亢、肾小管变性病变时等。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: ( (五五) ) 方法性能方法性能精密度精密度: :批内变异批内变异 CV5CV5。线性范围线性范围: :0-4mmol/L0

11、-4mmol/L。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 三、试剂空白测定三、试剂空白测定 1.1.定义：用蒸馏水调零测定仅仅未定义：用蒸馏水调零测定仅仅未加样品的试剂管，用以扣除试剂干扰对加样品的试剂管，用以扣除试剂干扰对结果所造成的系统误差。结果所造成的系统误差。 本次实验用钙离子测定的方法进行本次实验用钙离子测定的方法进行试剂空白实验。试剂空白实验。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o

12、i i n n g g t t Email: 2.2.操作操作试剂空白试剂空白标准管标准管测定管测定管工作液工作液2.0ml2.0ml2.0ml2.0ml2.0ml2.0ml标准液标准液-0.02ml0.02ml-蒸馏水蒸馏水0.02ml0.02ml-标本标本-0.02ml0.02ml室温放室温放5 5分钟，以蒸馏水调零，分钟，以蒸馏水调零，612nm 612nm 测定。测定。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 计算计算 空白值空白值= =空白空白OD/OD/标准标准

13、OD OD 标准浓度标准浓度 样本值样本值= = 标准浓度标准浓度样本样本OD-OD-空白空白ODOD标准标准OD-OD-空白空白ODOD遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 3.3. 试剂空白的选择原则试剂空白的选择原则（1 1）试剂中某组分在测定波长下对光有吸收；）试剂中某组分在测定波长下对光有吸收；（2 2）被测试样本身在测定波长下没有光吸收；）被测试样本身在测定波长下没有光吸收；（3 3）被测试样中的其他成分与显色剂作用后在）被测试样中的其他成分与显色剂作用后在测定波长下没有光吸收；测定波长下没有光吸收；（4 4）利用改变加入试剂的次序使试样不显色。）利用改变加入试剂的次序使试样不显色。遵遵义义医医学学院院临临 床床 生生 化化 实实 验验P P o o w w e e r r r r P P o o i i n n g g t t Email: 预习下次课内容：总蛋白测定及回收试验。预习下次课内容：总蛋白测定及回收试验。