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1、实验一培养基的配制和灭实验一培养基的配制和灭菌菌2 2一、目的要求了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。程。了解几种灭菌方法，重点掌握高压蒸汽灭菌法了解几种灭菌方法，重点掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法的原理及其使用方法。 （二）培养基灭菌 培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌
2、。蒸汽灭菌为105-121，15-20分钟，干热灭菌为160-170，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。四、实验内容四、实验内容 高压蒸汽灭菌法其步骤如下：高压蒸汽灭菌法其步骤如下：高压蒸汽灭菌法其步骤如下：高压蒸汽灭菌法其步骤如下： 1. 1. 1. 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。灭菌器内加入一定量的水，
3、将包扎好的物品放入其中。灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2. 2. 2. 2. 接通电源，进行加热接通电源，进行加热接通电源，进行加热接通电源，进行加热3. 3. 3. 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm20.5kg/cm20.5kg/cm20
4、.5kg/cm2时时时时再打开排气阀，待压力回复到再打开排气阀，待压力回复到再打开排气阀，待压力回复到再打开排气阀，待压力回复到0 0 0 0时再关闭排气阀。时再关闭排气阀。时再关闭排气阀。时再关闭排气阀。4. 4. 4. 4. 当压力达当压力达当压力达当压力达1.05kg/cm21.05kg/cm21.05kg/cm21.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为121121121121，维持，维持，维持，维持30min30min30min30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、
5、氨基酸。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。等物时，应适当降低压力，延长时间。等物时，应适当降低压力，延长时间。等物时，应适当降低压力，延长时间。5. 5. 5. 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品五、实验报告思考题：u 培
6、养基应具备哪些条件?u 在培养基配制操作过程中应注意什么问题?为什么?u 培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养 基是无菌的?u 高压蒸汽灭菌前为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽?u 玻璃器皿为什么在灭菌前要先行干燥?u 加热蒸汽灭菌为什么比干热灭菌所要求的温度低、时间短？实 验大分子物质的水解实验及糖发酵实验一、实验目的1. 1. 证明不同的微生物对各种有机大分子的水证明不同的微生物对各种有机大分子的水解能力的不同，从而说明不同微生物有着不同解能力的不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。的酶系统。2. 2. 掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方掌握进行微生物大分子水解实验的
7、原理和方法法3. 3. 了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用要作用4. 4. 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法二、实验原理微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，之处。微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的
8、机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应作用作为重要依据。作用作为重要依据。本实验分别安排微生物对生物大分子的分解利用（淀粉水本实验分别安排微生物对生物大分子的分解利用（淀粉水解实验水解试验、明胶液化试验），对含碳化合物的分解解实验水解试验、明胶液化试验），对含碳化合物的分解利用（糖发酵试验）让同学们对微生物的代谢类型多样性利用（糖发酵试验）让同学们对微生物的代谢类型多样性有一个初步和感性的了解，同时学习利用微生物形态、结有一个初步和感性的了解，同时学习利用微生物形态、结构以及生化反应的特征对某些细菌进行初步的分类。构以及
9、生化反应的特征对某些细菌进行初步的分类。本实验学习平板接种法、穿刺接种法、液体接种法。本实验学习平板接种法、穿刺接种法、液体接种法。三、实验材料 1培养基：培养基： 淀粉水解培养基：2皿 明胶液化培养基：2支 葡萄糖发酵培养基：3支 乳糖发酵培养基：3支2. 接种用具：接种环（针、钩），酒精灯，镊子，消毒棉球，打火机，标签贴纸，废物杯，纸巾，油性笔。3. 实验菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌四、实验内容试验名称试验名称试验名称试验名称培养基名称培养基名称培养基名称培养基名称接种菌名称接种菌名称接种菌名称接种菌名称 接种方式接种方式接种方式接种方式 每组个数每组个数每组个数每组个数淀粉
10、水解淀粉水解淀粉培养基淀粉培养基枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌/ /大肠杆菌大肠杆菌 平板平板2 2明胶水解明胶水解明胶培养基明胶培养基枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌/ /大肠杆菌大肠杆菌穿刺穿刺2 2葡萄糖发葡萄糖发酵酵葡萄糖发酵培葡萄糖发酵培养基养基大肠杆菌和变大肠杆菌和变形杆菌形杆菌液体液体3 3乳糖发酵乳糖发酵乳糖发酵培养乳糖发酵培养基基大肠杆菌和变大肠杆菌和变形杆菌形杆菌液体液体3 3四、实验内容（1）将固体淀粉培养基溶化后冷却至50，无菌操作制成平板（2）用记号笔在平皿背面划成两部分。（3）将枯草芽孢杆菌，大肠杆菌分别在不同的部分划线接种，并在平板的反面分别记下两部分的菌名。（3）将接完种的平
11、板倒置于37恒温培养箱，培养24h。（4）观察结果时，可打开皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻 旋转，是碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明 圈，则说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小，说明该 菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以 “+”、“”表示有无透明圈）操作步骤：操作步骤：1. 1. 淀粉水解试验：（淀粉水解试验：（2 2皿）皿）四、实验内容（1）取两支明胶培养基试管，用记号笔标明各管欲接种菌的菌名。（2）用接种针分别以穿刺接种法接种枯草芽孢杆菌和大肠杆菌于对应的明胶培养基中。（2）接种后置于20恒温培养箱，培养2-5d。（3）观察结果时，注意培养基有无液化现象。
12、（以“+”、 “”表示有无液化现象）注意： 如果细菌在20时不能生长，则必须培养在所需的最适温度下，观察结果时需将试管从恒温箱里取出，置于冰浴中，才能观察液化程度。2. 明胶液化试验：明胶液化试验：四、实验内容（1）用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称和所接种的菌名。（2）取葡萄糖发酵培养基试管3支，以液体接种的方式分别接种变形杆菌和大肠杆菌，第三支不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基试管3支，同样分别接入变形杆菌和大肠杆菌，第三支不接种，作为对照。接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小试管进入气泡。（3）将接种过和作为对照的6支试管置于37恒温培养箱，培养24h。（4）观察结果
13、时，看各管颜色变化及杜氏小管有无气泡。3.3.糖类发酵试验：糖类发酵试验：图 糖类发酵试验 五、实验报告菌名菌名菌名菌名淀粉水解试验淀粉水解试验淀粉水解试验淀粉水解试验明胶液化试验明胶液化试验明胶液化试验明胶液化试验枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌1、结果（1）大分子物质水解实验结果将结果填入下表。“” 表示阳性，“”表示阴性（2）糖发酵实验结果 将结果填入下表。将结果填入下表。“” ” 表示产酸或产气，表示产酸或产气，“”表示不产酸或不产气表示不产酸或不产气。糖类发酵糖类发酵大肠杆菌大肠杆菌变形杆菌变形杆菌对照对照产酸产酸产气产气产酸产酸产气产气产酸产酸产气产气葡萄糖发酵葡萄糖发酵乳糖发酵乳糖发酵
