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1、微量铁的测定微量铁的测定aOBJECTIVE1 1掌握分光光度法的基本原理掌握分光光度法的基本原理2 22 2 学会光度法测定物质的含量学会光度法测定物质的含量3 33 3 学习可见分光光度计的使用方法学习可见分光光度计的使用方法21显色反应及其条件显色反应及其条件因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它故操作时，必须在平行原则的条件下进行故操作时，必须在平行原则的条件下进行2测定方法：标准曲线法测定方法：标准曲线法(空白溶液作对照空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素溶剂空白：溶剂空白：显色剂及
2、制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白溶液溶液试剂空白：试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶剂剂(不加试样溶液不加试样溶液)试样空白：试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应相同条件进行操作相同条件进行操作9显色剂：显色剂：磺基水杨酸磺基水杨酸pH1.82.5淡紫色淡紫色4.08.0橙红色橙红色8.011.5黄色黄色12 沉淀沉淀吸收波长：吸收波长：380480nm范围内，选择最大吸收波长范围内，选择最大吸收波
3、长max(425nm)实验条件：实验条件：1011PROCEDURE1系列标准溶液和待测溶液的配制系列标准溶液和待测溶液的配制编号编号空白空白123456未知未知标准溶液标准溶液(ml)0.000.501.001.502.002.503.001.00(待测液待测液)10%磺基水杨酸磺基水杨酸(ml)5.00缓冲液缓冲液(ml)10蒸馏水蒸馏水稀释至稀释至50.00ml122标准曲线的制作标准曲线的制作波长波长425nm下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓测定一系列标准溶液的吸光度以测定一系列标准溶液的吸光度以Fe3+含量为横坐标，含量为横坐标，吸光度为纵
4、坐标绘制标准曲线吸光度为纵坐标绘制标准曲线编号编号空白空白123456Fe3+含量含量(mg/ml)吸光度吸光度(A)波波长长425nm133试样注入比色皿，插入试样槽试样注入比色皿，插入试样槽调节波长调节波长盖上试样盖，将空白试样移入光路盖上试样盖，将空白试样移入光路MODEA明亮明亮COARSESET-REF钮，使钮，使A值在值在0.0000.176内任一数值内任一数值SET-REF使使A值为值为0.000(即置空白试样为即置空白试样为0.000)推或拉推或拉SAMPLE依次测试标准系列溶液依次测试标准系列溶液1POWER键，接通电源，预热键，接通电源，预热15min2开启试样室盖，调开启
5、试样室盖，调ZEROT钮钮,使使T0.000可见分光光度计操作：可见分光光度计操作：140ACC样品样品A样品样品相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上查出查出Fe3+的含量的含量.3未知铁盐溶液中未知铁盐溶液中Fe3+含量的测定含量的测定15表表1微量铁含量测定结果微量铁含量测定结果DATA编号编号空白空白123456未知未知Fe3+标准溶液标准溶液(ml)0.000.501.001.502.002.503.001.00(待测液待测液)10%磺基水杨酸磺基水杨酸(ml)5.00缓冲液缓冲液(ml)10蒸蒸馏馏水水稀释至稀释至50.00ml波波长长425nmFe3+含量含量(mg/ml)吸光度吸光度(A)16QUESTION&DISCUSSION1本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？2为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？17结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！18
