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1、保健食品毒理学安全性评价北京大学医学部毒理学系 周宗灿电话：（010）8280153113501340721第1页，共82页。反应停thalidomide第2页，共82页。保健食品毒理学安全性评价一。毒理学基础二。保健食品安全性毒理学评价规范（2003）三。毒理学试验及结果判定四。安全评价工作中的有关问题五。注意点和进展第3页，共82页。一。毒理学基础安全性安全性是首先关注的问题（审批制和备案制）保健食品（审批制）：非自愿风险药品：自愿风险有效性第4页，共82页。毒理学（toxicology）从生物医学角度研究化学物质对生物机体的损害作用及其机制的科学。任何一种化学物在一定条件下都可能是对机体
2、产生任有害作用。第5页，共82页。毒理学描述毒理学、机制毒理学、管理毒理学（法规毒理学）毒作用谱： 系统毒性；致突变；致畸；致癌第6页，共82页。剂量轴低30100高 人NOEL阈LOELNOAEL阈LOAELMTDLD50功能长期毒性急期毒性第7页，共82页。100%*50*153060NOAELLOAELmg/kg阈毒作用剂量反应关系第8页，共82页。描述毒理学试验的基本原则化学物在实验动物产生的作用，可以外推于人。实验动物必须暴露于高剂量，这是发现对人潜在危害的必需的和可靠的方法。成年的健康（雄性和雌性未孕）实验动物和人可能的暴露途径是基本的选择。第9页，共82页。检测和评价人拟用剂量1
3、00倍药物A30倍毒性作用药物B毒性BA无毒性毒性作用安全性AB作用第10页，共82页。毒性评价试验的基本目的 受试物毒作用的表现和性质 剂量-反应(效应)研究 确定毒作用的靶器官 确定损害的可逆性第11页，共82页。 实验动物物种选择对受试物在代谢、生化和毒理学特征与人最接近的物种；选择自然寿命不太长的物种；易于饲养和实验操作的物种；经济并易于获得的物种。常规选择物种的方式是利用两个物种，一种是啮齿类，另一种是非啮齿类。系统毒性研究最常用的啮齿类是大鼠和小鼠，非啮齿类是狗。第12页，共82页。物种选择急性毒性试验常用 大鼠、小鼠、狗亚慢性、慢性毒性试验常用 大鼠、狗皮肤刺激试验和致敏试验常用
4、 豚鼠皮肤刺激试验和眼刺激试验常用 兔遗传毒理学试验多用 小鼠致畸试验常用 大鼠、小鼠和兔致癌试验常用 大鼠和小鼠迟发性神经毒性试验常用 母鸡第13页，共82页。染毒途径 毒理学试验中染毒途径的选择，应尽可能模拟人在接触该受试物的方式。最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮途径。第14页，共82页。溶剂和赋型剂染毒前根据染毒途径的不同，应将受试物制备成一定的剂型。常用的是制备成水溶液、油溶液或混悬液。对溶剂和助溶剂的要求是：所用的溶剂或助溶剂应该是无毒或实际无毒与受试物不起反应，受试物在溶液中应稳定；与受试物的毒动学和毒效学无显著影响；无特殊刺激性或气味。第15页，共82页。溶剂和赋型剂对水溶
5、性受试物，体内试验首选的溶剂为水（经口染毒）和等渗盐水（胃肠道外染毒）。水不溶性受试物应溶于或悬浮于适当的有机溶剂中。混悬液最常用的赋形剂为0.5%羧甲基纤维素钠或10%阿拉伯树胶。受试物溶液应新鲜配制，除非已证明贮存稳定。第16页，共82页。美国药剂协会（1986）推荐的常用溶剂和赋型剂1。丙酮（Acetone）；2羧甲基纤维素（Carboxylmethylcellulose，CMC）；3玉米油（Cornoil）；4 二 甲 基 甲 酰 胺 （ N,N-dimethylformamide,DMFO）；5二甲基亚砜（Dimethylsulfoxide,DMSO）；6乙醇（Ethanol）7（G
6、lycerol）甘油；8阿拉伯胶（GumArabic）；9乳糖（Lactose）；10甲基纤维素（Methylcellulose）11甲基乙基酮，丁酮（Methylethylketone，MEK）；12凡士林油（Mineraloil；liquidpetrolatum）；13橄榄油（Oliveoil）；14花生油（peanutoil/Arachisoil）15 凡 士 林 （ Petrolatum/Vaseline/petroleumJelly）；16 聚 乙 二 醇 -400（ PolyethyleneGlycol-400，PEG400）；17生理盐水（Saline）；18吐温80（Tween
7、80）；19水（Water）（黄色示可用于经口）第17页，共82页。一般推荐的染毒最大容积（1）经口20ml/kg（对空腹动物）；（2）经皮2ml/kg（根据体表面积计算，限于染毒的准确性）；（3）静脉1ml/kg（5分钟以上）；（4）肌肉注射0.5ml/kg（一个部位）；（5）每眼0.01ml；（6）直肠0.5ml/kg；（7）阴道：大鼠0.2ml,兔1ml；（8）吸入2mg/L；（9）鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。第18页，共82页。安全系数不确定系数不确定系数100倍物种间差异10倍个体间差异10倍毒效学毒动学毒效学毒动学100.4100.6100.5100.5(2.5)(4.0)(3.2
8、)(3.2)第19页，共82页。二。保健食品安全性毒理学评价保健食品安全性毒理学评价规范（规范（2003）食品卫生法、保健食品管理办法的要求保健食品卫生法、保健食品管理办法的要求保健食品必须符合食品卫生要求，对人体不产生食品必须符合食品卫生要求，对人体不产生任何急性、亚急性或慢性危害。任何急性、亚急性或慢性危害。第一部分：毒理学评价程序第一部分：毒理学评价程序第二部分：毒理学检验方法第二部分：毒理学检验方法 第20页，共82页。第一部分：毒理学评价程序第一部分：毒理学评价程序主题内容与适用范围对受试物的要求对受试物处理的要求保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容不同保健食品选择毒性试验的
9、原则要求保健食品安全性毒理学评价试验的目的和结果判定保健食品毒理学安全性评价时应考虑的问题第21页，共82页。 （一）主题内容与适用范围（一）主题内容与适用范围本本程程序序规规定定了了保保健健食食品品安安全全性性毒毒理理学评价的统一规程学评价的统一规程。本程序适用于保健食品的安全性评价本程序适用于保健食品的安全性评价。第22页，共82页。（二）对受试物的要求（二）对受试物的要求以以单单一一已已知知化化学学成成分分为为原原料料的的受受试试物物；含含有有多多种种原原料料的配方产品。的配方产品。提提供供原原料料来来源源、生生产产工工艺艺、推推荐荐人人体体摄摄入入量量、使使用用说说明书等有关资料。明书
10、等有关资料。受受试试物物应应是是符符合合既既定定配配方方和和生生产产工工艺艺的的规规格格化化产产品品，其组成成分、比例及纯度应与实际产品相同。其组成成分、比例及纯度应与实际产品相同。第23页，共82页。（三）对受试物处理的要求（三）对受试物处理的要求介质的选择介质的选择人的可能摄入量较大的受试物处理人的可能摄入量较大的受试物处理袋泡茶类受试物的处理袋泡茶类受试物的处理膨胀系数较高的受试物处理膨胀系数较高的受试物处理液体保健食品浓缩液体保健食品浓缩含乙醇的保健食品含乙醇的保健食品含有人体必需营养素等物质的保健食品含有人体必需营养素等物质的保健食品益生菌等微生物类保健食品益生菌等微生物类保健食品以
11、鸡蛋等食品为载体的特殊保健食品以鸡蛋等食品为载体的特殊保健食品第24页，共82页。卫法监发卫法监发200251200251号文件号文件1.1.关于进一步规范保健食品原料管理的通关于进一步规范保健食品原料管理的通知（卫法监发知（卫法监发200251200251号）号）对保健食品涉及的各种原料物质的管对保健食品涉及的各种原料物质的管理与安全性评价作了详细规定，将原料分理与安全性评价作了详细规定，将原料分为三类：为三类：药食同源（附件药食同源（附件1 1）；）；可用于保健食品（附件可用于保健食品（附件2 2）；）；禁用于保健食品（附件禁用于保健食品（附件3 3）。）。 第25页，共82页。通知的主要
12、内容通知的主要内容申报保健食品中涉及的物品（或原料）是我国新研申报保健食品中涉及的物品（或原料）是我国新研制、新发现、新引进的无食用习惯或仅在个别地区制、新发现、新引进的无食用习惯或仅在个别地区有食用习惯的，按照新资源食品卫生管理办法有食用习惯的，按照新资源食品卫生管理办法的有关规定执行。的有关规定执行。申报保健食品中涉及食品添加剂的，按照食品添加剂卫申报保健食品中涉及食品添加剂的，按照食品添加剂卫生管理办法的有关规定执行。生管理办法的有关规定执行。申报保健食品中涉及真菌、益生菌等物品（或原料）申报保健食品中涉及真菌、益生菌等物品（或原料）的，按照我部印发的卫生部关于印发真菌类和益的，按照我部
13、印发的卫生部关于印发真菌类和益生菌类保健食品评审规定的通知（卫法监发生菌类保健食品评审规定的通知（卫法监发200184200184号）执行。号）执行。第26页，共82页。丁香、八角茴香、刀豆、小茴香、小蓟、山药、山楂、马齿丁香、八角茴香、刀豆、小茴香、小蓟、山药、山楂、马齿苋、乌梢蛇、乌梅、木瓜、火麻仁、代代花、玉竹、甘草、苋、乌梢蛇、乌梅、木瓜、火麻仁、代代花、玉竹、甘草、白芷、白果、白扁豆、白扁豆花、龙眼肉（桂圆）、决明子、白芷、白果、白扁豆、白扁豆花、龙眼肉（桂圆）、决明子、百合、肉豆蔻、肉桂、余甘子、佛手、杏仁（甜、苦）、沙百合、肉豆蔻、肉桂、余甘子、佛手、杏仁（甜、苦）、沙棘、牡蛎、
14、芡实、花椒、赤小豆、阿胶、鸡内金、麦芽、昆棘、牡蛎、芡实、花椒、赤小豆、阿胶、鸡内金、麦芽、昆布、枣（大枣、酸枣、黑枣）、罗汉果、郁李仁、金银花、布、枣（大枣、酸枣、黑枣）、罗汉果、郁李仁、金银花、青果、鱼腥草、姜（生姜、干姜）、枳子、枸杞子、栀子、青果、鱼腥草、姜（生姜、干姜）、枳子、枸杞子、栀子、砂仁、胖大海、茯苓、香橼、香薷、桃仁、桑叶、桑椹、桔砂仁、胖大海、茯苓、香橼、香薷、桃仁、桑叶、桑椹、桔红、桔梗、益智仁、荷叶、莱菔子、莲子、高良姜、淡竹叶、红、桔梗、益智仁、荷叶、莱菔子、莲子、高良姜、淡竹叶、淡豆豉、菊花、菊苣、黄芥子、黄精、紫苏、紫苏籽、葛根、淡豆豉、菊花、菊苣、黄芥子、黄精
15、、紫苏、紫苏籽、葛根、黑芝麻、黑胡椒、槐米、槐花、蒲公英、蜂蜜、榧子、酸枣黑芝麻、黑胡椒、槐米、槐花、蒲公英、蜂蜜、榧子、酸枣仁、鲜白茅根、鲜芦根、蝮蛇、橘皮、薄荷、薏苡仁、薤白、仁、鲜白茅根、鲜芦根、蝮蛇、橘皮、薄荷、薏苡仁、薤白、覆盆子、藿香。覆盆子、藿香。 87附件附件1 1 既是食品又是药品的物品名单既是食品又是药品的物品名单第27页，共82页。人参、人参叶、人参果、三七、土茯苓、大蓟、女贞子、山茱人参、人参叶、人参果、三七、土茯苓、大蓟、女贞子、山茱萸、川牛膝、川贝母、川芎、马鹿胎、马鹿茸、马鹿骨、丹参、萸、川牛膝、川贝母、川芎、马鹿胎、马鹿茸、马鹿骨、丹参、五加皮、五味子、升麻、天
16、门冬、天麻、太子参、巴戟天、木五加皮、五味子、升麻、天门冬、天麻、太子参、巴戟天、木香、木贼、牛蒡子、牛蒡根、车前子、车前草、北沙参、平贝香、木贼、牛蒡子、牛蒡根、车前子、车前草、北沙参、平贝母、玄参、生地黄、生何首乌、白及、白术、白芍、白豆蔻、母、玄参、生地黄、生何首乌、白及、白术、白芍、白豆蔻、石决明、石斛（需提供可使用证明）、地骨皮、当归、竹茹、石决明、石斛（需提供可使用证明）、地骨皮、当归、竹茹、红花、红景天、西洋参、吴茱萸、怀牛膝、杜仲、杜仲叶、沙红花、红景天、西洋参、吴茱萸、怀牛膝、杜仲、杜仲叶、沙苑子、牡丹皮、芦荟、苍术、补骨脂、诃子、赤芍、远志、麦苑子、牡丹皮、芦荟、苍术、补骨
17、脂、诃子、赤芍、远志、麦门冬、龟甲、佩兰、侧柏叶、制大黄、制何首乌、刺五加、刺门冬、龟甲、佩兰、侧柏叶、制大黄、制何首乌、刺五加、刺玫果、泽兰、泽泻、玫瑰花、玫瑰茄、知母、罗布麻、苦丁茶、玫果、泽兰、泽泻、玫瑰花、玫瑰茄、知母、罗布麻、苦丁茶、金荞麦、金樱子、青皮、厚朴、厚朴花、姜黄、枳壳、枳实、金荞麦、金樱子、青皮、厚朴、厚朴花、姜黄、枳壳、枳实、柏子仁、珍珠、绞股蓝、胡芦巴、茜草、荜茇、韭菜子、首乌柏子仁、珍珠、绞股蓝、胡芦巴、茜草、荜茇、韭菜子、首乌藤、香附、骨碎补、党参、桑白皮、桑枝、浙贝母、益母草、藤、香附、骨碎补、党参、桑白皮、桑枝、浙贝母、益母草、积雪草、淫羊藿、菟丝子、野菊花、
18、银杏叶、黄芪、湖北贝母、积雪草、淫羊藿、菟丝子、野菊花、银杏叶、黄芪、湖北贝母、番泻叶、蛤蚧、越橘、槐实、蒲黄、蒺藜、蜂胶、酸角、墨旱番泻叶、蛤蚧、越橘、槐实、蒲黄、蒺藜、蜂胶、酸角、墨旱莲、熟大黄、熟地黄、鳖甲。莲、熟大黄、熟地黄、鳖甲。 114 附件附件2 2 可用于保健食品的物品名单可用于保健食品的物品名单第28页，共82页。 八角莲、八里麻、千金子、土青木香、山莨菪、川乌、八角莲、八里麻、千金子、土青木香、山莨菪、川乌、广防己、马桑叶、马钱子、六角莲、天仙子、巴豆、广防己、马桑叶、马钱子、六角莲、天仙子、巴豆、水银、长春花、甘遂、生天南星、生半夏、生白附子、水银、长春花、甘遂、生天南星
19、、生半夏、生白附子、生狼毒、白降丹、石蒜、关木通、农吉痢、夹竹桃、生狼毒、白降丹、石蒜、关木通、农吉痢、夹竹桃、朱砂、米壳（罂粟壳）、红升丹、红豆杉、红茴香、朱砂、米壳（罂粟壳）、红升丹、红豆杉、红茴香、红粉、羊角拗、羊踯躅、丽江山慈姑、京大戟、昆明红粉、羊角拗、羊踯躅、丽江山慈姑、京大戟、昆明山海棠、河豚、闹羊花、青娘虫、鱼藤、洋地黄、洋山海棠、河豚、闹羊花、青娘虫、鱼藤、洋地黄、洋金花、牵牛子、砒石（白砒、红砒、砒霜）、草乌、金花、牵牛子、砒石（白砒、红砒、砒霜）、草乌、香加皮（杠柳皮）、骆驼蓬、鬼臼、莽草、铁棒槌、香加皮（杠柳皮）、骆驼蓬、鬼臼、莽草、铁棒槌、铃兰、雪上一枝蒿、黄花夹竹桃
20、、斑蝥、硫磺、雄黄、铃兰、雪上一枝蒿、黄花夹竹桃、斑蝥、硫磺、雄黄、雷公藤、颠茄、藜芦、蟾酥。雷公藤、颠茄、藜芦、蟾酥。 59附件附件3 3 保健食品禁用物品名单保健食品禁用物品名单第29页，共82页。保健食品原料保健食品原料安全性评价要求安全性评价要求药食同源（附件药食同源（附件1 1）8787种种: : 可免可免可用于保健食品（附件可用于保健食品（附件2 2）114114种种: : 二阶段二阶段？: : 见下见下禁用于保健食品（附件禁用于保健食品（附件3 3）5959种。种。第30页，共82页。以以普普通通食食品品、卫卫生生部部规规定定的的药药食食同同源源物物质质和和允允许许用用作作保保健
21、健食食品品的的物物质质以以外外的的动动植植物物或或动动植植物物提提取取物物、微微生生物物、化化学学合合成成物物为为原原料料生生产产的的保保健健食食品品，应应对对该该原原料料和和用用该该原原料料生生产产的的保健食品分别进行安全性评价。保健食品分别进行安全性评价。 该原料原则上按以下四种情况确定试验内容。该原料原则上按以下四种情况确定试验内容。用用该该原原料料生生产产的的保保健健食食品品原原则则上上须须进进行行第第一一、二二阶阶段段的的毒毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。安全性评价要求安全性评价要求第31页，共82页。国内外均无国内外均无食用历史食用历史
22、的原料或成分的原料或成分: : 四个阶段的毒性试验。四个阶段的毒性试验。仅仅在在国国外外少少数数国国家家或或国国内内局局部部地地区区有有食食用用历历史史的的原原料料或或成成分分，第第一一、二二、三三阶阶段段的的毒毒性性试试验验，必必要要时时进进行行第第四四阶阶段段毒毒性性试试验。验。未未发发现现有有毒毒或或毒毒性性甚甚微微以以及及较较大大数数量量人人群群有有长长期期食食用用历历史史，第一、二阶段的毒性试验，必要时第三阶段毒性试验。第一、二阶段的毒性试验，必要时第三阶段毒性试验。国国际际组组织织已已对对其其进进行行过过系系统统的的毒毒理理学学安安全全性性评评价价，先先进进行行第第一、二阶段毒性试
23、验。必要时第三阶段毒性试验。一、二阶段毒性试验。必要时第三阶段毒性试验。在在国国外外多多个个国国家家广广泛泛食食用用的的原原料料，进进行行第第一一、二二阶阶段段毒毒性性试试验，根据试验结果决定是否进行下一阶段毒性试验。验，根据试验结果决定是否进行下一阶段毒性试验。不同保健食品选择毒性试验原则不同保健食品选择毒性试验原则第32页，共82页。2 . 2 . 益生菌类及真菌类保健食品评审规定益生菌类及真菌类保健食品评审规定 益生菌类及真菌类保健食品必须安全可益生菌类及真菌类保健食品必须安全可靠，即食用安全，无不良反应；生产用菌种靠，即食用安全，无不良反应；生产用菌种的生物学、遗传学、功效学特性明确和
24、稳定；的生物学、遗传学、功效学特性明确和稳定；可用于保健食品的益生菌及真菌类菌种名单可用于保健食品的益生菌及真菌类菌种名单由卫生部公布。由卫生部公布。第33页，共82页。菌种来源及国内外安全食用资料，菌种的安全性评价资料菌种来源及国内外安全食用资料，菌种的安全性评价资料( (包包括毒力试验括毒力试验) )，对经过驯化、诱变的菌种，应提供驯化、诱变，对经过驯化、诱变的菌种，应提供驯化、诱变的方法及驯化剂、诱变剂等资料。的方法及驯化剂、诱变剂等资料。菌种及其代谢产物必须无毒无害，不得在生产用培养基内加菌种及其代谢产物必须无毒无害，不得在生产用培养基内加入有毒有害物质和致敏性物质。入有毒有害物质和致
25、敏性物质。抗生素和真菌的检测。抗生素和真菌的检测。在发酵过程中不得加入具有功效成分的动植物及其它物质。在发酵过程中不得加入具有功效成分的动植物及其它物质。益生菌的主种子传代不超过益生菌的主种子传代不超过1010代，工作种子传代不得超过代，工作种子传代不得超过5 5代。代。经过基因修饰的菌种不得用于保健食品。经过基因修饰的菌种不得用于保健食品。益生菌类及真菌类益生菌类及真菌类第34页，共82页。可用于保健食品的可用于保健食品的真菌菌种名单真菌菌种名单可用于保健食品的可用于保健食品的益生菌菌种名单益生菌菌种名单酿酒酵母酿酒酵母两岐双岐杆菌两岐双岐杆菌 产朊假丝酵母产朊假丝酵母婴儿双岐杆菌婴儿双岐杆
26、菌乳酸克鲁维酵母乳酸克鲁维酵母长双岐杆菌长双岐杆菌 卡氏酵母卡氏酵母 短双岐杆菌短双岐杆菌 蝙蝠蛾拟青霉蝙蝠蛾拟青霉青春双岐杆菌青春双岐杆菌 蝙蝠蛾被毛孢蝙蝠蛾被毛孢保加利亚乳杆菌保加利亚乳杆菌 灵芝灵芝嗜酸乳杆菌嗜酸乳杆菌紫芝紫芝 干酪乳杆菌干酪亚种干酪乳杆菌干酪亚种松杉灵芝松杉灵芝嗜热链球菌嗜热链球菌 红曲霉红曲霉 紫红曲霉紫红曲霉 益生菌、真菌菌种名单益生菌、真菌菌种名单第35页，共82页。以酶制剂等为原料的保健食品评审规定以酶制剂等为原料的保健食品评审规定卫法监发卫法监发20021002002100号号可用于保健食品的可用于保健食品的真菌菌种名单真菌菌种名单可用于保健食品的可用于保健食
27、品的益生菌菌种名单益生菌菌种名单酿酒酵母酿酒酵母两岐双岐杆菌两岐双岐杆菌 产朊假丝酵母产朊假丝酵母婴儿双岐杆菌婴儿双岐杆菌乳酸克鲁维酵母乳酸克鲁维酵母长双岐杆菌长双岐杆菌 卡氏酵母卡氏酵母 短双岐杆菌短双岐杆菌 蝙蝠蛾拟青霉蝙蝠蛾拟青霉青春双岐杆菌青春双岐杆菌 蝙蝠蛾被毛孢蝙蝠蛾被毛孢保加利亚乳杆菌保加利亚乳杆菌 灵芝灵芝嗜酸乳杆菌嗜酸乳杆菌紫芝紫芝 干酪乳杆菌干酪亚种干酪乳杆菌干酪亚种松杉灵芝松杉灵芝嗜热链球菌嗜热链球菌 红曲霉红曲霉 紫红曲霉紫红曲霉 第36页，共82页。酶制剂酶制剂. . 菌种来源及卫生部认定的检定单位出具的菌种检定报告；菌种来源及卫生部认定的检定单位出具的菌种检定报告；
28、. . 菌种的毒力试验报告；菌种的毒力试验报告；. . 菌种的安全性评价报告；菌种的安全性评价报告；. . 国内外该菌种使用于食品生产的文献资料；国内外该菌种使用于食品生产的文献资料；. . 发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量）。发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量）。 以酶制剂等为原料的保健食品评审规定卫法以酶制剂等为原料的保健食品评审规定卫法监发监发20021002002100号号第37页，共82页。 . . 提供明确的产品化学结构式、物理化学性质，提供明确的产品化学结构式、物理化学性质，配配体与金属离子之比、游离元素和总元素之比；体与金属离子之比、游离元素和总元素之
29、比；. . 提供氨基酸螯合物定性、定量的检测方提供氨基酸螯合物定性、定量的检测方法（包括法（包括原料和产品）以及卫生部认定原料和产品）以及卫生部认定的检验机构出具的的检验机构出具的验证报告；验证报告；. . 毒理学安全评价资料毒理学安全评价资料. . 国内外该氨基酸螯合物用于食品生产的国内外该氨基酸螯合物用于食品生产的文献资料。文献资料。 氨基酸螯合物氨基酸螯合物第38页，共82页。对申报某些保健功能的食品进行检测的兴奋剂主要有七大对申报某些保健功能的食品进行检测的兴奋剂主要有七大类：类：雄性激素雄性激素( (类固醇类固醇) )、麻醉剂麻醉剂( (可待因、杜冷丁等可待因、杜冷丁等) )、-2-
30、2受体阻断剂受体阻断剂( (心得安、心得舒等心得安、心得舒等) )、中枢神经系统兴奋剂中枢神经系统兴奋剂( (士的宁、芬氟拉明、麻黄素、咖啡因等士的宁、芬氟拉明、麻黄素、咖啡因等) )、利尿剂利尿剂( (速尿、利尿酸、安体舒通等速尿、利尿酸、安体舒通等) )、-激动剂激动剂( (瘦肉精等瘦肉精等) )、肽类激素肽类激素( (生长激素、红细胞生成素等生长激素、红细胞生成素等) )。兴奋剂检测兴奋剂检测第39页，共82页。第二部分：毒理学评价方法第二部分：毒理学评价方法试验的四个阶段和内容试验的四个阶段和内容第一阶段：急性毒性试验第一阶段：急性毒性试验第第二二阶阶段段：遗遗传传毒毒性性试试验验，3
31、0天天喂喂养养试试验验，传统致畸试验传统致畸试验 第第三三阶阶段段：亚亚慢慢性性毒毒性性试试验验：90天天喂喂养养试试验、繁殖试验、代谢试验验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验） 第40页，共82页。选择毒理学试验的原则要求以以卫卫生生部部规规定定允允许许用用于于保保健健食食品品的的动动植植物物或或动动植植物物提提取取物物（卫卫法法监监发发200220025151号号附附件件2 2）或或微微生生物物（卫卫卫卫法法法法监监监监发发发发200120012001200184848484号号号号附附附附件件件件2 2 2 2和和和和5 5 5
32、 5）为为为为原原原原料料料料生生生生产产产产的的的的保保保保健健健健食食食食品品品品 ，应应进进行行急急性性毒毒性性试试验验、三三项项致致突突变变试试验验和和3030天天喂喂养养试试验验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验。必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验。第41页，共82页。选择毒理学试验的原则要求普普普普通通通通食食食食品品品品和和和和卫卫生生部部规规定定的的药药食食同同源源物物质质（卫卫法法监监发发200220025151号附件号附件1 1）以以传传统统工工艺艺生生产产且且食食用用方方式式与与传传统统食食用用方方式式相相同同的的保保健健食食品品，一一般不要求进行毒性实验。
33、般不要求进行毒性实验。用用水水提提物物配配制制生生产产的的保保健健食食品品，如如服服用用量量为为常常规规用用量量，一一般般不不要要求求进进行行毒毒性性试试验验。如如服服用用量量大大于于常常规规用用量量时时，需需进进行行急急性性毒毒性性试试验验、三三项项致致突突变变试试验验和和3030天天喂喂养养试试验验，必必要要时时进进行行传传统统致致畸试验。畸试验。用用水水提提以以外外的的工工艺艺生生产产的的保保健健食食品品，服服用用量量为为常常规规用用量量时时，应应进进行行急急性性毒毒性性试试验验、三三项项致致突突变变试试验验。如如服服用用量量大大于于常常规规用用量量时时，需需增增加加3030天天喂喂养养
34、试试验验，必必要要时时进进行行传传统统致致畸畸试试验验和和第第三三阶阶段毒性试验。段毒性试验。第42页，共82页。选择毒理学试验的原则要求营养补充剂营养补充剂用用已已列列入入营营养养强强化化剂剂名名单单的的营营养养素素的的化化合合物物为为原原料料生生产产的的保保健健食食品品，如如其其原原料料来来源源、生生产产工工艺艺和和产产品品质质量量均均符符合合国国家家有关要求，一般不要求进行毒性试验。有关要求，一般不要求进行毒性试验。第43页，共82页。三。毒理学试验及结果判定三。毒理学试验及结果判定急性毒性试验：急性毒性试验：如如LDLD5050小小于于人人的的可可能能摄摄入入量量的的100100倍倍，
35、则则放放弃弃该该受受试试物物用用于于保保健健食食品品。如如LDLD5050大大于于或或等等于于100100倍倍者者，则则可可考考虑虑进进入入下一阶段毒理学试验。下一阶段毒理学试验。如如动动物物未未出出现现死死亡亡的的剂剂量量大大于于或或等等于于10g/kgBW10g/kgBW（涵涵盖盖人人体体推推荐荐量量的的100100倍倍），则则可可进进入入下下一一阶阶段段毒毒理理学试验。学试验。对对人人的的可可能能摄摄入入量量较较大大和和其其它它一一些些特特殊殊原原料料的的保保健健食食品品，按按最最大大耐耐受受量量法法给给予予最最大大剂剂量量动动物物未未出出现现死死亡亡，也也可可进进入下一阶段毒理学试验。
36、入下一阶段毒理学试验。第44页，共82页。遗传毒性试验：遗传毒性试验： Ames试验试验或或V79/HGPRT、 TK基因突变试验基因突变试验骨骨髓髓细细胞胞微微核核试试验验或或哺哺乳乳动动物物骨骨髓髓细细胞胞染染色色体体畸畸变变试试验验小鼠精子畸形分析小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸变分析或睾丸染色体畸变分析其其它它备备选选遗遗传传毒毒性性试试验验：显显性性致致死死试试验验、果果蝇蝇伴伴性隐性致死试验、非程序性性隐性致死试验、非程序性DNA合成实验合成实验第45页，共82页。遗传毒性试验结果的判定遗传毒性试验结果的判定三三项项试试验验, ,体体外外或或体体内内有有一一项项或或以以上上试试验验阳
37、性，放弃该受试物用于保健食品。阳性，放弃该受试物用于保健食品。如如三三项项试试验验均均为为阴阴性性，则则进进入入下下一一步步的的毒性试验。毒性试验。第46页，共82页。 3. 303. 30天喂养试验天喂养试验最最大大未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量大大于于或或等等于于人人的的可可能能摄摄入入量量的的100100倍倍，可可进进行行安安全全性性评评价。价。特特殊殊原原料料：在在最最大大灌灌胃胃剂剂量量组组或或在在饲饲料料中中的的最最大大掺掺入入量量剂剂量量组组未未发发现现有有毒毒性性作作用用，可可进进行行安安全全性性评评价价 至至少少大大于于或或等等于于人人的的可能摄入量的可能摄入量的7
38、070倍倍 。特殊功能的保健食品应进行具体分析。特殊功能的保健食品应进行具体分析。第47页，共82页。长期毒性试验外观亚慢性、慢性生长发育(体重)毒性试验体液行为过程中血液学毒性体征血清生化学活杀解剖尿分析最终体重脏器湿重器官/组织生物学标志脏/体比酶固定/染色内源性成分组织病理学胆汁、尿第48页，共82页。4.4.大鼠致畸试验雄鼠雌鼠阴栓（天）孕07染毒 1620处死检查活胎、吸收胎、早死胎、晚死胎大鼠外观畸形骨骼畸形内脏畸形第49页，共82页。致畸试验结果的判定致畸试验结果的判定 以以LDLD5050或或3030天天喂喂养养实实验验的的最最大大未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量设设计
39、计的的受受试试物物各各剂剂量量组组，如如果果在在任任何何一一个个剂剂量量组组观观察察到到受受试试物物的的致致畸畸作作用用，则则应应放放弃弃该该受受试试物物用用于于保保健健食食品品，如如果果观观察察到到有有胚胚胎胎毒毒性性作作用用，则应进行进一步的繁殖试验。则应进行进一步的繁殖试验。第50页，共82页。 其它毒理学试验其它毒理学试验 5.905.90天喂养实验天喂养实验 最最大大未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量大大于于人人的的可可能能摄摄入入量量的的100100倍进行安全性评价。倍进行安全性评价。国内外均无食用历史的原料或成分：国内外均无食用历史的原料或成分：最最大大未未观观察察到到有有
40、害害作作用用剂剂量量小小于于或或等等于于人人的的可可能能摄摄入入量量的的100100倍倍者者表表示示毒毒性性较较强强，应应放放弃弃该该受受试试物物用用于于保保健食品。健食品。国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分：国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分：最最大大未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量大大于于100100倍倍而而小小于于300300倍倍者者，应应进行慢性毒性试验。进行慢性毒性试验。大大于于或或等等于于300300倍倍者者则则不不必必进进行行慢慢性性毒毒性性试试验验，可可进进行安全性评价。行安全性评价。第51页，共82页。其它毒理学试验其它毒理学试验 6.6.
41、慢性毒性：慢性毒性：最最大大未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量小小于于或或等等于于人人的的可可能能摄摄入入量量的的5050倍倍者者，表表示示毒毒性性较较强强，应应放放弃弃该该受受试试物物用用于于保保健食品。健食品。未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量大大于于5050倍倍而而小小于于100100倍倍者者，经经安安全性评价后，决定该受试物是否可用于保健食品。全性评价后，决定该受试物是否可用于保健食品。最最大大未未观观察察到到有有害害作作用用剂剂量量大大于于或或等等于于100100倍倍者者，则则可可考考虑允许用于保健食品。虑允许用于保健食品。第52页，共82页。其它毒理学试验其它毒理学试验
42、 7.7.致癌试验致癌试验根根据据致致癌癌试试验验所所得得的的肿肿瘤瘤发发生生率率、潜潜伏伏期期和和多多发发性性等等进进行致癌试验判定的原则是：行致癌试验判定的原则是：肿瘤只发生在试验组动物，对照组中无肿瘤发生。肿瘤只发生在试验组动物，对照组中无肿瘤发生。试试验验组组与与对对照照组组动动物物均均发发生生肿肿瘤瘤，但但试试验验组组发发生生率率高。高。试试验验组组动动物物中中多多发发性性肿肿瘤瘤明明显显，对对照照组组中中无无多多发发性性肿瘤，或只是少数动物有多发性肿瘤。肿瘤，或只是少数动物有多发性肿瘤。试试验验组组与与对对照照组组动动物物肿肿瘤瘤发发生生率率虽虽无无明明显显差差异异，但但试试验组中
43、发生时间较早。验组中发生时间较早。第53页，共82页。安全性评价考虑的因素安全性评价考虑的因素试验指标的统计学意义和生物学意义：试验指标的统计学意义和生物学意义：生理作用与毒性作用：生理作用与毒性作用：时间时间- -毒性效应关系：毒性效应关系：特殊人群和敏感人群：特殊人群和敏感人群： 人的可能摄入量较大的保健食品：人的可能摄入量较大的保健食品： 含乙醇的保健食品：含乙醇的保健食品：动物年龄对试验结果的影响动物年龄对试验结果的影响安全系数安全系数 人体资料人体资料 综合评价综合评价 保健食品安全性的重新评价（必要时）保健食品安全性的重新评价（必要时）第54页，共82页。四、安全评价工作中的有关问
44、题四、安全评价工作中的有关问题1.原料的安全性是建立在长期食用、药用的经验的基础原料的安全性是建立在长期食用、药用的经验的基础上，系统的全面的毒理学研究资料尚不完整，尤其是上，系统的全面的毒理学研究资料尚不完整，尤其是改变了传统的食用方式时。其安全性应高度关注。应改变了传统的食用方式时。其安全性应高度关注。应注重原料的安全评估注重原料的安全评估，特别是三致和慢性毒性。，特别是三致和慢性毒性。2.加强原料中有害成分的鉴定与毒性研究。加强原料中有害成分的鉴定与毒性研究。3.对配伍模式进行毒性研究。对配伍模式进行毒性研究。4.有益作用与有害作用的权衡与判定。有益作用与有害作用的权衡与判定。5.方法学
45、问题方法学问题第55页，共82页。保健食品含有功效成分，采用一套方法难保健食品含有功效成分，采用一套方法难以评价结构和功能不同的物质，传统的毒以评价结构和功能不同的物质，传统的毒理学安全评价指标有一定局限性，保健食理学安全评价指标有一定局限性，保健食品的安全评价应引入个案评估的原则，了品的安全评价应引入个案评估的原则，了解其作用机制将有助于安全评价。解其作用机制将有助于安全评价。第56页，共82页。作用机制研究将有助于安全评价作用机制研究将有助于安全评价保健食品含有功效成分，采用一套方法保健食品含有功效成分，采用一套方法难以评价结构和功能不同的物质，传统难以评价结构和功能不同的物质，传统的毒理
46、学安全评价指标有一定局限性，的毒理学安全评价指标有一定局限性，保健食品的安全评价应引入个案评估的保健食品的安全评价应引入个案评估的原则，了解其作用机制将有助于安全评原则，了解其作用机制将有助于安全评价。价。第57页，共82页。安全系数安全系数 通常为通常为100化学物：纯度清楚，没有特别的营养价值，人化学物：纯度清楚，没有特别的营养价值，人群暴露量较低，确定对健康不良影响采用给予群暴露量较低，确定对健康不良影响采用给予动物不同剂量水平来估计最大未观察有害作用动物不同剂量水平来估计最大未观察有害作用剂量，从而应用适当的安全系数确定安全摄入剂量，从而应用适当的安全系数确定安全摄入量。量。方法学问题
47、方法学问题第58页，共82页。整体食物：各种化合物的复杂的混合体，成份整体食物：各种化合物的复杂的混合体，成份和营养价值变化大，体积大易产生饱腹，给与和营养价值变化大，体积大易产生饱腹，给与动物的量通常只是人体膳食含量的几倍，采用动物的量通常只是人体膳食含量的几倍，采用的膳食模式是否营养均衡，是否引起营养问题。的膳食模式是否营养均衡，是否引起营养问题。因为非受试物本身直接引起的不良反应需要避因为非受试物本身直接引起的不良反应需要避免，因此，采用动物实验来测试整体食物的潜免，因此，采用动物实验来测试整体食物的潜在不良作用是很困难的。实质等同原则可用于在不良作用是很困难的。实质等同原则可用于对其进
48、行安全评价。对其进行安全评价。方法学问题方法学问题第59页，共82页。统计学意义生物学意义无有无有毒理学试验结果的统计学意义和生物学意义 第和第种情况最为常见。 统计学意义生物学意义损害效应/非损害效应第60页，共82页。统计学意义和生物学意义 第种情况是有统计学意义但无生物学意义，此种情况相当见。 在判断实验结果的生物学意义时，有无剂量-反应关系是关键。 有统计学意义但无生物学意义的情况，更常见的原因是因为实验设计不良所致。 第种情况是具有生物学意义但无统计学意义，这可能是因为该事件的发生是极端罕见的。 第61页，共82页。统计学意义和生物学意义在评价毒理学试验结果时，要综合评价实验结果的统
49、计学意义和生物学意义一般来说，具有统计学意义是具有生物学意义的必要条件之一。正确地利用统计学假设检验的结果有助于确定实验结果的生物学关联。第62页，共82页。判断生物学意义的步骤（1）纵向比较，此参数的改变有无剂量-反应关系。 （2）横向比较，此参数的改变是否伴有其它相关参数的改变。 （3）与历史性对照比较，同时进行的阴性对照应在历史性对照的均数3SD 范围之内，否则应重新试验。观察值与对照组比较，差别具有统计学显著性（P 0.05；+，P0.05；+，P0.01 剂量组实验1实验2实验3高剂量+LOAEL？中剂量+LOAEL+NOAEL？低剂量NOAEL第66页，共82页。五。注意点立题（市
50、场调研和专家咨询）主管单位和检验单位咨询原料配方，受试样品（质量、溶解性、样品前处理），申报功能，人拟用量。申报前专家咨询第67页，共82页。对中药安全性的关注点中药大多为植物，毒性一般低于化学药品。有长期传统药用的经验。人体（人群）使用的经验与动物毒理学安全性评价是互为补充，不能替代。个人经验和个案报告作为因果关系的证据不充分，应发展循证医学。应发展中药药材复方的毒理学研究及安全性数据库。特别是体外毒性筛选和靶器官预测，ADMETox。第68页，共82页。美国NTP（2000）美国国家毒理学计划（NTP）1500多种在美国上市的草本植物中，其有益作用或有害作用大部分没有经过科学证实。膳食补充
51、剂健康教育法未要求对1994年前上市的草本植物进行安全性评价。FDA负责举证，安全性评价的责任在政府。第69页，共82页。美国NTP（2000）10种白毛茛：进行生殖毒性发育毒性慢性毒性致癌性研究紫草：具有肝毒性并可致大鼠肝癌和肺癌，进行生殖毒性研究蒲勒酮/胡薄荷酮（欧亚薄荷紫穗薄荷等）：可能具有胚胎毒性，进行生殖毒性慢性毒性致癌性研究银杏：进行神经毒性慢性毒性致癌性研究松果菊：进行免疫毒性亚慢性毒性慢性毒性致癌性研究第70页，共82页。KAVA卡瓦DallasL.ClouatreToxicologyLetters150(2004)8596Kavakava:examiningnewreport
52、softoxicity第71页，共82页。KAVA在1998年以前，卡瓦（Pipermethysticum）提取物被认为是抗焦虑药很安全的替代物，并且可能具有大量另外的效益。至2002年底出版的综述继续了证实卡瓦的安全和效益。不过，自2003年1月卡瓦提取物在欧共体和加拿大已经被禁止，并USFDA警告由于肝功能衰竭的11例导致移植，包括4例死亡。从各种各样的数据库全部为的评论的78例肝毒性被认为与到卡瓦摄入有关联。这些不良事件中，4例可能与单独摄入有关联，另外的23例可能与摄入卡瓦有关联，但也涉及摄入其它化合物。第72页，共82页。卡瓦内酯第73页，共82页。KAVA已知卡瓦内酯肝毒性3种可能
53、的机制为抑制细胞色素P450，在肝脏谷胱甘肽水平的，降低环氧合酶活性。在任何分析中，卡瓦提取物的直接毒性相当小，然而药物相互作用和/或与其它化合物的毒性增强的可能性很大。目前，卡瓦毒性看来是“特异质”。然而，与其它抗焦急药比较,卡瓦提取物的危险-效益比仍然保持良好。第74页，共82页。ILSI在食物和膳食补充剂中使用植物和植物制制安全性评价指南2003第75页，共82页。为危害鉴定和表征进行实验动物研究的基本原则和需要的7点推荐实验研究的范围取决于使用历史是否足够和产品与传统的食物或食物成分的可比较性为鉴别可能的安全问题应该评定有益效应和有害效应的作用模式，包括在植物产品和摄入的其他生物学活性
54、化合物之间相互作用的可能性。取决于使用的历史和作用模式，可能必需进行特殊研究。通常应该对商业定型产品进行安全性研究，剂量范围包括有害效应第76页，共82页。推荐（7点）为特定生物活性组分设计的体外和体内研究能为安全性研究提供有价值的信息或相关的终点的解释应该研究基质对活性成分的吸收率和范围的影响，特别当从某一纯度外推到另一纯度时基于较纯的制剂研究可低估或高估有害效应的潜力（产品评价）第77页，共82页。安全性评价所需信息的决策树（2003）第78页，共82页。决策树1.此成分或产品申请的使用方式是否与植物传统使用方式相同？是2.与此传统的成分或产品的高消费者相比，建议的使用是否导致摄入的显著增
55、加？否是AB否3.此产品或成分是否是传统型的食物或成分提取物或衍生物(如大蒜油，松果菊提取物，茶多酚)？是4.与高消费者传统的使用比较，建议的使用将导致摄入的显著增加或相关成分生物利用率的显著增加？否是CD否5.除了已确定的差别外，产品或成分能否与传统食物相比?是E否6.产品或成分是否是有草药使用史的植物或植物部分？是7.活性成分是否被鉴别或表征？是8.医用时，有无任何有害副作用的指征？否F否G否是FH第79页，共82页。决策树按决策树的出口点的要求，在草药产品上应列出的信息:AI,II,III,IV;BI,II,III,IV,VI,VII,VIII,(IX);CI,II,III,IV,V;D
56、I,II,III,IV,V,VI,VII,VIII(IX);EI,II,III,IV,V,VI,VII,VIII,IX(特别强调的原因和意义是与传统比较的差别，如因加工引起的变化);FI,II,III,IV,V,VI,VII,VIII,IX;G产品作为食物或膳食补充剂被定型生产和安全评价以前，需要被特征化；H不加至食物或用于膳食补充剂，与可比较的医用摄入并无综合危险度时:效益分析。证明植物的膳食补充剂的安全性，需要的信息要点:I成分或产品的说明;II来源有机体的细节(属，种，消费的植物部分);III经食物和/或其它来源的人体先前暴露的证据;IV使用范围和估计摄入量;V加工技术的细节和配方的稳定性;VI营养学评价(包括活性成分对其它饮食成分生物利用度影响的评价);VII毒物学评价(包括其它饮食成分对活性成分生物利用度影响的评价);不可能列出必须的毒性试验的清单，应按个例在的基础上选择研究项目;VIII人的临床的数据，包括反应的变异性，有害作用报告和禁忌征;IX辅助的数据(效益的作用模式，以便考虑特殊研究，总暴露，易感人群等)。第80页，共82页。TheEnd第81页，共82页。100083北京学院路38号北京大学医学部公卫学院毒理学系周宗灿电话：（010）82801531办公室13501340721第82页，共82页。
