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1、流式的原理及临床运用什么是流式细胞仪？检测流动中细胞颗粒的仪器目的物可以是细胞、细菌或各种微粒0.5um50um范围内流式细胞仪原理引见流式细胞仪根本原理表示图流式细胞仪根本原理表示图流式细胞仪检测什么信号？细胞抗原抗体荧光激光束经过流式细胞仪我们可以得到以下信息 - 相对细胞颗粒密度和内部复杂度(SSC) - 相对细胞大小(FSC) - 染色过细胞的相对荧光强度流式细胞仪标本预备染色的普通原那么及方法标本来源：外周血、骨髓、组织块、培育细胞、零落细胞及其他。以及血清或各类体液样本。抗体染色普通方法外周血白细胞分析：100ul全血血小板分析：15ul全血根据样本血小板数量红细胞分析：1ul全血
2、根据样本中红细胞数稀释后运用骨髓：100ul其他样本，计数后决议运用体积目的细胞数量及检测终浓度：目的细胞数量及检测终浓度：1106/ml孵育、溶血、固定孵育、溶血、固定抗体孵育：室温下避光15分钟某些情况下如：细胞内因子检测需冰育溶血：如样本含中有红细胞需溶血样本溶血后离心上机检测固定后可放置较长时间流式细胞仪分析报告及图谱流式细胞仪分析报告及图谱SS侧向散射光-反响细胞内物质的多少FS前向散射光-反响细胞大小设门：选择要分析的细胞群体设定阴性、阳性范围目前流式细胞仪临床检测工程目前流式细胞仪临床检测工程流式细胞仪的临床运用流式细胞仪的临床运用=HIV免疫分型，CD4绝对计数=白血病和淋巴瘤
3、的免疫分型=肿瘤的细胞周期和倍体分析=网织红细胞计数=细胞移植的交叉配型和免疫形状监测=干细胞计数=残量白血病细胞检查=HLA-B27检查=血小板功能及相关疾病1、 HLA-B27的检测的检测强直性脊柱炎ankylosing spondylistis意为弯曲的脊柱。它是和种慢性、进展性和炎性疾病，主要累及骶骼关节、脊柱、脊柱骨软组织及四肢关节，表现为椎间盘维环和纤维环附近结缔组织的骨化，椎间动关节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严重者可失去劳动才干。强直性脊柱炎是血清阴性脊柱关节病中具有代表性的疾病，临床上曾长期把AS 误以为是类风湿性关节炎的一个亚型，60 年代以来人们才认识到期无论从病因学、遗
4、传学、流行病学和临床表现特点等诸多方面来看，AS 都是一种不同于类风湿性关节炎的独立疾病。就目前的研讨文献而言，HLA-B27 与AS 并非绝对相关，有些AS 患者表现为HLA-B27阴性，而且并非一切HLA-B27 阳性者均出现AS 病症。B27与强直性脊柱炎与强直性脊柱炎HLA-B27诊断的临床意义强直性脊柱炎强直性脊柱炎90-100% 的强直性脊柱炎患者的强直性脊柱炎患者HLAB27为阳性。但为阳性。但是是HLA-B27阳性的人群中只需阳性的人群中只需820是强直性脊柱炎。是强直性脊柱炎。瑞特综合征瑞特综合征6590瑞特综合症患者瑞特综合症患者HLA-B27为阳性。假设为阳性。假设HLA
5、B27+个体是非淋菌性尿道炎，那么有个体是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的能够性开展为瑞的能够性开展为瑞特综合症，只需特综合症，只需1的能够性正常。的能够性正常。HLAB27不是该疾病发生的必不是该疾病发生的必要条件，但是却与病程开展有严密联络。要条件，但是却与病程开展有严密联络。“反响性关节炎是一种本身限制的少关节型关节炎伴随着革兰氏反响性关节炎是一种本身限制的少关节型关节炎伴随着革兰氏阴性细菌如杆菌性痢疾，沙门氏菌，弧形杆菌，耶尔森氏菌和至贺氏阴性细菌如杆菌性痢疾，沙门氏菌，弧形杆菌，耶尔森氏菌和至贺氏菌引起的胃肠感染。菌引起的胃肠感染。银屑病关节炎银屑病关节炎 - 90%的银屑病关节
6、炎结合荐肠关节炎和脊椎炎患者的银屑病关节炎结合荐肠关节炎和脊椎炎患者HLA B27阳性。阳性。急性前葡萄膜炎通常表现为疼痛，畏光和流泪。能够是虹膜感染或急性前葡萄膜炎通常表现为疼痛，畏光和流泪。能够是虹膜感染或结合了睫状体或视网膜萎缩。结合了睫状体或视网膜萎缩。青少年风湿症青少年风湿症/慢性关节炎慢性关节炎II 这些儿童中这些儿童中75为为HLA B27+。相反，。相反，青少年风湿症青少年风湿症/慢性关节炎慢性关节炎I，同样也是少关节性的，但是更常见于女，同样也是少关节性的，但是更常见于女孩，与慢性虹膜睫状体炎孩，与慢性虹膜睫状体炎(30%)，阳性的，阳性的ANA (80%)和和HLA DR5
7、关联，关联，却不是却不是B27。 HLA-B27的临床检测的临床检测HLA-B27属于1型MHC基因。根本上表达在机体一切有核细胞上，特别是淋巴细胞外表有丰富的含量。运用荧光定量规范微球，校正HLA-B27实验条件后，测定样本中T淋巴细胞HLA-B27表达程度。假设HLA-B27表达程度大于规范微球设定MARK，那么为阳性结果；假设HLA-B27表达程度低于规范微球设定MARK，那么为阴性结果。Anti-HLA-B27Kit(美国BDBiosciences公司；CAT:340183)，其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE2、HLA-B27Calibrationbead
8、s3、FACSLysingSolutionHLA-B27流式细胞仪检测流式细胞仪检测2 2、淋巴细胞亚群分析、淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群根底知识淋巴细胞亚群根底知识T淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞及肿瘤细胞。外表标志物：CD3，与TCR构成复合体，是T细胞识别抗原和转导信号的主要单位。CD3+/CD4+：辅助性T细胞CD3+/CD8+：杀伤性T细胞CD8+T细胞又称细胞毒性细胞又称细胞毒性T细胞，细胞，Tc或或CTL，它在，它在T细胞免细胞免疫应对中发扬重要功能。疫应对中发扬重要功能。Tc细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素：穿孔素细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素：穿孔素perfori
9、n和颗粒酶和颗粒酶granzyme，杀伤靶细胞。，杀伤靶细胞。B淋巴细胞淋巴细胞B淋巴细胞是免疫系统中的抗体产生细胞。1，产生的抗体可与抗原起特异性的结合，如中和细菌的外毒素使其失去毒性作用；2，抗体与抗原结合后构成的复合物易被吞噬细胞去除；3，抗体与抗原结合后再结合补体去除病原体。B细胞特异性标志物：CD19NK细胞细胞NK自然杀伤细胞：识别病毒感染细胞外表表达的相应配体，NK细胞一经识别病毒感染细胞后即对之施加杀伤作用。NK细胞外表标志物：CD3-/CD16+CD56+经过淋巴细胞亚群的检测可了解在不同情况下体内免疫功能形状，辅助临床疾病的诊断，探求疾病发病机理、病程、预后，监测、指点临床
10、治疗方案。淋巴细胞亚群的临床检测淋巴细胞亚群的临床检测总总T和总和总B判别某些免疫缺陷和本身免疫性疾病判别某些免疫缺陷和本身免疫性疾病T-T-淋巴细胞上升多见于：慢性活动性肝炎或慢性迁延性肝淋巴细胞上升多见于：慢性活动性肝炎或慢性迁延性肝炎；器官移植排斥反响；重症肌无力；甲亢与甲状腺炎患炎；器官移植排斥反响；重症肌无力；甲亢与甲状腺炎患者；何杰金病者；何杰金病T-T-淋巴细胞下降多见于：恶性肿瘤；本身免疫性疾病，如淋巴细胞下降多见于：恶性肿瘤；本身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等；原发性免疫缺陷病，系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等；原发性免疫缺陷病，如生天性胸腺发育不全等、艾滋病；接
11、受放疗、化疗或者如生天性胸腺发育不全等、艾滋病；接受放疗、化疗或者运用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂运用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂B-B-淋巴细胞上升多见于：多发性骨髓瘤；巨球蛋白血症；淋巴细胞上升多见于：多发性骨髓瘤；巨球蛋白血症；淋巴瘤；艾滋病淋巴瘤；艾滋病 B-B-淋巴细胞下降多见于：原发性免疫缺陷病，如性联无丙淋巴细胞下降多见于：原发性免疫缺陷病，如性联无丙种球蛋白血症等、恶性肿瘤种球蛋白血症等、恶性肿瘤 T-T-淋巴细胞与淋巴细胞与B-B-淋巴细胞同时下降多见于：结合免疫缺陷淋巴细胞同时下降多见于：结合免疫缺陷病，如重病症结合免疫缺陷病等病，如重病症结合免疫缺陷病等 CD4+和CD8+T
12、细胞有助于监测患有免疫缺陷疾病如SCID、AIDS的病人体内CD4+细胞亚群的百分率相对降低，而CD8+群体的百分率相对升高，本身免疫性疾病如在SLE病人中，CD8+淋巴细胞的相对百分比往往会降低，但当运用类固醇药物治疗时，也能够上升。在急性GVHD和移植排斥中，CD8+淋巴细胞所占的比例有能够在正常人的范围之外Th和和Ts淋巴细胞的百分数淋巴细胞的百分数CD4+/CD8+的比值：评价那些本身免疫失调或被疑心是免疫失调或知患有免疫缺陷的病人的免疫形状，此外，这一比值还可用来监测骨髓移植病人以免遭到急性GVHD的攻击CD4/CD8升高：本身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、SLE。CD4/CD8降低
13、：病毒感染、恶性肿瘤、再生妨碍性贫血等。Th/Ts比值比值自然杀伤细胞自然杀伤细胞NK NK细胞增高常见于：某些病毒感染性疾病的早期；长期运用干扰素或运用干扰素的诱导物；骨髓移植后；习惯性流产。NK细胞降低常见于：恶性肿瘤，特别是中晚期或伴有转移的肿瘤；免疫缺陷病及运用肾上腺激素等免疫抑制剂。部分病毒感染、细菌感染及真菌感染；某些白血病及白血病前期。恶性肿瘤患者T 细胞亚群和SIL22R 的变化及意义卢香兰1 ,李霞1 ,王萍萍1 ,李玲2 ,李艳1 3 4 2 中国医科大学学报J Chin Med Univ 第33 卷第3 期2004 年6 月疾病 T 细胞亚群 CD4+/CD8+ CD4+
14、 CD8+ 类风关 活动期 SLE - 或 活动期 Sjogren综合症 多发性硬化症 重症肌无力 膜型肾小球肾炎 胰岛素依赖性糖尿病 乙型肝炎 本身溶血性贫血 上呼吸道感染 传染性单核细胞增多症 急性期 巨细胞病毒感染 乙肝 急性期/慢性肝炎 结核 胸水/重症外周血 麻风 疟疾 血吸虫病 AIDS CD4+/CD8+ CD3+ CD4+ CD8+肿瘤 再障及粒细胞减少症 巨细胞病毒感染 血小板减少 活动性特应性皮炎 过敏性皮炎 BD四色淋巴亚群检测试剂盒：MultiTESTCD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APCMultiTESTCD3FITC/CD16+56PE/CD45PerCP/CD19APCQ&A
