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1、暖了，花开了，碧水庭院，该买了！工作在繁华都市，居住，我更喜欢安静点的地方喜欢那种离尘不离城的悠然空间，那种繁华之外的宁静生活在春暖花开的日子，在民心河畔邂逅碧水庭院，多年的居住理想，从此，有了清晰的图象第四章第四章 中药制剂的含量测定中药制剂的含量测定目 录2 供试品溶液的制备供试品溶液的制备3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法1 1 概述概述1 1 概述概述二、特点：单一成分二、特点：单一成分 君药、贵重药、有毒药君药、贵重药、有毒药一、目的：一、目的： 控制制剂的质量，控制制剂的质量，保证临床用药的保证临床用药的 安全、有效安全、有效2 供试品溶液的制备供试品溶液的制备最大限度地保留
2、被测定组分，最大限度地保留被测定组分，除去干扰物质，除去干扰物质，将被测组分浓缩至最小检测限将被测组分浓缩至最小检测限原则原则粉碎粉碎：目的：目的：样品均匀；样品均匀；充分提取充分提取提取提取：关键是提取完全关键是提取完全除杂除杂：关键是不损失待测成分关键是不损失待测成分浓缩浓缩：达到检测限达到检测限衍生化衍生化：定量反应定量反应步骤步骤供试品溶液的制备供试品溶液的制备关键的两步关键的两步供试品溶液的制备供试品溶液的制备样品的提取样品的提取 冷浸、回流提取、索氏提取、升华、冷浸、回流提取、索氏提取、升华、 超声提取、超临界流体萃取超声提取、超临界流体萃取样品的净化样品的净化 液液- -液萃取法
3、、色谱法、沉淀法、液萃取法、色谱法、沉淀法、 升华法、消化法、升华法、消化法、 盐析法、盐析法、 水蒸汽蒸馏法水蒸汽蒸馏法索氏提取索氏提取回流提取回流提取特点：无需过滤特点：无需过滤 、提取效率高、提取效率高、所需溶剂少、提取杂质少。但所需溶剂少、提取杂质少。但费时、提取不完全费时、提取不完全 特点：对热不稳定或具有挥发性的成分不特点：对热不稳定或具有挥发性的成分不宜使用。提取完全，快速。宜使用。提取完全，快速。提取方法提取方法回流瓶，回流瓶，0.52h索氏提取器，索氏提取器，58h浸泡过夜浸泡过夜挥发性成分挥发性成分20min特点：快速、低温、省时，提取完全特点：快速、低温、省时，提取完全特
4、点：操作简单，适于热不稳定的样品，特点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少。少有于定量分析。且提取杂质少。少有于定量分析。提取方法提取方法冷浸冷浸水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏超声提取超声提取例：例：P9091（本科教材）（本科教材） 精密称取精密称取，准确加入甲醇，准确加入甲醇50ml50ml，称重，超声提取，称重，超声提取30min30min，放冷，放冷并再次称重，用甲醇补足其重量并再次称重，用甲醇补足其重量特点：计量关系准确特点：计量关系准确注明超声波的频率、功率，以保证重现性注明超声波的频率、功率，以保证重现性最常用的提取方法最常用的提取方法（HPLC）供试品溶液的制备供试品溶液的制备常
5、用溶剂：常用溶剂：正丁醇、氯仿、正丁醇、氯仿、 EtOAc、乙醚、乙醚多次萃取（多次萃取（3-53-5次）次）调整水相酸度，提取有机酸、有机碱调整水相酸度，提取有机酸、有机碱利用盐析作用，减少乳化利用盐析作用，减少乳化净化方法净化方法液液-液萃取法液萃取法例：例：P69离子对萃取法：生物碱离子对萃取法：生物碱 P125溴百里酚蓝溴百里酚蓝净化方法净化方法液液-液萃取法液萃取法溴甲酚绿溴甲酚绿中药制剂分析常用的方法中药制剂分析常用的方法净化方法净化方法色谱法色谱法柱的大小：长柱的大小：长10cm，内径，内径10mm步骤：装柱、上样、洗脱、收集步骤：装柱、上样、洗脱、收集装柱方法：湿法装柱、装柱方
6、法：湿法装柱、干法干法装柱装柱装柱要求：填装均匀、装柱要求：填装均匀、紧密紧密， 表面表面平整平整色谱柱净化方法色谱柱净化方法柱填料：柱填料：硅胶、氧化铝、活性炭、硅胶、氧化铝、活性炭、键合相硅胶、大孔树脂、键合相硅胶、大孔树脂、离子交换树脂、聚酰胺离子交换树脂、聚酰胺色谱柱净化方法色谱柱净化方法例：例：P124 生物碱生物碱甲醇提甲醇提氧化铝氧化铝乙醇洗脱乙醇洗脱氧化铝氧化铝硅胶硅胶酸性吸附剂，强烈保留碱性化合物酸性吸附剂，强烈保留碱性化合物适用于中性或酸性成分适用于中性或酸性成分洗脱顺序：极性小洗脱顺序：极性小大（正相洗脱）大（正相洗脱）碱性吸附剂，碱性吸附剂，适用于碱性成分适用于碱性成分
7、洗脱顺序：同硅胶洗脱顺序：同硅胶例：例： 三七皂苷三七皂苷甲醇提取甲醇提取蒸干蒸干水溶解水溶解上样上样水洗水洗70%乙醇洗乙醇洗收集收集色谱柱净化方法色谱柱净化方法大孔树脂大孔树脂分为极性、非极性分为极性、非极性非极性型（非极性型（D101等）常用等）常用 使用前需要用有机溶剂除去杂质使用前需要用有机溶剂除去杂质 洗脱顺序：极性大洗脱顺序：极性大小（反相洗脱）小（反相洗脱）例例 益母草流浸膏中盐酸水苏碱的鉴别益母草流浸膏中盐酸水苏碱的鉴别 取本品取本品10 ml，水浴蒸干，残渣加水，水浴蒸干，残渣加水10ml使溶解，加稀盐酸调节使溶解，加稀盐酸调节pH值至值至12，加在加在强酸性阳离子交换树脂
8、柱（强酸性阳离子交换树脂柱（732Na-型，内径型，内径0.9cm，柱长，柱长12cm）上，以水洗至流出液近）上，以水洗至流出液近无色，弃去水液，再以无色，弃去水液，再以2mol/L氨溶液氨溶液40ml洗洗脱，收集洗脱液脱，收集洗脱液作为供试品溶液。作为供试品溶液。 色谱柱净化方法色谱柱净化方法离子型化合物离子型化合物离子交换树脂离子交换树脂洗脱顺序：极性大洗脱顺序：极性大小（反相洗脱）小（反相洗脱）聚酰胺聚酰胺活性炭活性炭非极性吸附剂，除色素非极性吸附剂，除色素 P72常用于黄酮类常用于黄酮类色谱柱净化方法色谱柱净化方法固相萃取法固相萃取法净化方法净化方法C18小柱小柱 分开脂溶性和水溶性成
9、分分开脂溶性和水溶性成分例：例：P204操作：操作：柱的活化柱的活化上样上样清洗清洗洗脱洗脱 洗脱顺序：极性大洗脱顺序：极性大小（反相洗脱）小（反相洗脱）P194蒸馏法蒸馏法沉淀法沉淀法例例 六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定 取本品约取本品约2g，研细，精密称定，用，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约水蒸汽蒸馏，收集馏出液约450ml，置置500 ml量瓶中，加水稀释至刻度。量瓶中，加水稀释至刻度。274nm波长处测定吸收度波长处测定吸收度。净化方法净化方法用于挥发性成分用于挥发性成分加入沉淀剂加入沉淀剂消化法消化法湿法消化：强酸腐蚀湿法消化：强酸腐蚀干法消化：
10、高温炽灼干法消化：高温炽灼测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元素净化方法净化方法注意：各剂型样品的预处理注意：各剂型样品的预处理原则：应根据被测成分的原则：应根据被测成分的理化性质和存在状态理化性质和存在状态以及各类成分之间相互干扰以及各类成分之间相互干扰的程度及的程度及制备工艺制备工艺与与剂型剂型的不同的不同、赋形剂赋形剂的特点的特点等进行综合考虑等进行综合考虑固体制剂：丸剂、片剂、颗粒剂、栓剂、胶囊固体制剂：丸剂、片剂、颗粒剂、栓剂、胶囊 半固体制剂：流浸膏、浸膏、糖浆、煎膏半固体制剂：流浸膏、浸膏、糖浆、煎膏液体制剂：合剂、口服液、酊剂、注射剂液体制剂：合剂、口服液、酊剂、注射
11、剂片剂：淀粉、糊精、滑石粉、糖精片剂：淀粉、糊精、滑石粉、糖精散剂：注意取样的代表性散剂：注意取样的代表性蜜丸、糖浆剂、煎膏剂：消除粘性蜜丸、糖浆剂、煎膏剂：消除粘性颗粒剂：糖、糊精颗粒剂：糖、糊精固体制剂：排除固体制剂：排除赋形剂的影响赋形剂的影响注意：各剂型样品的预处理注意：各剂型样品的预处理固体稀释剂：硅藻土固体稀释剂：硅藻土 P144栓剂：基质（油脂性基质和亲水性基质）栓剂：基质（油脂性基质和亲水性基质）滴丸：基质（水溶性基质和水不溶性基质）滴丸：基质（水溶性基质和水不溶性基质） 复方丹参滴丸中三七的测定复方丹参滴丸中三七的测定 取本品取本品4040丸，加甲醇丸，加甲醇10ml10ml
12、，振摇振摇1010分钟，分钟，于于44放置放置2424小时，使聚乙二醇析出完全，小时，使聚乙二醇析出完全，滤过，取滤液作为供试品溶液滤过，取滤液作为供试品溶液 注意：各剂型样品的预处理注意：各剂型样品的预处理注射剂：直接取样注射剂：直接取样合剂、口服液：直接取样或经过分离净化合剂、口服液：直接取样或经过分离净化液体制剂：摇匀后再取样液体制剂：摇匀后再取样西洋参精口服液中人参总皂甙的含量测定西洋参精口服液中人参总皂甙的含量测定精密移取待测样品精密移取待测样品10ml，加入到处理好的大孔，加入到处理好的大孔树脂柱上，加蒸馏水树脂柱上，加蒸馏水80ml洗柱，洗液弃去，再洗柱，洗液弃去，再用用70%乙
13、醇乙醇100ml洗柱，收集洗脱液，洗柱，收集洗脱液， 酒剂、酊剂：加热蒸去乙醇，然后再用酒剂、酊剂：加热蒸去乙醇，然后再用有机溶剂萃取或柱层析有机溶剂萃取或柱层析注意：各剂型样品的预处理注意：各剂型样品的预处理HPLC 475GC35UV-vis41TLCS49化学法化学法51其它其它413 3 常用定量分析方法常用定量分析方法化学分析法化学分析法挥发法挥发法：如水分测定、灰分测定：如水分测定、灰分测定萃取法萃取法：昆明山海棠片：昆明山海棠片 药典药典P492P492 乙醇回流乙醇回流蒸干蒸干盐酸溶解盐酸溶解氨氨 乙醚萃取乙醚萃取沉淀法沉淀法：西瓜霜的含量测定：西瓜霜的含量测定适用于：含量较高
14、的成分适用于：含量较高的成分重量分析重量分析化学分析法化学分析法 酸碱滴定酸碱滴定：生物碱、有机酸：生物碱、有机酸 沉淀滴定沉淀滴定：含：含Cl-的制剂的制剂 络合滴定络合滴定：朱砂：朱砂硫氰酸铵硫氰酸铵 石膏、白矾石膏、白矾EDTA 氧化还原氧化还原：雄黄：雄黄I2 磁石、赭石磁石、赭石重铬酸钾重铬酸钾滴定分析滴定分析紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法（一）基本原理：（一）基本原理：A = E c l仪器：紫外仪器：紫外-可见分光光度计可见分光光度计光光源源单单色色器器比比色色皿皿检检 测测 器器（二）用途：（二）用途：总成分的测定总成分的测定（三）定量方法：（三）定量方法： 吸收系数吸收
15、系数法法 标准曲线标准曲线法法 对照品比较法对照品比较法紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法取本品粉末取本品粉末，精密称定，精密称定，加盐酸加盐酸-甲甲醇（醇（1:100） ，回流，回流置氧化铝柱置氧化铝柱用乙醇洗脱，收集洗脱液，用乙醇洗脱，收集洗脱液，。在在345nm的波长测定吸光度，按盐的波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）的吸收系数（的吸收系数（ ）为）为728计算计算 注意：对仪器进行注意：对仪器进行波长校正波长校正计算公式：计算公式：吸收系数法吸收系数法吸收系数法吸收系数法A= 0.358 w = 0.9926g H2O% = 8.0%标准曲线法标准曲
16、线法1 2 3 4 5cA回归求方程回归求方程 A = k c + m注意：注意： 供试品浓度应在供试品浓度应在线性范围线性范围内内cx Ax相关系数相关系数r 0.999排石颗粒中总黄酮的含量测定排石颗粒中总黄酮的含量测定对照品溶液的制备对照品溶液的制备 每每1ml含无水芦丁含无水芦丁0.2mg测定测定 取本品取本品照标准曲线照标准曲线依法测定依法测定标准曲线的制备标准曲线的制备 精量对照品溶液精量对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置，分别置10ml量瓶中，量瓶中，加加5%亚硝酸钠亚硝酸钠硝酸铝硝酸铝氢氧化钠氢氧化钠再加再加50%甲醇至刻度，摇匀。在甲醇至刻度，摇匀。在5
17、10nm下测定下测定A，以，以A为纵坐标，为纵坐标，c为横坐标，绘制标准曲线为横坐标，绘制标准曲线标准曲线法标准曲线法1、某同学欲用吸收系数法测定三某同学欲用吸收系数法测定三黄片中总生物碱，请设计一个合黄片中总生物碱，请设计一个合理的供试品溶液制备的实验方案理的供试品溶液制备的实验方案2、某同学欲用分光光度法测定冠某同学欲用分光光度法测定冠心丹参片中总皂苷，为除去杂质心丹参片中总皂苷，为除去杂质干扰，请设计一个有效的供试品干扰，请设计一个有效的供试品溶液制备的方法溶液制备的方法（一）基本原理（一）基本原理A = k w仪器：薄层扫描仪仪器：薄层扫描仪薄层扫描法（薄层扫描法（TLCS）（二）实验
18、条件（二）实验条件例：熊果酸例：熊果酸薄层扫描法薄层扫描法 吸收扫描法吸收扫描法 光源：氘灯、光源：氘灯、 钨灯钨灯 扫描方式：锯齿式扫描方式：锯齿式 测光方式：透射、反射测光方式：透射、反射 设定设定散射系数散射系数SX 双波长扫描法双波长扫描法RSA例：小檗碱例：小檗碱特点：灵敏度高特点：灵敏度高荧光扫描法荧光扫描法薄层扫描法薄层扫描法光源：汞灯光源：汞灯直线式扫描直线式扫描无需曲线校直无需曲线校直（三）定量方法（三）定量方法Aww1wxw2A1A2Ax 点样量在线性范围内点样量在线性范围内 交叉点样：每一样品交叉点样：每一样品2 2个点样点个点样点 市售预制板市售预制板外标二点法外标二点
19、法例：例：P80薄层扫描法薄层扫描法气相色谱法（气相色谱法（GC）载载载载气气气气色色色色谱谱谱谱柱柱柱柱进进进进样样样样检检检检测测测测器器器器（一）基本原理（一）基本原理（二）实验条件（二）实验条件 固定相：硅氧烷类固定液固定相：硅氧烷类固定液 色谱柱：弹性交联石英毛细管柱色谱柱：弹性交联石英毛细管柱 检测器：检测器：FID 进样量：进样量：12l，分流进样，分流比，分流进样，分流比 特点：适用于挥发性及易气化的成分特点：适用于挥发性及易气化的成分 不同成分灵敏度不同不同成分灵敏度不同 进样量重复性差进样量重复性差 气相色谱法气相色谱法（三）定量方法：（三）定量方法：内标法内标法选择某纯物
20、质作为内标物，准确称量，加入选择某纯物质作为内标物，准确称量，加入待测液中，比较待测组分与内标物的峰面积待测液中，比较待测组分与内标物的峰面积相对校正因子：相对校正因子：Sx气相色谱法气相色谱法例例1 马应龙麝香痔疮膏中龙脑含量测定（马应龙麝香痔疮膏中龙脑含量测定（P84） 【校正因子测定校正因子测定】 内标：水杨酸甲酯内标：水杨酸甲酯3.0mg/ml 对照品：龙脑对照品：龙脑2.0mg/ml 吸取吸取1l，注入气相色谱仪，计算校正因子，注入气相色谱仪，计算校正因子【测定法测定法】取本品约取本品约1g，精密加入，精密加入 内标溶内标溶液液10ml，超声，超声滤过，吸取续滤过，吸取续 滤液滤液1
21、l，注入气相色谱仪，注入气相色谱仪。气相色谱法气相色谱法iSR【对照品溶液对照品溶液】 iS：3.0mg/ml As = 882 R：2.0mg/ml AR =600气相色谱法气相色谱法iSx特点：定量准确度与进样量无关特点：定量准确度与进样量无关【供试品溶液供试品溶液】 m：1.050g iS：3.0mg/ml As = 980 Ax =700气相色谱法气相色谱法系统适用性试验系统适用性试验P81 理论塔板数：理论塔板数：n 分离度：分离度：R1.5 拖尾因子：拖尾因子：0.95T1.05 重复性：重复性：n5，RSD2.0%气相色谱法气相色谱法（一）实验条件（一）实验条件 色谱柱：色谱柱：
22、ODS（5m，4.6mm250mm） 流动相：流动相：色谱纯，脱气，水相过色谱纯，脱气，水相过0.45m膜膜 检测器：检测器：UVD，ELSD高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC）（二）方法分类（二）方法分类1、反相键合相色谱、反相键合相色谱固定相：固定相：C18、C8流动相：流动相：甲醇甲醇-水、乙腈水、乙腈-水水洗脱顺序：洗脱顺序：极性大极性大小小对象：对象：低极性成分低极性成分例：药典例：药典P126 辛夷辛夷 木兰脂素木兰脂素固定相：固定相：C8 流动相：乙腈流动相：乙腈-四氢呋喃四氢呋喃-水水高效液相色谱法高效液相色谱法离子抑制色谱法离子抑制色谱法3.0 pKa7.0：醋酸、磷酸、磷酸盐：醋酸、磷酸、磷酸盐6.0 pKb 7.0：氨水、乙二胺、磷酸盐：氨水、乙二胺、磷酸盐例例1：P90反相键合相色谱反相键合相色谱离子对色谱法离子对色谱法pKa3.0：季铵盐，如（：季铵盐，如（C4H9）4N+Br-pKb0.999小小 结结
