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1、LOGOContents 小组成员组长：莫达康组长：莫达康 组员：温影珍组员：温影珍 陈宏伟陈宏伟 袁浩彬袁浩彬 黄伟华黄伟华指导老师：鲍波指导老师：鲍波 许碧莲许碧莲LOGOContents 研究目的添加食品防腐剂添加食品防腐剂益于益于人体健康人体健康，有一定的营有一定的营养养价值价值，消费者认可度高消费者认可度高天然防腐剂天然防腐剂化学防腐剂化学防腐剂 民以食为天，食以安为先。近年来食品安全问题一次又一次的进入公民以食为天，食以安为先。近年来食品安全问题一次又一次的进入公众的视野，其中食品安全又以食品腐败问题尤为严重，全世界农副产品、众的视野，其中食品安全又以食品腐败问题尤为严重，全世界农
2、副产品、果蔬等食品因腐烂变质而引起的经济损失十分巨大果蔬等食品因腐烂变质而引起的经济损失十分巨大。所以延长保存期限、所以延长保存期限、 防止食品腐败变质是食品工业的重要任务。防止食品腐败变质是食品工业的重要任务。传统方法如干制、传统方法如干制、盐腌、加热、罐藏盐腌、加热、罐藏冷冻干燥、气调贮藏冷冻干燥、气调贮藏辐射保藏、微波杀菌辐射保藏、微波杀菌工艺程序复杂工艺程序复杂耗能大、投资成本高耗能大、投资成本高价格低廉，但若超过安全剂量价格低廉，但若超过安全剂量存在致癌性、存在致癌性、致畸性致畸性、易引起食物中毒等问题易引起食物中毒等问题LOGOContents 研究目的及现状 市面上使用的防腐剂大
3、多是化学防腐剂，对人市面上使用的防腐剂大多是化学防腐剂，对人体有不同程度的危害。因此，天然防腐剂的研发拥体有不同程度的危害。因此，天然防腐剂的研发拥有巨大的前景。其中有巨大的前景。其中中药防腐剂中药防腐剂益于健康，性质稳益于健康，性质稳定，可作为天然防腐剂的首选。定，可作为天然防腐剂的首选。 但是目前对中药防腐剂的基础研究缺乏，对中但是目前对中药防腐剂的基础研究缺乏，对中药防腐剂的开发缺乏系统的理论指导，研究成效并药防腐剂的开发缺乏系统的理论指导，研究成效并不显著。不显著。 此番研究的目的就是此番研究的目的就是在广谱、高效、低毒的在广谱、高效、低毒的抗菌中草药中，找出抗致病菌功效显著的中抗菌中
4、草药中，找出抗致病菌功效显著的中药，为制成有效的重要防腐剂提供理论基础。药，为制成有效的重要防腐剂提供理论基础。LOGOContents 研究内容v1.1.比较八种中药提取物体外抗三种食物腐比较八种中药提取物体外抗三种食物腐败菌的能力，选择抗菌效果最好的一种中败菌的能力，选择抗菌效果最好的一种中药进行下一步研究。药进行下一步研究。v2.2.研究研究1 1中所选中所选中药提取物中药提取物在在不同浓度不同浓度下下的的抑菌效果及该中药的抑菌效果及该中药的MICMIC。LOGOContents 实验选材中草中草药的的选取取八种具有广广谱、高效、低毒、高效、低毒的抗菌中药：五倍子、白花蛇舌草、金银花、肉
5、桂、黄连、罗汉果、栀子、鱼腥草 细菌的菌的选取取中国食品微生物限量中国食品微生物限量规定定不得含有的致病致腐菌致病致腐菌：沙门氏菌、志贺菌、金色葡萄球菌LOGOContents 实验步骤1中中药药液的提取（水提煎煮法）液的提取（水提煎煮法） 各取50g进行粗粉碎后, 通过球磨机再进行球磨, 过筛得到各中草药的细粉碎样品。取粉碎后中药各50g，分别加水500ml，将中药浸泡在水中，加热至沸腾，改用文火加热20分钟，将滤液滤出，在将滤渣加水至200ml，二次煎煮，后将两次煎煮所得滤液加在一起，水浴浓缩至100ml，高压灭菌后放凉至室温，备用。所得中药水煎煮液浓度为0.5g/ml。LOGOConte
6、nts 实验步骤二、菌种的活化二、菌种的活化 将保存在低温下的菌种取出,置于摇床中, 在各菌种适宜条件下进行活化,后将活化菌置于冰箱中冷藏保存备用。LOGOContents 实验步骤三、三、药敏敏试验 用无菌棉拭子取菌液涂布在以打孔的90MM直径的MH药敏平板上，每平板打4个孔，待干后，分别加入中药水煎液50UL。在培养箱中37摄氏度培养24小时后，用游标卡尺量取抑菌环直径。利用琼脂扩散法,分别取浓度为 106cf u /mL 的菌液各 0.2mL , 分别加入 LB 琼脂培养基中 ,凝固后用无菌打孔器在琼脂培养基上打孔。 将各中药提取物加入孔中每组分别做三个平行实验; 另外做两组对照实验,在
7、一个平皿中加入蒸馏水作CK;在另一个平皿中加入浓度为3.4mg/ml苯甲酸钠作CK- 。然后再将平皿置于37恒温箱中培养, 24h后取出观察。用卡尺十字交叉法测量抑菌圈直径,计算抑制生长率。 抑制生长率= 处理净生长量/CK- 净生长量100%LOGOContents 实验步骤中草药水提物显著性P0.05 P0.01抑菌圈直径（cm）五倍子白花蛇舌草金银花肉桂黄连栀子鱼腥草罗汉果苯甲酸钠蒸馏水沙门氏菌 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌八种中草药水提物抗菌谱（抑菌环）八种中草药水提物抗菌谱（抑菌环）LOGOContents 实验步骤四、不同四、不同浓度的中草度的中草药提取物抑菌效果提取物抑菌效果 选取各
8、细菌抑菌生长率最高的一种中药水提物,分别设置提取物浓度分别为：重复上一步做药敏实验。0.5g/ml,0.25g/ml,0.125g/ml,0.0625g/ml,0.0313g/mlLOGOContents 实验步骤不同浓度中草药对不同浓度中草药对目标细菌目标细菌的抑菌生长率的抑菌生长率0.5 0.25 0.125 0.0625 0.0313中药中药目标目标细菌细菌抑菌环直径抑菌环直径抑菌生长率抑菌生长率金黄色金黄色葡萄球葡萄球菌菌浓度（浓度（g/ml）志贺氏菌志贺氏菌沙门沙门氏菌氏菌抑菌环直径抑菌环直径抑菌生长率抑菌生长率抑菌环直径抑菌环直径抑菌生长率抑菌生长率CBALOGOContents
9、实验步骤五、五、MIC的的测定定 选取效果平均抑菌生长率最好的一种中药水提物，测定对三种致病菌的最小抑菌浓度，并与常用化学防腐剂苯甲酸钠的最小抑菌浓度作对比。采用试管管2倍稀倍稀释法法测定最小抑菌浓度(M IC) 。 实验中每种药均用肉汤培养基2倍系列稀释10个梯度,第11支试管作阳性对照,第12管作阴性对照,各管稀释后的最终体积为10mL。每管加接种菌液100L,置37培养1824h,观察是否有菌生长,每种药物做3组重复。LOGOContents 实验步骤沙门氏菌志贺氏菌金黄色葡萄球菌中草药水提物0.5 0.25 0.125 0.0625 0.0313浓度(g/ml)目标细菌MICA中药C中药B中药中草药对目标细菌的最小抑菌浓度（中草药对目标细菌的最小抑菌浓度（MIC）LOGOContents 研究支持条件v8 8种中药、种中药、3 3种菌种种菌种v培养基（细菌培养基）培养基（细菌培养基）v培养皿、棉签、烧瓶、容量瓶、冰箱、培养箱、培养皿、棉签、烧瓶、容量瓶、冰箱、培养箱、微量加样器、微量加样器、MHMH药敏平板、摇床、试管药敏平板、摇床、试管
