保健食品安全性毒理学评价091101课件

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1、保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价检验及评价仲 伟 鉴上海市疾病预防控制中心2009.11第1页，共99页。第一部分第一部分中国保健食品简介中国保健食品简介第2页，共99页。保健食品定义保健食品定义 保健食品（保健食品（Functional Food）系指具有调）系指具有调节人体生理功能、适宜特定人群食用、不以治节人体生理功能、适宜特定人群食用、不以治疗为目的的一类食品。疗为目的的一类食品。 第3页，共99页。特特 点点q 具有特定的保健功能；具有特定的保健功能；q 无毒副作用，食用安全；无毒副作用，食用安全；q 有别于食品和药品；有别于食品和药品；q 增强体质、预防疾病为主；

2、增强体质、预防疾病为主；q 适用于特定人群。适用于特定人群。第4页，共99页。特特 定定 功功 能能q 由国家管理部门指定由国家管理部门指定q 允许申报的功能目前有允许申报的功能目前有27种种q 27种以外的功能，生产企业在获得足够种以外的功能，生产企业在获得足够的技术资料后（包括评价方案，试验数据的技术资料后（包括评价方案，试验数据及结果）向有关管理部门提出受理申请，及结果）向有关管理部门提出受理申请，接受评审。接受评审。第5页，共99页。特特 定定 人人 群群q正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳母、青少年、中老年、特殊工种的工作母、青少年、中老年、特殊工种

3、的工作者以及常见病病人者以及常见病病人q对于营养保健有特殊的需要对于营养保健有特殊的需要 膳食结构的不同膳食结构的不同 营养素需求的不同营养素需求的不同第6页，共99页。保健食品的发展历程保健食品的发展历程第一代保健食品第一代保健食品：在保健食品的管理方法颁布以：在保健食品的管理方法颁布以前市场上已有的保健食品。前市场上已有的保健食品。第二代保健食品第二代保健食品：经动物和人体实验证实具有某种生理调：经动物和人体实验证实具有某种生理调节功能的食品。节功能的食品。第第三三代代保保健健食食品品：不不仅仅需需要要经经人人体体及及动动物物实实验验证证实实具具有有某某种种功功能能，而而且且需需要要研研究

4、究提提供供该该功功能因子、含量及其作用机理。能因子、含量及其作用机理。第7页，共99页。发发 展展 趋趋 势势q根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能q根据新的养生保健概念，开发新的保健功能根据新的养生保健概念，开发新的保健功能q根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分q根据中医药理论，开发中药类有效成分根据中医药理论，开发中药类有效成分q根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素第8页，共99页。保健食品开发中的注意点保健食品开发中的注意点q中草药中草药q新资源新资

5、源q野生动植物及其产品野生动植物及其产品q核酸类核酸类q真菌类真菌类q益生菌类益生菌类q酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以微生物发酵的微生物发酵的第9页，共99页。中草药类中草药类q 中草药作为原料应注意中草药作为原料应注意：1.不不能能采采用用有有明明显显毒毒副副作作用用的的中中药药材材、 获获国国家家药药政政管管理理部部门门批批准准的的中中成成药药、 受受国国家家中药保护的中药成方中药保护的中药成方2.用量应控制在临床用量的用量应控制在临床用量的50%以下以下第10页，共99页。新资源类新资源类q 新资源作为原料时必须具备的有关资料新资源作

6、为原料时必须具备的有关资料：1.名称及国内外研究利用情况；名称及国内外研究利用情况；2.名称、配方及生产工艺；名称、配方及生产工艺；3.产产品品成成分分（包包括括营营养养物物质质、有有生生物物效效应应物物质质及及有有毒毒有有害害物物质质等）的分析报告；等）的分析报告；4.安全性毒理学评价报告或有关文献资料；安全性毒理学评价报告或有关文献资料；5.个别地区有食用习惯的应提供有关食用历史的证明资料；个别地区有食用习惯的应提供有关食用历史的证明资料；6.质量标准。质量标准。第11页，共99页。野生动植物及其产品类野生动植物及其产品类q 以野生动植物及其产品为原料的有关限制以野生动植物及其产品为原料的

7、有关限制：1.受保护的野生动物。受保护的野生动物。2.禁禁止止使使用用自自然然的的、人人工工驯驯养养繁繁殖殖或或人人工工栽栽培培的的国国家家一一级级和自然的二级保护野生动植物及其产品。和自然的二级保护野生动植物及其产品。3.人人工工驯驯养养繁繁殖殖或或人人工工栽栽培培的的国国家家二二级级保保护护野野生生动动植植物物及及其其产产品品，国国家家保保护护的的有有益益的的或或者者有有重重要要经经济济、科科学学研研究究价价值值的的陆陆生生野野生生动动物物及及其其产产品品应应提提供供省省级级以以上上农农业业（渔渔业业）、林业行政主管部门的批准文件。林业行政主管部门的批准文件。第12页，共99页。q以野生动

8、植物及其产品为原料的有关限制以野生动植物及其产品为原料的有关限制：4.4.中中华华人人民民共共和和国国林林业业植植物物新新品品种种保保护护名名录录中中植植物物及及其其产产品品，如如果果该该种种植植物物已已获获“品品种种权权”，应应提提供供该该种种植植物物品品种种权权所所有有人人许许可可使使用用的的证证明明；如如该该种种植植物物尚尚未未取取得得品品种种权权，应应提提供供国国务务院院林林业业主主管管部部门门出出具具的的该该种种品品种尚未取得品种权的证明。种尚未取得品种权的证明。5.5.进进口口保保健健食食品品中中使使用用濒濒危危野野生生动动植植物物种种国国际际贸贸易易公公约约名名录录中中动动植植物

9、物及及其其产产品品的的，应应提提供供国国务务院院农农业业（渔渔业业）、林林业业行行政政主主管管部部门门批批准准文文件件、进进出出口口许许可可证及海关的证明文件。证及海关的证明文件。野生动植物及其产品类野生动植物及其产品类第13页，共99页。核酸类核酸类q核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料：1.具体成份名称、来源、含量；具体成份名称、来源、含量；2.与所申报功能直接相关的科学文献依据；与所申报功能直接相关的科学文献依据；3.企企业业标标准准中中标标出出核核酸酸各各成成份份的的含含量量、纯纯度度和和相相应应的的定定性性、定量检测方法以及质量标准；定量检测方法以

10、及质量标准；4.详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；5.核酸原料纯度的检测报告。核酸原料纯度的检测报告。第14页，共99页。核酸类核酸类q核酸类保健食品申报时的注意事项核酸类保健食品申报时的注意事项：1.1.不得以单一的不得以单一的DNADNA或或RNARNA作为原料申报。作为原料申报。2.2.单一原料纯度应大于单一原料纯度应大于8080。3.3.功功能能申申报报范范围围暂暂限限定定为为免免疫疫调调节节功功能能。如如申申报报其其他他功功能能，需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报。需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报。4.4.核酸成份的

11、每日推荐食用量为核酸成份的每日推荐食用量为0.6g-1.2g0.6g-1.2g。5.5.不得以不得以“核酸核酸”命名。命名。6.6.说说明明书书及及标标签签中中的的“不不适适宜宜人人群群”除除按按保保健健食食品品相相关关规规定标注外，应明确标注出定标注外，应明确标注出“痛风患者痛风患者”。第15页，共99页。真菌类真菌类q真菌类保健食品的部分规定真菌类保健食品的部分规定 ：1.生产企业应建立有关的档案资料。生产企业应建立有关的档案资料。2.生产企业应具备相应的生产条件。生产企业应具备相应的生产条件。3.对生产菌种及工艺变更的相应规定。对生产菌种及工艺变更的相应规定。4.冠名规定。冠名规定。5.

12、发发酵酵过过程程中中，除除培培养养基基外外，不不得得加加入入具具有有功功效效成成分分的的动动植植物物及其它物质。及其它物质。6.不能使用经过基因修饰的菌种。不能使用经过基因修饰的菌种。第16页，共99页。益生菌类益生菌类q益生菌类保健食品的部分规定益生菌类保健食品的部分规定：1.生产用菌种应满足一定的条件。生产用菌种应满足一定的条件。2.生产企业应具备的一定条件。生产企业应具备的一定条件。3.菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报。菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报。4.不提倡以液态形式生产活菌产品。不提倡以液态形式生产活菌产品。5.在保存期内活菌数目不得少于在保存期内活菌数目

13、不得少于 106cfu/mL(g) 。第17页，共99页。益生菌类益生菌类q益生菌类保健食品的部分规定益生菌类保健食品的部分规定：6.如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示7.所所用用菌菌种种在在其其发发酵酵过过程程中中，除除培培养养基基外外，不不得得加加入入具具有功效成分的动植物及其物质有功效成分的动植物及其物质8.不能使用经过基因修饰的菌种不能使用经过基因修饰的菌种第18页，共99页。其他类别其他类别q对对酶酶制制剂剂、氨氨基基酸酸螯螯合合物物、金金属属硫硫蛋蛋白白以以及及直直接接以微生物发酵为原料限制的部分规定以微生物发酵为原料限制的部分

14、规定：1.未未列列入入食食品品添添加加剂剂使使用用卫卫生生标标准准或或卫卫生生部部公公告告名名单单中中的的食食品品添添加加剂剂新新品品种种的的酶酶制制剂剂不不得得用用于于保保健健食食品品的生产。的生产。2.不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品。不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品。第19页，共99页。其他类别其他类别q使使用用微微生生物物发发酵酵直直接接生生产产保保健健食食品品的的，需需提提供供的的特特殊资料殊资料：1.菌种来源及菌种检定报告菌种来源及菌种检定报告2.菌种的毒力试验报告及安全性评价报告菌种的毒力试验报告及安全性评价报告 3.国内外该菌种使用于食品生产的文献资料国内外该菌

15、种使用于食品生产的文献资料 4.发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量）发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量） 第20页，共99页。其他类别其他类别q使使用用氨氨基基酸酸螯螯合合物物生生产产保保健健食食品品的的，需需提提供供的的特殊资料特殊资料：1.提提供供明明确确的的化化学学结结构构式式、理理化化性性质质，配配体体与与金金属属离离子子之之比、游离元素和总元素之比。比、游离元素和总元素之比。 2.提供定性、定量的检测方法及验证报告。提供定性、定量的检测方法及验证报告。3.急急性性毒毒性性试试验验加加做做停停食食16小小时时后后空空腹腹一一次次灌灌胃胃试试验验和和30天喂养试验

16、的组织病理报告。天喂养试验的组织病理报告。4.国内外使用于食品生产的文献资料。国内外使用于食品生产的文献资料。第21页，共99页。安全，无毒、副作用安全，无毒、副作用功能，保健功效功能，保健功效理化、微生物特性：理化、微生物特性： 有害成分物质和污染物有害成分物质和污染物毒理学特性：毒理学特性： 剂量反应（效应）关系剂量反应（效应）关系保健食品质量控制保健食品质量控制生物活性物质生物活性物质功效成分功效成分通过检通过检验和评验和评价，加价，加以控制以控制第22页，共99页。第二部分第二部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价检验及评价第23页，共99页。主主 要要 内内 容容q

17、检验评价依据检验评价依据q 审评基本要求审评基本要求q 选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则q 实验动物的选择实验动物的选择q 样品的预处理原则样品的预处理原则q 毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q毒理学安全性评价时应考虑的问题毒理学安全性评价时应考虑的问题q审评结论的判定审评结论的判定第24页，共99页。毒性及功能检验评价依据毒性及功能检验评价依据2019年年3月卫生部保健食品的管理方法月卫生部保健食品的管理方法 保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法2019年年7月月GB15193食品安全性毒理学评价程序和方

18、法食品安全性毒理学评价程序和方法 卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法 仅包含了仅包含了12项功能检验及评价方法项功能检验及评价方法2019年年7月月 卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法 可受理和评价的功能调整到可受理和评价的功能调整到31项项2019年年2月卫生部保健食品检验与评价技术规范月卫生部保健食品检验与评价技术规范 将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一第25页，共99页。审评的基本要求审评的基本要求1. 配方配方 原（辅）料、用

19、量、理化性质原（辅）料、用量、理化性质2. 剂量剂量 食用方法及用量食用方法及用量3. 工艺工艺 规格化产品规格化产品 符合配方、工艺、质量标准符合配方、工艺、质量标准4. 批号批号 注意批号是否一致注意批号是否一致,益生菌、奶制品等保质期短的除外益生菌、奶制品等保质期短的除外第26页，共99页。1. 毒理学评价的四个阶段毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验第一阶段：急性毒性试验 经口急性毒性试验：经口急性毒性试验：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验天喂养试验，传统致畸试

20、验 遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合Ames或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验第三阶段：亚慢性毒性试验 90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第27页，共99页。2.一般无需进行毒性试验的原料或成分一般无需进行毒性试验的原料或成分属于普通食品和卫生部规定的药食同源

21、的物质：属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：q采用传统的工艺及食用方式采用传统的工艺及食用方式q水提取物，常规服用量，无不安全性报道水提取物，常规服用量，无不安全性报道q来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂 或或营养素补充剂营养素补充剂选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第28页，共99页。3. 需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分 属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：它常用工艺生产的：（

22、1）服用量与常规用量相同）服用量与常规用量相同 急性毒性、三项致突变试验急性毒性、三项致突变试验（2）服用量大于常规用量）服用量大于常规用量 还需加做还需加做30天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验第三阶段毒性试验选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第29页，共99页。4.需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分q文献显示无危害，人群长期食用；文献显示无危害，人群长期食用；q具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产 品质品质量规格与国外产品一致；量规格

23、与国外产品一致；q国外广泛食用且能提供安全性评价资料；国外广泛食用且能提供安全性评价资料；q卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第30页，共99页。5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：需进行一至三阶段毒性试验的情况：q一、二阶段试验结果与国外产品不一致的一、二阶段试验结果与国外产品不一致的q国外少数国家或地区食用的原料或成分国外少数国家或地区食用的原料或成分q水提取物，大于常规服用量水提取物，大于常规服用量q用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规

24、用量选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第31页，共99页。6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分国内外均无食用先例国内外均无食用先例7.敏感指标及敏感试验的保健食品敏感指标及敏感试验的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第32页，共99页。8.保健食品新原料保健食品新原料 保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公布品药品监督管理局公布的可用于保健食品、

25、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料。健食品的原料。 国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第33页，共99页。 在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：未列入国家食品

26、药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；名单；尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；单内；卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。位不一致。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第34页，共99页。新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 无食用史无食用史 需

27、做四阶段试验需做四阶段试验 局部地区有食用史局部地区有食用史 需做三阶段试验需做三阶段试验 其中其中 ，100100倍倍 摄入量摄入量300300倍倍 需做第四阶段试验需做第四阶段试验 有食用史有食用史 需做二阶段试验需做二阶段试验 经评价后经评价后 下一阶段试验下一阶段试验 广泛食用的原料广泛食用的原料 二阶段试验二阶段试验 （食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）（食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第35页，共99页。新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 已知化学物已知化学物: : -1 -

28、1 可只做二阶段实验的包括可只做二阶段实验的包括 已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价 有资料证明所用原料与其一致有资料证明所用原料与其一致 -2 -2 如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验阶段的试验 有新原料的保健食品有新原料的保健食品: : 根据试验结果综合分析。根据试验结果综合分析。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则第36页，共99页。对受试保健食品的要求对受试保健食品的要求q 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质单一已知化学成分，应提供物理和化学性质q 多种原料的配

29、方产品，应提供配方多种原料的配方产品，应提供配方q 配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的 q 物理和化学性质及其检测报告物理和化学性质及其检测报告q 提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使q 用说明书等有关资料用说明书等有关资料q 受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品第37页，共99页。实验动物的选择及给样量实验动物的选择及给样量1.1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近

30、交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.2.动物应符合实验动物管理条例动物应符合实验动物管理条例 清洁级或清洁级以上清洁级或清洁级以上 动物合格证号及动物实验室合格证号动物合格证号及动物实验室合格证号3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kgBW10 ml/kgBW（若以水为溶剂，推荐（若以水为溶剂，推荐 20 ml/kgBW 20 ml/kgBW） 小鼠：小鼠：20ml/kgBW20ml/kgBW第38页，共99页。样品的预处理原则样品的预处理原则1.1.介质的选择介质的选择 应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不应选择适合于受试动物的溶剂、乳化

31、剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。发生反应、稳定性好。 常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.2.液体类液体类 受试物浓缩倍数应符合试验要求。受试物浓缩倍数应符合试验要求。 浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有60607070减压或常压蒸减压或常压蒸发、冷冻干燥。发、冷冻干燥。 按工艺要求。按工艺要求。第39页，共99页。样品的预处理原则样品的预处理原则3.3.袋泡茶类袋泡茶类 处理方法与产品推荐饮用方法相同处理方法与产品推荐饮用方法相同 推荐用：推荐

32、用：80-90 80-90 常压用水浸泡常压用水浸泡30min30min 水量为受试物的水量为受试物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并浓缩至次提取液合并浓缩至所需浓度所需浓度 标明该浓缩液与受试物的比例标明该浓缩液与受试物的比例第40页，共99页。样品的预处理原则样品的预处理原则4.含乙醇类含乙醇类（1）不需浓缩的受试物）不需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度15 乙醇浓度应调至乙醇浓度应调至15（2）需浓缩的受试物）需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度15 浓缩后调至浓缩后调至15乙醇浓度乙醇浓度 在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基第41页，共9

33、9页。样品的预处理原则样品的预处理原则5.膨胀系数较高的受试物膨胀系数较高的受试物 选择可溶性介质选择可溶性介质 给受试物的方法：灌胃给受试物的方法：灌胃 其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100倍，按倍，按实际达到的倍数实际达到的倍数 标明受试物的膨胀系数标明受试物的膨胀系数第42页，共99页。样品的预处理原则样品的预处理原则6.益生菌等微生物类保健食品益生菌等微生物类保健食品 在进行在进行 Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。 需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。

34、需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。7.以食品为载体的受试物以食品为载体的受试物 （1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。 （2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。 如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。第43页，共99页。毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 急性经口毒性试验急性经口毒性试验q 鼠伤寒沙门氏菌（鼠

35、伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验q 骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验q 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验q 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验q 小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验q 30天喂养试验天喂养试验第44页，共99页。急性经口毒性试验急性经口毒性试验目的：目的：测定测定LD50，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：原理：急性毒性：经口一次性、急性毒性：经口一次性、24h内多次给予，短时间内的毒

36、性反内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数致死剂量应。致死剂量通常用半数致死剂量LD50表示。表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。确定这三种不同的作用。第45页，共99页。急性经口毒性试验急性经口毒性试验时间周期时间周期：一般为：一般为3周周 3-5天，大、小鼠适应期天，大、小鼠适应期 7-14天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖发生动物死亡

37、时，应进行大体解剖观察和评价指标观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物大体尸检结果：如果发生死亡动物第46页，共99页。急性毒性（急性毒性（LD50）剂量分级表）剂量分级表级级 别别大鼠口服大鼠口服LD50， mg/kg相当于人的致死量相当于人的致死量mg/kgg/人人极毒极毒15000

38、5000002500第47页，共99页。急性经口毒性试验急性经口毒性试验试验结果的判定：试验结果的判定：1. LD501. LD50人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，放弃；反之继续下一步试验。倍，放弃；反之继续下一步试验。2. LD5010g/kgbw2. LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动物死或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验。亡的，可继续下一步试验。第48页，共99页。鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验目的：目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能

39、性。 时间周期：时间周期：一般为一般为2周周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养第二周，染毒，培养48h，读平板，菌落计数，读平板，菌落计数剂量设计：剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为低剂量为0.2ug/皿；最高剂量为皿；最高剂量为5mg/皿，或最大溶解剂量，最大饱和皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过5倍。同时设：倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照

40、组和未处理对照组。阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。第49页，共99页。鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验观察及评价指标：观察及评价指标： 各受试物组及三个对照组的四种菌株（各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97aTA97a，TA98TA98，TA100TA100和和TA102TA102）分别在加和不加）分别在加和不加S9S9情况下的菌落计数。情况下的菌落计数。结果评价（掺入法）：结果评价（掺入法）： 受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数22未处理未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试对照组

41、数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。验阳性。第50页，共99页。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验目的目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。物致突变的可能性。原理原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片 。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被

42、包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。胞质内，因比主核小，故称为微核。第51页，共99页。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验时间周期时间周期：一般为：一般为2 2周周 3-5 3-5天适应期天适应期 小鼠经口染毒，小鼠经口染毒，30h30h给受试物法给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计剂量设计：至少设置：至少设置3 3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和毒表现和/ /或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取性反应。一般取LD50

43、LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作为三个剂量。当受试作为三个剂量。当受试物的物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw时，最高剂量通常采用时，最高剂量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同时。同时设阳性对照组和溶剂对照组。设阳性对照组和溶剂对照组。第52页，共99页。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物计数每只动物计数1000个嗜多染红细胞个嗜多染红细胞 ，记录含有微核的细胞数，并计，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。 结果评

44、价结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。学意义，试验结果为阳性。第53页，共99页。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。以评价其致突变的可能性。原理原理：当受试物作用于细胞周期：当受试物作用于细胞周期G1期和期和S期时，可诱发染色体期时，可诱发染色体型畸变，而作用于型畸变，而作用于G2期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹期时则诱发染色

45、体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。微镜下便可观察染色体数目和形态。第54页，共99页。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为3周周 3-5天适应期天适应期 小鼠或大鼠经口染毒小鼠或大鼠经口染毒2-4次，每次间隔次，每次间隔24h，在末，在末次染毒次染毒18-24h进行取材（取材前进行取材（取材前2-4h，腹腔

46、注射秋水仙素）。，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验第55页，共99页。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100个中期相细胞个中期相细胞 ，每个剂量组不少于，每个剂量组不少于1000个。记录染色体数目及结构的改变。个。记录染色体数目及结构的改变。结果评价结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。系并有统计

47、学意义，试验结果为阳性。第56页，共99页。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验目的目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。胞的致突变作用。原理原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及

48、其蛋白产物的改变。态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。第57页，共99页。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验时间周期时间周期：一般为：一般为7周周 3-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5天，于首次给样后的天，于首次给样后的35天处死天处死动物动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验第58页，共99页。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物检查每只动物检查1000个精子个精子 ，记录精子畸形数目及类型。，记录精子畸形数目及类型。结果评价结果评价：

49、受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。并有统计学意义，试验结果为阳性。第59页，共99页。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验目的目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过过DN

50、A复制期，故在前细线期处理。第复制期，故在前细线期处理。第1214d采样，采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。应。第60页，共99页。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为7周周 3-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5天，与首次给样后的天，与首次给样后的12-14天处死动物取材，（取材前天处死动物取材，（取材前6h，腹腔注，腹腔注 射秋水仙素）。射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微

51、核试验：同骨髓细胞微核试验第61页，共99页。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100个中期相细胞个中期相细胞 ，记录染色体数目及结构，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。性染色体单价体等）。结果评价结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。试验结果为阳性。第

52、62页，共99页。遗传毒性试验组合遗传毒性试验组合试验结果的判定试验结果的判定：如三项致突变试验（如三项致突变试验（Ames试验，微核或骨髓细胞染色体试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。第63页，共99页。30天喂养试验天喂养试验目的目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒：急性毒性试验的基础

53、上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。原理原理： 以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续连续30天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。第6

54、4页，共99页。30天喂养试验天喂养试验时间周期时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为：在获得了急性毒性数据后，一般为2月月 3-5天，大鼠适应期天，大鼠适应期 30天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 再进行大体解剖、血液、生化、器官病再进行大体解剖、血液、生化、器官病 理检查。理检查。第65页，共99页。30天喂养试验天喂养试验剂量设计剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。用，

55、同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。 对于能获得对于能获得LD50的受试物的受试物：最高剂量为：最高剂量为1025的的LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的，最低剂量组至少为人可能摄入量的3倍。倍。 对于不能获得对于不能获得LD50的受试物的受试物：最高剂量为人可能摄入量的：最高剂量为人可能摄入量的100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。第66页，共99页。30天喂养试验天喂养试验观察及评价指标观察及评价指标：一般情况观察一般情况观察：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1次体重及次体重及2次食物

56、摄入量，计算食物利用率。次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检查病理检查：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。第67页，共99页。30天喂养试验天喂养试验试验结果的

57、判定试验结果的判定： 对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，综合其它试验结果可初倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。步做出安全性评价。 最小观察到有害作用剂量最小观察到有害作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，或倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例1010，放弃。放弃。 在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试

58、验。分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。第68页，共99页。其它试验结果判断其它试验结果判断q 传统致畸试验传统致畸试验： 需大于或等于人摄入量的需大于或等于人摄入量的100倍。在倍。在50倍至倍至100倍之间需进倍之间需进行安全性评价，小于行安全性评价，小于50倍需放弃。倍需放弃。q 90天喂养试验、繁殖试验天喂养试验、繁殖试验：1.仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的分，需大于或等于人摄入量的100倍。倍。2.国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或

59、等于人摄入量的入量的300倍。在倍。在100倍至倍至300倍之间需进行慢性毒性试验，倍之间需进行慢性毒性试验，小于小于100倍需放弃。倍需放弃。第69页，共99页。其它试验结果判断其它试验结果判断q 慢性毒性试验慢性毒性试验： 以以LD50或或30天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。见有毒性作用。q 致癌试验阳性判定依据致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组均发生肿瘤，但实

60、验组发生率高。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。试验阳性。第70页，共99页。安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性安全性评价的艺术性：1.动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；2.安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；3.安全性标准与社会

61、和公众利益之间的平衡性。安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。结论结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。际指导意义的依据。第71页，共99页。应综合考虑的问题应综合考虑的问题1.试验指标的统计学意义和生物学意义试验指标的统计学意义和生物学意义 在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其在分析试验组与对

62、照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则的原则,来综合考虑指标差异有无生物学意义。来综合考虑指标差异有无生物学意义。2.生理作用与毒性作用生理作用与毒性作用 对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。是生理学表现还是受试物的毒性作用。第72页，共99页。应综合考虑的问题应综合考虑的问题3.时间时间-毒性效应关系毒性效应关系 对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑对由受试物引起的毒性效应进行分析评价

63、时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。4.特殊人群和敏感人群特殊人群和敏感人群 对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。第73页，共99页。应综合考虑的问题应综合考虑的问题5.人的可能摄入量较大的保健食品人的可能摄入量较大的保健食品 应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试及其生物利用率，从而导致某些毒

64、理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致。物本身的毒性作用所致。6.含乙醇的保健食品含乙醇的保健食品 对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。第74页，共99页。应综合考虑的问题应综合考虑的问题7.动物年龄对试验结果的影响动物年龄对试验结果的影响 对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致。动物年龄选择不当所致。8.安全系数安全系数 鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全鉴于动物、

65、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为系数通常为100。第75页，共99页。应综合考虑的问题应综合考虑的问题9.人体资料人体资料 在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料。反应的资料。10.综合评价综合评价 在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保触的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因

66、素，确保其对人体健康的安全性。健功能等因素，确保其对人体健康的安全性。第76页，共99页。应综合考虑的问题应综合考虑的问题11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可 能因能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。新评价。12.若受试物掺入饲料的最大加入量（若受试物掺入饲料的最大加入量（10）或液体受试）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的

67、毒性试验结果进行安全性评价。结果进行安全性评价。第77页，共99页。审评结论的判定审评结论的判定1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明受试物的安全性。果能够证明受试物的安全性。2.属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：（1）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告。理学试验报告。（2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。（3）未提供某些试验数据，需要补充提供。）未提供某些试验数据

68、，需要补充提供。第78页，共99页。审评结论的判定审评结论的判定3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：（1）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安全性，需要做除品的安全性，需要做除30天天/90天喂养试验以外的毒理学天喂养试验以外的毒理学试验；试验；（2）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。需要重复试验。第79页，共99页。（1 1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定）毒理学评价的结果表明产品在推

69、荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在安全性问题。的毒性，存在安全性问题。（2 2）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有“可用于保健食品的原料可用于保健食品的原料”名单以外的原料，且未进行新名单以外的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。资源食品安全性毒理学评价。（3 3）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验。的毒理学试验。4.对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：第80页，共99页。（4）毒理、功能、兴奋剂与卫生

70、学、稳定性试验样品的）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致。批号不一致。（5）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。（6）30天天/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信。结果不可信。4.对产品的安全性不予认可的情况如下对产品的安全性不予认可的情况如下(二二)：第81页，共99页。第三部分第三部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学评价中存在的问题评价中存在的问题第82页，共99页。存在的问题存在的问题 鉴鉴于于制制订订此此程程序序的的历历史史背背景景与与目目前前情情况况有有所所不

71、不同同，因因此此，对对保保健健食食品品的的安安全全性性评评价价时时，出出现现了了选选择择毒毒理理试试验验的的项项目目、剂量、样品前处理等问题，现就上述问题一并提出供讨论。剂量、样品前处理等问题，现就上述问题一并提出供讨论。第83页，共99页。存在的问题存在的问题q 充分了解受试物充分了解受试物1.要要求求提提供供规规格格化化产产品品，至至少少是是中中试试产产品品。符符合合既既定定的的配方，生产工艺和质量标准。配方，生产工艺和质量标准。2.仔仔细细阅阅读读配配方方以以了了解解受受试试物物的的物物理理、化化学学性性质质（包包括化学结构、纯度、稳定性等）。括化学结构、纯度、稳定性等）。3.了解生产工

72、艺。了解生产工艺。4.按产品说明书的最大人体推荐量进行剂量设计。按产品说明书的最大人体推荐量进行剂量设计。第84页，共99页。存在的问题存在的问题q 动物年龄动物年龄 主主要要指指3030天天和和9090天天喂喂养养试试验验，“程程序序”中中规规定定用用离离乳乳大大鼠鼠，而而保保健健食食品品应应视视具具体体情情况况而而异异。最最典典型型的的是是人人参参、鹿鹿茸茸、减减肥肥产产品品，并并非非受受试试物物本本身身有有毒毒影影响响了了动动物物的的生生长长发发育育，而而是是因因为为这这类类产产品品的的服服用用对对象象是是成人，所用的动物是离乳大鼠。成人，所用的动物是离乳大鼠。第85页，共99页。存在的

73、问题存在的问题q实验项目的选择实验项目的选择1.1.配配方方中中含含有有仅仅限限局局部部地地区区人人群群食食用用而而又又不不在在“51“51号号”名名单单上上的的原原料料，只只对对产产品品进进行行了了两两阶阶段段毒毒理理试试验验，而而未未对对原原料料本本身身按按要要求求进进行行毒毒理理学学评评价价，有有的的进进行行了了评评价价但但给给予予动动物物受受试试物物的的方方式式与与实实际际食食用用方方式式不不一一样样，如如袋袋泡泡茶茶掺在饲料中给予动物。掺在饲料中给予动物。2.2.含含“51“51号号”文文附附录录二二名名单单上上原原料料的的产产品品只只做做了了LD50LD50和和三三项致空变试验。项

74、致空变试验。第86页，共99页。存在的问题存在的问题q实验项目的选择实验项目的选择3.药药食食同同源源产产品品经经有有机机溶溶剂剂提提取取未未做做毒毒理理试试验验，或或只做只做LD50和微核试验。和微核试验。4.从从食食品品中中提提取取某某一一成成分分的的粗粗提提物物只只做做了了LD50和和三三项项致突变试验，如大豆异黄酮。致突变试验，如大豆异黄酮。5.配配方方中中仅仅有有单单一一成成分分，如如人人参参、西西洋洋参参、蜂蜂王王浆浆不不必进行全部二阶段毒理试验。必进行全部二阶段毒理试验。第87页，共99页。存在的问题存在的问题q样品前处理样品前处理（一）液体类（一）液体类（二）酒类（二）酒类（三

75、）固体类（三）固体类（四）菌类（四）菌类（五五）以以某某些些食食品品为为载载体体的的保保健健食食品品：如如富富含含微微量量元素的鸡蛋、南瓜粉等元素的鸡蛋、南瓜粉等第88页，共99页。存在的问题存在的问题qLD50中存在的问题中存在的问题 1.经口经口LD50还用对照组。还用对照组。 2.不写禁食时间。不写禁食时间。 3.做到了做到了21.5g/KgBW,结论是结论是10g/KgBW。 4.将受试物掺入饲料吃将受试物掺入饲料吃24小时。小时。第89页，共99页。存在的问题存在的问题qAmes实验实验 1.以油为载体的产品直接倒入平皿以油为载体的产品直接倒入平皿 2.工工艺艺是是低低温温提提取取或

76、或低低温温冷冷冻冻干干燥燥的的产产品品用用8磅磅15分分钟钟高高压灭菌。压灭菌。 3.有溶剂对照而无自发回变对照。有溶剂对照而无自发回变对照。 4.菌菌落落回回变变数数随随剂剂量量的的增增加加而而增增多多已已超超过过正正常常值值而而不不是是二倍而出具了合格的报告二倍而出具了合格的报告第90页，共99页。存在的问题存在的问题qAmes实验实验 5.有有抑抑菌菌作作用用的的产产品品不不进进行行预预试试验验找找出出抑抑菌菌剂剂量量而而出出具具了了5mg/皿菌落回变数正常的报告。皿菌落回变数正常的报告。 6.产品中明显含有组氨酸，而不进行除组氨酸的前处理。产品中明显含有组氨酸，而不进行除组氨酸的前处理

77、。 7.应该用应该用XAD-2树脂对样品进行前处理树脂对样品进行前处理 8.没没有有理理解解5mg/皿皿含含义义：系系指指有有效效成成份份，如如某某些些产产品品含含有有80%的的糖糖，没没进进行行样样品品前前处处理理或或向向送送样样方方提提出出要要求求，直接用产品做直接用产品做5mg/皿，实际上是皿，实际上是1mg/皿。皿。第91页，共99页。存在的问题存在的问题q 微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验 1.微微核核试试验验：几几份份报报告告中中都都有有阳阳性性对对照照的的数数据据，而而这这几几份份原始记录中皆无阳性对照。原始记录中皆无阳性对照。 2.精精子

78、子畸畸形形试试验验：阳阳性性对对照照组组精精子子畸畸形形率率3.4%，即即判判断断阴阴性性对对照照组组与与阳阳性性对对照照组组相相比比差差异异有有显显著著性性P0.05。（正常畸形率为（正常畸形率为0.8-3.4%）。）。 3.睾丸染色体畸变试验：阳性对照持续应用一年以上。睾丸染色体畸变试验：阳性对照持续应用一年以上。第92页，共99页。存在的问题存在的问题q 30天或天或90天喂养实验天喂养实验1.雌性鼠的体重比雄性鼠还重或一样重雌性鼠的体重比雄性鼠还重或一样重 148.33 8.38172.28 10.93194.82 10.92215.46 14.68231.50 15.15189.83

79、 14.66239.52 17.56288.33 16.92324.14 19.80357.24 22.7267891014.03 2.0330.68 3.2247.61 5.3579.52 6.70118.53 7.1214.442.0730.62 4.5649.02 6.1986.86 8.98137.72 11.6912345雄（雄（n=30) 雌（雌（n=30)雄（雄（n=30) 雌（雌（n=30)体重体重(g)周龄周龄（周）（周）体重体重(g)周龄周龄（周）（周）第93页，共99页。存在的问题存在的问题q 30天或天或90天喂养实验天喂养实验2.食食物物利利用用率率雌雌雄雄分分不不开

80、开，或或为为将将雌雌、雄雄性性大大鼠鼠食食物物利利用用率率拉拉开差距，雌性和雄性大鼠的进食量基本一致。开差距，雌性和雄性大鼠的进食量基本一致。3.大鼠的进食量越来越高，雌性大鼠大鼠的进食量越来越高，雌性大鼠700多克、多克、 4.雄性大鼠雄性大鼠600多克，而体重与食物利用率和以前的差不多。多克，而体重与食物利用率和以前的差不多。5.剂剂量量设设计计：相相当当于于推推荐荐量量（以以g/Kg BW计计）的的6.56、26和和105倍倍，这这是先设计再做试验，还是先做试验再设计？是先设计再做试验，还是先做试验再设计？6.受试物掺入饲料的量高达受试物掺入饲料的量高达18%，袋泡茶掺入饲料给予动物。，

81、袋泡茶掺入饲料给予动物。 第94页，共99页。存在的问题存在的问题q 30天或天或90天喂养实验天喂养实验7.动动物物摄摄入入饲饲料料的的量量在在30天天喂喂养养试试验验以以体体重重的的10%计计，90天天喂喂养养试试验验以以体体重重的的8%计计，这这是是经经过过大大量量资资料料统统计计得得出出，但但将将受受试试物物以以10-20%的的浓浓度度饮饮水水给给予予动动物物，又又不不计计饮饮水水量量，与与报报告告的的剂剂量量设设计计是是否否基基本本一一致致？有的按每？有的按每100gBw给给10ml含有受试物的水，饮毕再给饮用水？含有受试物的水，饮毕再给饮用水？8.有的试验动物体重增长缓慢，解释是受

82、试物不好吃。有的试验动物体重增长缓慢，解释是受试物不好吃。9.生生 化化 指指 标标 ： 不不 做做 TG、 AST； TC高高 达达 2.8mmol/L；BUN12.9mmol/L。第95页，共99页。存在的问题存在的问题q 30天或天或90天喂养实验天喂养实验10.以以大大鼠鼠为为试试验验动动物物测测尿尿酸酸，大大鼠鼠的的代代谢谢与与人人不不完完全全一一样样，可可将将尿酸转化为尿囊素排出。尿酸转化为尿囊素排出。11.病病理理报报告告：心心肝肝脾脾无无毒毒性性损损伤伤，两两个个产产品品，两两份份报报告告来来自自同同一一检检测测单单位位；A4纸纸写写了了一一大大篇篇，详详细细描描述述了了病病理

83、理组组织织结结构构，没没有有一一点点异异常常，四四个个产产品品、四四份份报报告告来来源源同同一一检检验验单单位位；写写一一小小段段也也比比较较详详细细的的描描述述了了病病理理组组织织结结构构，亦亦无无任任何何异异常常三三个个产产品品、三三份份报报告告亦亦来来源源于于同同一一检检验单位。验单位。第96页，共99页。存在的问题存在的问题q 传统致畸试验传统致畸试验 其其剂剂量量设设计计比比30天天喂喂养养还还高高，程程序序已已明明确确以以亚亚急急性性试试验验的的最最大大无无作作用用剂剂量量为为高高剂剂量量，目目的的是是：找找强强致致畸畸物物，即即具具有有致致畸作用，但无母体毒性出现，这种受试物致畸

84、作用往往较强畸作用，但无母体毒性出现，这种受试物致畸作用往往较强第97页，共99页。存在的问题存在的问题q 其他典型问题其他典型问题 推推荐荐量量较较大大的的产产品品，同同一一检检测测单单位位，30天天喂喂养养试试验验进进行行了了样样品品前前处处理理达达到到足足够够倍倍数数，但但LD50、三三项项致致突突变变试试验验未未进进行行样样品品前前处处理理，相相当当于于人人推推荐荐量量的的倍倍数数很很低低；样样品品进进行行了了前前处处理理但但折折合合到到样样品品的的量量不不一一致致；样样品品进进行行了了前前处处理理，但但报报告告中中写写取取一一定定量量的的样样品品用用回回旋旋蒸蒸发发仪仪浓浓缩缩至至所所需需浓浓度度，剂剂量量设设计计写写的的是是25、50、100ml/KgBw；有有的的报报告告要要从从字字里里行行间间为为依依据据替替检检测测单单位位计计算算出出剂量设计是否正确；剂量设计是否正确；Ames试验的剂量以每皿试验的剂量以每皿%之多少计。之多少计。第98页，共99页。谢谢 谢谢第99页，共99页。