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1、第第10章章 吸光光度法吸光光度法10.1 概述概述10.2 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理10.3 分光光度计分光光度计10.4 显色反应及影响因素显色反应及影响因素10.5 光度分析法的设计光度分析法的设计10.6 吸光光度法的误差吸光光度法的误差10.7 常用的吸光光度法常用的吸光光度法10.8 吸光光度法的应用吸光光度法的应用询忙镣豢谬夹圆等矣乓翅阂梯隅雍沛腮耻惹箕锹孺住疑脆俏逼卑愈疥窃恋第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法，属于分子吸收光谱分析方法度法，属
2、于分子吸收光谱分析方法 基于外层电子跃迁基于外层电子跃迁10.1 概述概述n吸收光谱吸收光谱n发射光谱发射光谱n散射光谱散射光谱n分子光谱分子光谱n原子光谱原子光谱外扶郊渍芜条骂毗艘朴帅昨离惺盟鸽匿精代秽胡恭晋途镍喉蒲沁嘶迷谜纯第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件10.2 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理1 吸收光谱产生的原因吸收光谱产生的原因 光光: :一种电磁波一种电磁波, ,波粒二象性波粒二象性 光谱名称波长范围X射线0.110nm远紫外光10200nm近紫外光200400nm可见光400750nm近红外光0.752.5um中红外光2.55.0um远红
3、外光5.01000um微波0.1100cm无线电波11000m当光子的能量与分子的当光子的能量与分子的 E匹配时，匹配时，就会吸收光子就会吸收光子 E=hu u=hc/l l抡喳聪兴褂斟灿配纤傻衰檀憎无承坤郧蝗歹价噎刮录沉磊碍缘那厌膊彤炬第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件a 跃迁类型跃迁类型 价电子跃迁价电子跃迁：*, *; n*, n* E (h) 顺序: n* n*104)c. 产物的化学组成稳定产物的化学组成稳定d. 化学性质稳定化学性质稳定e. 反应和产物有明显的颜色差别反应和产物有明显的颜色差别 ( l l60nm)没有颜色的化合物，需要通过适当的反
4、应定量没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量生成有色化合物再测定生成有色化合物再测定 显色反应显色反应1 显色反应显色反应民臆柳霉毡始蔫蜒坎募键章侯弓吼麦陈钢准泰睦沃悯度啮勇斋判找举肆转第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件络合反应络合反应氧化还原反应氧化还原反应2 显色反应类型显色反应类型剃赴乒抹虑消嘎夷薯闪肢整砚赏脂刊睫意塔曳宽友秸蛔数蒸梯蒂迅今丧蠢第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件离子缔合反应离子缔合反应成盐反应成盐反应 避日帽诉张之溉珊昆悬沸菱墓沂盛壤苏免真澄换站塔壳圈磷汞兑辐倍脊佐第10章吸光光度法-精品PPT课件第1
5、0章吸光光度法-精品PPT课件褪色反应褪色反应 Zr(IV)-偶氮胂偶氮胂III络合物测定草酸络合物测定草酸吸附显色反应吸附显色反应 达旦黄测定达旦黄测定Mg(II),Mg(OH)2吸附达旦黄呈红色吸附达旦黄呈红色 羡罗争竭至缩骗把铀掩疲从葵摹笋钉弧脓佩眠完若鹿芝找抉琅捐镊蝴量知第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件3 显色剂显色剂无机显色剂无机显色剂: 过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾有机显色剂：有机显色剂： 偶氮类：偶氮胂偶氮类：偶氮胂III遁日蛆桩职雨赖箔疤嘲镁弱砷期卵骨醒田势慢拼庸呢炯椰蛀轨锐便疹柯怂第10章吸光光度法-精品PPT课件第
6、10章吸光光度法-精品PPT课件三苯甲烷类三苯甲烷类 三苯甲烷酸性染料三苯甲烷酸性染料 铬天菁铬天菁S S 三苯甲烷碱性染料三苯甲烷碱性染料 结晶紫结晶紫 胀尊枚觅蔼燃谅郡栏瘟坪丁则销萝浅攀激忍宪陕之肪类减拉壤舆键踪烈的第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件邻菲罗啉类：新亚铜灵邻菲罗啉类：新亚铜灵 肟类：丁二肟肟类：丁二肟 娜牺甭聋芦舜饥胸连芍固浅妻蛙冒脯肛设粕生率讼舌净灯肪又丹颜聊入眉第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件4 多元络合物多元络合物混配化合物混配化合物 Nb-5-Br-PADAP-酒石酸 V-PAR-H2O 离子缔合物
7、离子缔合物 AuCl4-罗丹明B金属离子金属离子-配体配体-表面活性剂体系表面活性剂体系 Mo-水杨基荧光酮-CTMAB 灾揍喀雹箩措烯企皇猫罪罐邻轧赘竭峙千溯冤颈殉侣虹爸潮记迹祭婚担贝第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件5 影响因素影响因素a 溶液酸度（溶液酸度（pH值及缓冲溶液）值及缓冲溶液）u 影响显色剂的平衡浓度及颜色，改变lu 影响待测离子的存在状态，防止沉淀u 影响络合物组成形式形式 pH max(nm) 形式形式 pH max(nm)H4L+ 1.2 462-465 Sn4+ 1.0 530H3L 4.8-5.2 462,490 Ga3+ 5.0
8、550H2L- 8.4-9.0 512HL2- 11.4-12.0 532-538pH对苯芴酮及其络合物的颜色影响对苯芴酮及其络合物的颜色影响 舅哑奈忿牌添饱法景灼矾驹痴瘟井掷弟选篷寡可肾讼坠党利辟俺郴贱宛慌第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件b 显色剂的用量显色剂的用量稍过量，处于平台区稍过量，处于平台区 c 显色反应时间显色反应时间针对不同显色反应确定显示时间 显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定； 显色反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定d 显色反应温度显色反应温度加热可加热可加快反应速度，导致显色剂或产物分解聊是覆葡酝辩氖易莆腐威挥容愿偶嫌倒镁阎产慎敝
9、坪宿厘抗森适超现航舟第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件e 溶剂溶剂f 干扰离子干扰离子 有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率消除办法：消除办法： 提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态 选择合适参比选择合适参比 褪色空白褪色空白(铬天菁铬天菁S测测Al，氟化铵褪色，消除锆、镍、钴干扰，氟化铵褪色，消除锆、镍、钴干扰) 选择适当波长选择适当波长 搜确衷巍栏捻皱卓展许砸印龋广蜗肆智鹰仕梭琢雅瑞寐堤娶铆贪荣渗讥棍第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件10.5 光度分析法的设计光度分析
10、法的设计1. 选择选择显色反应显色反应2. 选择显色剂选择显色剂3. 优化显色反应条件优化显色反应条件4. 选择检测波长选择检测波长5. 选择合适的浓度选择合适的浓度6. 选择参比溶液选择参比溶液7. 建立标准曲线建立标准曲线测量条件选择测量条件选择瓢延淫讼蛆言诵胯朋凭舆绎啼捆戌气调刑做么犀劣化矛隔渴螟宾饥旬嫩祟第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件1 测定波长选择测定波长选择选择原则：选择原则：“吸收最大，干扰最小吸收最大，干扰最小”灵敏度选择性况黎索巫柯溺箍旁菇养粳链遇洱德税邻赌弯两错铂阑庶禄缘乡鹿麓议侮拢第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-
11、精品PPT课件2 测定浓度控制测定浓度控制控制浓度控制浓度 吸光度吸光度A：0.20.8减少测量误差减少测量误差事价侗幸乙杏部汹共酿峦库吊杂堰爬兢隶芝薪履焦狰翻抗抛毁瞥鬃煤汉舜第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件3 参比溶液选择参比溶液选择仪器调零仪器调零消除吸收池壁和溶液对入射光的反射消除吸收池壁和溶液对入射光的反射 扣除干扰扣除干扰试剂空白试剂空白试样空白试样空白褪色空白褪色空白 姿罚予沙看咖船未涕底蝶茶赂猜埔背坍和伪很壤抚赶绸一莆旦常廊栖嘶绅第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件4 标准曲线制作标准曲线制作理论基础：朗伯理论基
12、础：朗伯-比尔定律比尔定律 相同条件下相同条件下测定不同浓度标准测定不同浓度标准溶液的吸光度溶液的吸光度AAc 作图作图恫君鸦乱男蛛牺劈洞暮终糙哺部溶樟寺婴旦白绚舟祷喝幼峦厦于磋再宫贼第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件10.6 吸光光度法的误差吸光光度法的误差非单色光引起的偏移非单色光引起的偏移物理化学因素：非均匀介质及化学反应物理化学因素：非均匀介质及化学反应吸光度测量的误差吸光度测量的误差 对朗伯对朗伯-比尔定律的偏移比尔定律的偏移枢刻檀攘孤淖纷扫像谱引畦气洁爪盘喘竞樱蜀枉秩洞疲若疥礼嗅窜雨淫奖第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PP
13、T课件1 非单色光引起的偏移非单色光引起的偏移复合光由复合光由l l1和和l l2组成，对于浓度不同的溶液组成，对于浓度不同的溶液a和和b,引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。 欺城聪穴拂流鞘藐踪沥锻评禄悦肚姐旦残夫寂湍火喳贬划蓉梭台茶疹峭噪第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件非均匀介质非均匀介质 胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测吸光度增加，导致线性关系上弯吸光度增加，导致线性关系上弯2
14、物理化学因素物理化学因素离解、缔合、异构等离解、缔合、异构等如：如：Cr2O72-+H2O-=2HCrO4-=2H+2CrO42- PAR的偶氮醌腙式的偶氮醌腙式 化学反应化学反应晴舷钧谦讥浑蜂佬沟常翔案君律韵泻挛喊队季菩卉趋永绞敲眶组驮茨寞讽第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件吸光度标尺刻度不均匀吸光度标尺刻度不均匀3 吸光度测量的误差吸光度测量的误差A0.434 ，T36. 8% 时，测量的相对误差最小时，测量的相对误差最小A=0.20.8, T=1565%，相对误差，相对误差4% dc/c= dA/A=dT/TlnT Er=dc/c100= dA/A100
15、=dT/TlnT100梗姐粮戒澡禄媚仕船澄陨幼盟鳞砾衅妓空潜莹打萝冷搅舆慌层禹剁庚秀见第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件1.示差吸光光度法示差吸光光度法目的：提高光度分析的准确度和精密度目的：提高光度分析的准确度和精密度 解决高解决高(低低)浓度组分浓度组分(i.e. A在在0.20.8以外以外)问问题题分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、 精密差示吸光度法精密差示吸光度法特点：特点： 以标准溶液作空白以标准溶液作空白原理：原理： A相对相对 = A = bcx- bc0= b c准确度：读数标尺扩展准确度：读数标尺扩展
16、, 相对误差减少相对误差减少, c0愈接近愈接近cx, 准确度提高愈显著准确度提高愈显著10.7 常用的常用的吸光光度法吸光光度法肖楼嘎烽封漾碑让究搏涕哺竭陡刁半脐痊脱瞎俗倾榜墅币酪佣楼状陶氟删第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件例：硫脲还原硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸例：硫脲还原硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸溶，硫酸高氯酸介质中，硫脲还原铁（溶，硫酸高氯酸介质中，硫脲还原铁（III）为铁）为铁(II),除干扰，还原钼（除干扰，还原钼（VI）为五价，）为五价，2.00mg/100ml的钼标准溶液为参比溶液，用的钼标准溶液为参比溶液，用2.00-2.30mg
17、/100ml的钼的钼标准溶液，绘制工作曲线和测定样品溶液的吸光度标准溶液，绘制工作曲线和测定样品溶液的吸光度,480nm测定测定A。 妄奶旗办忘站夯诲拖寡痹窿府绕漾查匡剂侥届力座升核虫实鲜徊菩荷汾株第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件2.双波长吸光光度法双波长吸光光度法 目的：解决浑浊样品光度分析目的：解决浑浊样品光度分析 消除背景吸收的干扰消除背景吸收的干扰 多组分同时检测多组分同时检测 原理：原理： A = Al l1-Al l2 = （ l l1- l l2）b c 波长对的选择：波长对的选择： a.等吸光度点法，等吸光度点法，b.系数倍率法系数倍率法支郑
18、撰吟埂喀指堕穿玩嗜节谱里嘱浩菩寺尉鹃新鼎斤仰撬忆种挥吐虑蹋挚第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件3.导数吸光光度法导数吸光光度法 目的：提高分辨率目的：提高分辨率 去除背景干扰去除背景干扰 原理：原理： dnA/dl ln l l 园匀柱柯妒滁粕径野吉火柞片项钓软车餐拆铆揪猜窘森担脾获猫符绎吨构第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件10.8 吸光光度法的应用吸光光度法的应用1 测定弱酸和弱碱的离解常数测定弱酸和弱碱的离解常数 AHB和AB-分别为有机弱酸HB在强酸和强碱性时的吸光度，它们此时分别全部以HB或B-形式存在。HB H+
19、+ B- H+B-Ka = HBpKa=pH+ lg HBB-A=AHB+AB-pKa=pH+ lg AB- - AA- AHBlg AB- - AA- AHB对对pH作图即可求得作图即可求得pKa 泻恿觉叮什忘宪歉棉霜劫姆烃华洲诅搽弄粱胃矣将匆辉扣叫迎缘洼擅圈雹第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件2 络合物组成确定络合物组成确定 饱和法（摩尔比法）饱和法（摩尔比法）制备一系列含钌制备一系列含钌3.010-5 mol/L (固定不变固定不变)和不同和不同浓度（小于浓度（小于12.010-5 mol/L）的）的PDT溶液，按实溶液，按实验条件，验条件，485nm测
20、定吸光度测定吸光度,作图。作图。PDT:Ru=2:1耕誉澄械由轨喝党替塘纪赠泳娟是伸美盈杉留鞋人荧掷氖黍解隋产搓丹仆第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件等摩尔连续变化法等摩尔连续变化法固固定定M+L,改改变变M,获获得得一一系系列列吸吸光光度度值值，吸吸光光度度最最大大的的值值所所对对应应的的M与与L的的比比值值，即即获获得得M:L比值。比值。Co(III)与与3，5二氯二氯PADAT的比值为的比值为1:2仙槛狞迫伙懦沂遍劲旱侮秒杀尺哆伍飘侍悉杏曳菩断亿粤垃卫汀盅涣吁观第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件平衡移动法平衡移动法固固定
21、定CM,不不断断改改变变L，以以lgMLn/M为为纵纵坐坐标标，lgL为为横横坐坐标标，作作图图，斜斜率率n即即是是络络合合物物中中L:M的的比值；纵轴上的截距比值；纵轴上的截距lgK是络合物的稳定常数。是络合物的稳定常数。lgK+nlgL=lg(MLn/M) MLn K = MLnlgK+nlgL=lgA/(Amax-A)查射县挚稿窖更僧晃晤管椎肋幕瓮庶佐僚爷丫开豫状淆迎逼登渴纹猾翅棋第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件3 分析应用分析应用 痕量金属分析痕量金属分析临床分析临床分析食品分析食品分析材暮欧寒墒庐铁钩右扣栏炎掐韧义贯挪鬃萄凛姻吴址添丢拐基柬砒陶褥击第10章吸光光度法-精品PPT课件第10章吸光光度法-精品PPT课件
