临床标本的细菌学检查

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1、临床标本的细菌学检查临床标本的细菌学检查第一节第一节 血液及骨髓标本血液及骨髓标本一一 血液标本血液标本n血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。症的基本方法。n如从患者血液中检出细菌，一般应视为病如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。原菌。n常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。（一）标本采集一）标

2、本采集n1. 采血时间及次数采血时间及次数n2. 抽血部位及抽血量抽血部位及抽血量(二二) 检验方法和操作流程检验方法和操作流程1. 操作过程操作过程血血液液及及骨骨髓髓标标本本细细菌菌学学检检验验方方法法和和操操作作流流程程3. 报告方式报告方式 培养培养7d无菌生长者报告无菌生长者报告“培养培养7d无菌生无菌生长长”。查见细菌报告菌名和药敏结果。查见细菌报告菌名和药敏结果。4. 菌血症、败血症的诊断标准菌血症、败血症的诊断标准 1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）；）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）； 2）发病星期后血中抗体滴度上升。）发病星期后血中抗体滴度上升。2. 培养瓶中

3、有细菌生长时的不同表现。培养瓶中有细菌生长时的不同表现。第二节第二节 脑脊液标本脑脊液标本n脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。重要价值。n正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。n常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。（一）

4、标本的采集（一）标本的采集n脑脊液无论涂片或培养必须于脑脊液无论涂片或培养必须于采集后立即送检不宜将其置于采集后立即送检不宜将其置于冰箱保存，否则影响检出率。冰箱保存，否则影响检出率。脑脑脊脊液液标标本本细细菌菌学学检检验验方方法法和和操操作作流流程程图图（二）检验方法和操作流程（二）检验方法和操作流程n1. 涂片检查涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查：一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。态性的革

5、兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。 (2)结核分枝杆菌涂片检查结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查新生隐球菌涂片检查n2. 分离培养分离培养n3. 报告方式报告方式 培养培养48小时，仍无菌生长者报告小时，仍无菌生长者报告“培养培养2天无细菌生长天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和查见细菌报告细菌，报告菌名和药敏结果。药敏结果。 第三节第三节 呼吸系统标本呼吸系统标本n下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌

6、）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示有上呼吸道感染。菌，提示有上呼吸道感染。n常见的病原菌主要有肺炎链球菌、常见的病原菌主要有肺炎链球菌、A群链球菌、群链球菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、卡他布兰汉菌、白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌和军团菌。肠杆菌和军团菌。一一 痰标本痰标本（一）标本采集（一）标本采集n1. 痰标本的采集时间痰标本的采集时间n2. 标本采集方法标本采集方法 (1) 自然咳痰法自然咳痰法 (2) 气管镜下采集法气管镜下采集法 (3) 气管穿刺法气管穿刺法 (4)

7、 结核分枝杆菌标本收集法：收集结核分枝杆菌标本收集法：收集24H痰液以痰液以提高阳性检出率。提高阳性检出率。呼呼吸吸系系统统标标本本细细菌菌学学检检验验方方法法和和操操作作流流程程（二）检验方法和操作流程（二）检验方法和操作流程n1. 肉眼观察肉眼观察n2. 涂片检查涂片检查 其一依据其一依据100镜下观察白细胞和镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定上皮细胞数目多少来评定(如表如表)；其二是初步判；其二是初步判定是否有病原存在。定是否有病原存在。分级分级白细胞（个）白细胞（个）上皮细胞（个）上皮细胞（个）A252525C25痰标本镜下分类痰标本镜下分类注：注：A、B两种情况的痰标本适合做培养

8、，两种情况的痰标本适合做培养，C不合适，应重新留标本不合适，应重新留标本（1）一般细菌涂片）一般细菌涂片（2）结核分枝杆菌涂片）结核分枝杆菌涂片（3）放线菌及诺卡菌涂片）放线菌及诺卡菌涂片n3. 培养培养n（1）培养标本的选择：应选择粘液痰作涂片。）培养标本的选择：应选择粘液痰作涂片。 （2）痰标本培养前处理：用无菌盐水将痰洗涤）痰标本培养前处理：用无菌盐水将痰洗涤3次，次，加入等量的加入等量的1%胰酶溶液（胰酶溶液（PH7.6)，37C水浴水浴90min，使痰液均质化后备用。使痰液均质化后备用。 （3）分离培养）分离培养n4. 报告方式报告方式 痰标本培养痰标本培养48小时后仅有草绿色链球小

9、时后仅有草绿色链球菌生长而无致病菌生长，报告菌生长而无致病菌生长，报告“正常菌群正常菌群”。查出。查出的致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌的的致病菌，报告菌名和药敏结果，同时报告细菌的量化指标。量化指标。 分级分级划线区菌落数目划线区菌落数目第第1区区第第2区区第第3区区少见（少见（+）101051055表表5-3 痰标本在平板上的菌落量化指标痰标本在平板上的菌落量化指标二二 咽拭标本咽拭标本n正常咽试有多种上呼吸道的正常菌群（如正常咽试有多种上呼吸道的正常菌群（如草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致草绿色链球菌）。若从患者标本中查出致病菌提示上呼吸道有细菌感染（如急、慢病菌提示上呼吸道

10、有细菌感染（如急、慢性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）性扁桃体炎，咽炎，喉炎等）n常见的病原菌主要有金黄色葡萄球菌、表常见的病原菌主要有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、微球菌和棒皮葡萄球菌、化脓性链球菌、微球菌和棒状杆菌等）。状杆菌等）。n（一）标本采集一）标本采集n（二）检验方法和操作流程（二）检验方法和操作流程 1. 涂片检查（先培养后涂片）涂片检查（先培养后涂片） 2. 分离培养分离培养 3. 报告方式报告方式 同痰标本检查同痰标本检查。第四节第四节 穿刺液标本穿刺液标本n穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）。液等）。n正常穿刺液

11、是无菌的，若从患者穿刺液中查见致正常穿刺液是无菌的，若从患者穿刺液中查见致病菌或条件致病菌提示该部位有细菌感染。病菌或条件致病菌提示该部位有细菌感染。n胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见：腹腔感胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见：腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠挨希菌、粪肠球菌，染的病原菌以肠道细菌如大肠挨希菌、粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见：心包炎和关节腔液以金以及结核分枝杆菌多见：心包炎和关节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌多绿假单胞菌多见。n（一）一） 标本采集标本采集n（二）检验方法和操作流程（二）检验方法和操作流程

12、 1. 涂片检查（先接种后涂片）涂片检查（先接种后涂片） 2. 分离培养分离培养 （1）普通细菌培养：）普通细菌培养： （2）厌氧菌培养）厌氧菌培养 （3）结核菌培养）结核菌培养 3. 报告方式报告方式 培养培养48h无细菌生长，报告无细菌生长，报告“培养培养2 天无细菌生长天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名和药敏。查见细菌，报告菌名和药敏结果。结果。穿穿刺刺液液标标本本细细菌菌学学检检验验方方法法和和操操作作流流程程第五节第五节 泌尿、生殖道标本泌尿、生殖道标本一一 尿液标本尿液标本n中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要价值。细菌培养必须结合菌

13、落计数辨别是否为病价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。原菌。n有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数105/ml，提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核等）。n常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。（一）标本采集一）标本采集 1. 中段尿标本采集法中段尿标本采集法 （1）女性：）女性：（2）男性）男性（3）儿童、婴儿）儿童、婴儿（4）两侧肾盂尿）两侧肾盂尿（5）膀胱穿刺）膀胱穿刺（二）检验方法和操作流程二

14、）检验方法和操作流程 1.涂片检查涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌）念珠菌 （3）结核分枝杆菌）结核分枝杆菌 2.一般细菌培养一般细菌培养 如培养如培养2d无细菌生长，即可弃去。无细菌生长，即可弃去。 （1）倾注平板法）倾注平板法 （2）平板接种环法）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml，则整个平板菌落数超过则整个平板菌落数超过100个，可报告个，可报告“菌落菌落数数105/ml”。 （4）Uricult 半定量法半定量法尿尿液液标标本本细细菌菌检检验验方方法法和和操操作作流流程程Uricul

15、t 操作步骤操作步骤Uricult 菌落比密图菌落比密图Uricult 细菌种类标准模式图细菌种类标准模式图n4.特殊菌落培养特殊菌落培养（1）淋病奈瑟菌培养）淋病奈瑟菌培养（2）厌氧菌培养）厌氧菌培养（3）结核分枝杆菌培养）结核分枝杆菌培养n5.报告方式报告方式 培养培养48h无细菌生长，报告无细菌生长，报告“2天无细菌生长天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及。查见细菌，报告菌名及其菌落计数（菌落数其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。和药敏结果。二二 生殖道标本生殖道标本n正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性阴道）有多种细（包括男性尿道

16、口和女性阴道）有多种细菌寄生。菌寄生。n查见病原菌提示有细菌感染。查见病原菌提示有细菌感染。n常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形杆菌等。杆菌等。n（一）标本采集一）标本采集 1.女性生殖道标本女性生殖道标本 2.男性生殖道标本男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本梅毒螺旋体标本n（二）检验方法和操作流程二）检验方法和操作流程 1.涂片检查涂片检查 （1）革兰染色镜检）革兰染色镜检 （2）梅毒螺旋体涂片检查）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养分离培养 （1）普通细菌培养）普通细菌培养 （2）淋

17、病奈瑟菌培养）淋病奈瑟菌培养 （3）阴道加特纳菌培养）阴道加特纳菌培养 （4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。生生殖殖道道标标本本细细菌菌学学检检验验方方法法和和操操作作流流程程第六节第六节 粪便标本粪便标本n正常情况下肠道中有多种细菌。正常情况下肠道中有多种细菌。n引起感染性腹泻的病原微生物有：引起感染性腹泻的病原微生物有： （1）细菌性：产毒素型腹泻、侵袭型腹泻、）细菌性：产毒素型腹泻、侵袭型腹泻、食物中毒、慢性腹泻。食物中毒、慢性腹泻。 （2）真菌性）真菌性 （3）病毒性）病毒性

18、粪粪便便标标本本细细菌菌学学检检验验方方法法和和操操作作流流程程n（一）标本采集一）标本采集n1.自然排便采集自然排便采集n2.直肠试子直肠试子n（二）检验方法和操作流程（二）检验方法和操作流程n1.涂片检查涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌。因此，仅以染色性和形态无法分辩是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。粪便标本一般不作涂片检查。n2.培养培养n（1）沙门）沙门-志贺菌培养：志贺菌培养：直接划线接种于腔选直接划线接种于腔选择性培养基；择性培养基；用接种针挑选用接种针挑选SS上不发酵乳糖菌上不发酵乳糖菌落，

19、分别接种于三糖铁琼脂（落，分别接种于三糖铁琼脂（KIA)和尿素和尿素-动力动力-靛基质培养基；靛基质培养基；生化生化反应，A-F多价“O”血清或因子血清进行鉴定。（2）致病性大肠埃细菌培养）致病性大肠埃细菌培养（3）霍乱弧菌培养）霍乱弧菌培养（4）副溶血弧菌培养）副溶血弧菌培养（5）小肠结肠炎耶尔森菌培养）小肠结肠炎耶尔森菌培养（6）空肠弯曲菌培养）空肠弯曲菌培养（7）葡萄球菌培养）葡萄球菌培养（8）艰难梭菌培养）艰难梭菌培养（9）真菌培养）真菌培养（10）菌群失调的细菌学检验）菌群失调的细菌学检验3. 报告方式报告方式第第7节节 脓液及创伤感染分泌物标本脓液及创伤感染分泌物标本n化脓性感染可

20、由单种或多种细菌引起。化脓性感染可由单种或多种细菌引起。n常见病原菌主要有金黄色葡萄球菌、化脓常见病原菌主要有金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌和结核分枝杆菌、诺卡菌，以及变形杆菌和结核分枝杆菌、诺卡菌，以及梭杆菌和拟杆菌等。梭杆菌和拟杆菌等。 脓脓液液和和创创面面分分泌泌物物标标本本细细菌菌学学检检查查方方法法和和操操作作流流程程n（一）标本采集一）标本采集 1.开放性脓肿和脓性分泌物开放性脓肿和脓性分泌物 2.大面积烧伤的创面分泌物大面积烧伤的创面分泌物 3.封闭性脓肿封闭性脓肿n（二）检验方法和操作流程（二）检验方法和操作流程 1.涂片检查涂片检查 根据形态和染色特点，可报告根据形态和染色特点，可报告“查见查见革兰革兰性细菌，形似性细菌，形似 菌菌”或报告或报告“未查见习菌未查见习菌”。 2.培养培养 （1）普通菌培养）普通菌培养 （2）厌氧菌培养）厌氧菌培养 （3）嗜血杆菌及奈瑟菌培养）嗜血杆菌及奈瑟菌培养 （4）结核分枝杆菌培养）结核分枝杆菌培养 （5）真菌培养）真菌培养 3.报告方式报告方式 查见致病菌，报告菌名和药敏结果。查见致病菌，报告菌名和药敏结果。