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1、 DNA的定量测定的定量测定实验目的实验目的n学习测定DNA含量的原理n掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。多种测定方法多种测定方法紫外吸收法：核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（CC一CC一），能够强烈吸收250280nm波长的紫外光。 定磷法分别针对DNA和RNA某些特异的颜色反应方法而建立的比色法 强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间的糖苷键断裂，而产生嘌呤碱基，脱氧核糖与嘧啶核苷酸。其中2脱氧核糖在酸性环境中成为羟基酮基戊醛，此物与二苯胺反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。DNA在40-400g范围内光密度与DNA浓度成正比。
2、100冰醋酸，少量硫酸蓝色复合物DNA + 二苯胺法的原理二苯胺法的原理试剂和器材试剂和器材n试剂 1mg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂n器材 可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平实验过程 取6支试管，依次加入0、0.2、0.4、0.8、和1.0mlDNA标准溶液。添加蒸馏水，使之都成为2ml。然后各加入4ml二苯胺试剂，混匀。于90摄氏度恒温水浴10min，冷却后于595nm处进行比色测定。以DNA浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。标准曲线的制作标准曲线的制作试管试管123456标准标准DNA/mL00.20.40.60.81.0蒸馏水蒸馏水/mL21.81.61.41.21
3、.0二苯胺试剂二苯胺试剂/mL444444沸水中反应沸水中反应10分钟分钟，冷却，在，冷却，在595nm595nm波长处比色波长处比色光密度值光密度值 取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，沸水中反应10分钟，冷却，然后在595nm波长出测定光密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA的ug数，按下式计算每100g兔肝组织中的DNA的含量。 DNADNA含量含量 待测样品中测得的待测样品中测得的DNA的的m mg数数待测样品液中样品的待测样品液中样品的g数数X 100样品的测定样品的测定 注意事项注意事项糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。
4、取样准确选定一台分光光度计后，所有测定工作都在同一台上完成，以避免不同仪器间的系统误差二苯胺不容于水，取用和盛放二苯胺溶液的器皿应干燥，和DNA溶液反应时迅速混合 六、思考题六、思考题 1、 DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？ 2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。分光光度计开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。仪器预热20分钟。 预热后，打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样室盖，将盛有参比溶液的比色皿架置与校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。 将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。 图5仪器外形器外形图1数字数字显示器示器2吸光度吸光度调零旋零旋钮3选择开关开关4吸光度吸光度调斜率斜率电位器位器5浓度度旋旋钮6光源室光源室7电源开关源开关8波波长手手轮9波波长刻度窗刻度窗10试样架拉手架拉手11100%T旋旋钮120%T旋旋钮13灵敏度灵敏度调节旋旋钮14干燥器干燥器
