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1、生物化学思考题答案【篇一:生物化学课后答案】s=txts=txt第三章第三章 氨基酸氨基酸提要提要氨基酸是两性电解质。当氨基酸是两性电解质。当 phph 接近接近 1 1 时,氨基酸的可解离基团全部时,氨基酸的可解离基团全部质子化,当质子化,当 phph 在在 1313 左右时,则全部去质子化。在这中间的某一左右时,则全部去质子化。在这中间的某一 phph因不同氨基酸而异,氨基酸以等电的兼性离子因不同氨基酸而异,氨基酸以等电的兼性离子h3n+chrcoo-h3n+chrcoo-状态存在。某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质状态存在。某一氨基酸处于净电荷为零的兼性离子状态时的介质 ph
2、ph称为该氨基酸的等电点,用称为该氨基酸的等电点,用 pipi 表示。表示。参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有参与蛋白质组成的氨基酸中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外区有光吸收,这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。核磁共振光吸收,这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。核磁共振nmrnmr波谱波谱技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。技术在氨基酸和蛋白质的化学表征方面起重要作用。氨基酸分析别离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极性大小。常氨基酸分析别离方法主要是基于氨基酸的酸碱性质和极性大小。常用方法有离子交换柱层析、高效液相层析用方法有离子交换柱层析、高效液相层析hplchp
3、lc等。等。习题习题以下氨基酸的单字母和三字母的缩写符号:精氨酸、天冬氨酸、谷以下氨基酸的单字母和三字母的缩写符号:精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。氨酰氨、谷氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。 见表见表 3-13-1表表 3-13-1 氨基酸的简写符号氨基酸的简写符号名称名称 三字母符号三字母符号 单字母符号单字母符号 名称名称丙氨酸丙氨酸(alanine) ala a(alanine) ala a 亮氨酸亮氨酸(leucine)(leucine) 三字母符号三字母符号 单字母符号单字母符号 leu leul l m m 精氨酸精氨酸(arginine) arg r
4、(arginine) arg r 赖氨酸赖氨酸(lysine) lys k(lysine) lys k 天冬酰氨天冬酰氨(asparagines) asn n(asparagines) asn n 甲硫氨酸甲硫氨酸( (蛋氨酸蛋氨酸)(methionine) met)(methionine) met天冬氨酸天冬氨酸(aspartic acid) asp d(aspartic acid) asp d asn asn 和和/ /或或 asp asx basp asx b半胱氨酸半胱氨酸(cysteine) cys c(cysteine) cys c谷氨酰氨谷氨酰氨(glutamine) gln q
5、(glutamine) gln q谷氨酸谷氨酸(glutamic acid) glu e(glutamic acid) glu e gln gln 和和/ /或或 glu gls zglu gls z甘氨酸甘氨酸(glycine) gly g(glycine) gly g 苯丙氨酸苯丙氨酸(phenylalanine)pro p(phenylalanine)pro p 丝氨酸丝氨酸(serine) ser s(serine) ser s 苏氨酸苏氨酸(threonine) thr t phe f(threonine) thr t phe f 脯氨酸脯氨酸(praline)(praline)色氨
6、酸色氨酸(tryptophan)trp w(tryptophan)trp w组氨酸组氨酸(histidine) his h(histidine) his h 酪氨酸酪氨酸(tyrosine) tyr y(tyrosine) tyr y异亮氨酸异亮氨酸(isoleucine) ile i(isoleucine) ile i 缬氨酸缬氨酸(valine) val v(valine) val v解:解:ph = pka + lg20% pka = 10.53 (ph = pka + lg20% pka = 10.53 (见表见表 3-33-3,p133)p133) 4 4、计算以下物质、计算以下物质
7、 0.3mol/l0.3mol/l 溶液的溶液的 phph:(a)(a)亮氨酸盐酸盐;亮氨酸盐酸盐;(b)(b)亮氨亮氨酸钠盐;酸钠盐;(c)(c)等电亮氨酸。等电亮氨酸。 (a) (a)约约 1.46,(b)1.46,(b)约约 11.5, (c)11.5, (c)约约 6.056.05 5 5、根据表、根据表 3-33-3 中氨基酸的中氨基酸的 pkapka 值,计算以下氨基酸的值,计算以下氨基酸的 pipi 值:丙氨值:丙氨酸、半胱氨酸、谷氨酸和精氨酸。酸、半胱氨酸、谷氨酸和精氨酸。pi:6.02;5.02;3.22;10.76pi:6.02;5.02;3.22;10.76解:解:pi
8、= 1/2pi = 1/2pka1+ pka2pka1+ pka2 pi(ala) = 1/2 pi(ala) = 1/2 pi(cys) = 1/2 pi(cys) = 1/2 pi(glu) = 1/2 pi(glu) = 1/2 pi(ala) = 1/2 pi(ala) = 1/2 6 6、向、向 1l1mol/l1l1mol/l 的处于等电点的甘氨酸溶液加入的处于等电点的甘氨酸溶液加入 0.3molhcl0.3molhcl,问所得,问所得溶液的溶液的 phph 是多少?如果加入是多少?如果加入 0.3mol naoh0.3mol naoh 以代替以代替 hclhcl 时,时,phph
9、 将是将是多少?多少?phph:2.712.71;9.239.23 7 7、将丙氨酸溶液、将丙氨酸溶液400ml400ml调节到调节到 ph8.0ph8.0,然后向该溶液中加入过,然后向该溶液中加入过量的甲醛,当所得溶液用碱反滴定至量的甲醛,当所得溶液用碱反滴定至 ph8.0ph8.0 时,消耗时,消耗 0.2mol/l naoh0.2mol/l naoh溶液溶液 250ml250ml。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少克?。问起始溶液中丙氨酸的含量为多少克?4.45g4.45g 9 9、说明用含一个结晶水的固体组氨酸盐酸盐和、说明用含一个结晶水的固体组氨酸盐酸盐和 1mol/l koh1mol/
10、l koh 配配制制 1lph6.51lph6.5 的的 0.2mol/l0.2mol/l 组氨酸盐缓冲液的方法组氨酸盐缓冲液的方法 取组氨酸盐酸盐取组氨酸盐酸盐41.92g(0.2mol)41.92g(0.2mol),加入,加入 352ml 1mol/l koh352ml 1mol/l koh,用水稀释至,用水稀释至 1l1l 10 10、为什么氨基酸的茚三酮反映液能用测压法定量氨基酸?、为什么氨基酸的茚三酮反映液能用测压法定量氨基酸? 11 11、l- l-亮氨酸溶液在亮氨酸溶液在 20cm20cm 旋光管中测得的旋光度为旋光管中测得的旋光度为+1.81o+1.81o。计算计算 l- l-
11、亮氨酸在亮氨酸在 6mol/l hcl6mol/l hcl 中的比旋中的比旋aa。a=+15.1oa=+15.1o 12 12、标出异亮氨酸的、标出异亮氨酸的 4 4 个光学异构体的个光学异构体的r r,s s构型名称。构型名称。 参考图参考图3-153-15 13 13、甘氨酸在溶剂、甘氨酸在溶剂 a a 中的溶解度为在溶剂中的溶解度为在溶剂 b b 中的中的 4 4 倍,苯丙氨酸在倍,苯丙氨酸在溶剂溶剂 a a 中的溶解度为溶剂中的溶解度为溶剂 b b 中的两倍。利用在溶剂中的两倍。利用在溶剂 a a 和和 b b 之间的逆之间的逆流分溶方法将甘氨酸和苯丙氨酸分开。在起始溶液中甘氨酸含量为
12、流分溶方法将甘氨酸和苯丙氨酸分开。在起始溶液中甘氨酸含量为100mg100mg ,苯丙氨酸为,苯丙氨酸为 81mg81mg ,试答复以下问题:,试答复以下问题:(1)(1)利用由利用由 4 4 个分溶个分溶管组成的逆流分溶系统时,甘氨酸和苯丙氨酸各在哪一号分溶管中管组成的逆流分溶系统时,甘氨酸和苯丙氨酸各在哪一号分溶管中含量最高?含量最高?2 2在这样的管中每种氨基酸各为多少毫克?在这样的管中每种氨基酸各为多少毫克? 1 1第第4 4 管和第管和第 3 3 管;管;2 251.2mg gly+24mg phe51.2mg gly+24mg phe 和和 38.4mggly+36mg38.4mg
13、gly+36mgphephe解:根据逆流分溶原理,可得:解:根据逆流分溶原理,可得:对于对于 glygly:kd = ca/cb = 4 = q(kd = ca/cb = 4 = q(动相动相)/p)/p静相静相 p+q = 1 = (1/5 + p+q = 1 = (1/5 +4/5)4/5) 4 4 个分溶管分溶个分溶管分溶 3 3 次:次:1/5 + 4/51/5 + 4/53=1/125+2/125+48/125+64/1253=1/125+2/125+48/125+64/125对于对于 phephe:kd = ca/cb = 2 = q(kd = ca/cb = 2 = q(动相动相
14、)/p)/p静相静相 p+q = 1 = (1/3 + p+q = 1 = (1/3 +2/3)2/3) 4 4 个分溶管分溶个分溶管分溶 3 3 次:次:1/3 + 2/31/3 + 2/33=1/27+6/27+12/27+8/273=1/27+6/27+12/27+8/27故利用故利用 4 4 个分溶管组成的分溶系统中,甘氨酸和苯丙氨酸各在个分溶管组成的分溶系统中,甘氨酸和苯丙氨酸各在 4 4 管管和第和第 3 3 管中含量最高,其中:管中含量最高,其中: 14 14、指出在正丁醇:醋酸:水的系统中进行纸层析时,以下混合物、指出在正丁醇:醋酸:水的系统中进行纸层析时,以下混合物中氨基酸的
15、相对迁移率:中氨基酸的相对迁移率:(1)ile, lys; (2)phe, ser (3)ala, val,(1)ile, lys; (2)phe, ser (3)ala, val,leu; (4)pro, val (5)glu, asp; (6)tyr, ala, ser, his.leu; (4)pro, val (5)glu, asp; (6)tyr, ala, ser, his. ile lys ile lys;phe, serphe, ser;leu val ala,leu val ala,;val proval pro;gluaspgluasp;tyrtyralaseralaser
16、hishis解:根据解:根据 p151p151 图图 3-253-25 可得结果。可得结果。 15 15将含有天冬氨酸将含有天冬氨酸(pi=2.98)(pi=2.98)、甘氨酸、甘氨酸(pi=5.97)(pi=5.97)、亮氨酸、亮氨酸(pi=6.53)(pi=6.53)和赖氨酸和赖氨酸(pi=5.98)(pi=5.98)的柠檬酸缓冲液,加到预先同样缓冲液平衡过的的柠檬酸缓冲液,加到预先同样缓冲液平衡过的强阳离交换树脂中,随后用爱缓冲液析脱此柱,并分别收集洗出液,强阳离交换树脂中,随后用爱缓冲液析脱此柱,并分别收集洗出液,这这 5 5 种氨基酸将按什么次序洗脱下来?种氨基酸将按什么次序洗脱下来
17、?asp, thr, gly, leu, lysasp, thr, gly, leu, lys解:在解:在 ph3ph3 左右,氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小左右,氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引的大小次序是减刑氨基酸次序是减刑氨基酸(a2+)(a2+)中性氨基酸中性氨基酸(a+)(a+)酸性氨基酸酸性氨基酸(a0)(a0)。因此氨基酸。因此氨基酸的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸,最后是碱性氨基酸,的洗出顺序大体上是酸性氨基酸、中性氨基酸,最后是碱性氨基酸,由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用,所以其洗脱顺序为:由于氨基酸和树脂之间还存在疏水相互作用,所以其洗脱顺序为
18、:asp, thr, gly, leu, lysasp, thr, gly, leu, lys。第四章第四章 蛋白质的共价结构蛋白质的共价结构提要提要蛋白质分子是由一条或多条肽链构成的生物大分子。多肽链是由氨蛋白质分子是由一条或多条肽链构成的生物大分子。多肽链是由氨基酸通过肽键共价连接而成的,各种多肽链都有自己特定的氨基酸基酸通过肽键共价连接而成的,各种多肽链都有自己特定的氨基酸序列。蛋白质的相对分子质量介于序列。蛋白质的相对分子质量介于 60006000 到到 10000001000000 或更高。或更高。蛋白质分为两大类:单纯蛋白质和缀合蛋白质。根据分子形状可分蛋白质分为两大类:单纯蛋白质
19、和缀合蛋白质。根据分子形状可分为纤维状蛋白质、球状蛋白质和膜蛋白质。此外还可按蛋白质的生为纤维状蛋白质、球状蛋白质和膜蛋白质。此外还可按蛋白质的生物学功能分类。物学功能分类。为了表示蛋白质结构的不同组织层次,经常使用一级结构、二级结为了表示蛋白质结构的不同组织层次,经常使用一级结构、二级结构、三级结构和四级结构这样一些专门术语。一级结构就是共价主构、三级结构和四级结构这样一些专门术语。一级结构就是共价主链的氨基酸序列,有时也称化学结构。二、三和四级结构又称空间链的氨基酸序列,有时也称化学结构。二、三和四级结构又称空间结构即三维结构或高级结构。结构即三维结构或高级结构。蛋白质的生物功能决定于它的
20、高级结构,高级结构是由一级结构即蛋白质的生物功能决定于它的高级结构,高级结构是由一级结构即氨基酸序列决定的,二氨基酸序列是由遗传物质氨基酸序列决定的,二氨基酸序列是由遗传物质 dnadna 的核苷酸序列的核苷酸序列规定的。规定的。肽键肽键coconhnh是连接多肽链主链中氨基酸残缺的共价键,二硫键是连接多肽链主链中氨基酸残缺的共价键,二硫键是使多肽链之间交联或使多肽链成环的共价键。是使多肽链之间交联或使多肽链成环的共价键。多肽链或蛋白质当发生部分水解时,可形成长短不一的肽段。除部多肽链或蛋白质当发生部分水解时,可形成长短不一的肽段。除部分水解可以产生小肽之外,生物界还存在许多游离的小肽,如谷胱
21、分水解可以产生小肽之外,生物界还存在许多游离的小肽,如谷胱甘肽等。小肽晶体的熔点都很高,这说明短肽的晶体是离子晶格、甘肽等。小肽晶体的熔点都很高,这说明短肽的晶体是离子晶格、在水溶液中也是以偶极离子存在的。在水溶液中也是以偶极离子存在的。测定蛋白质一级结构的策略是:测定蛋白质一级结构的策略是:1 1测定蛋白质分子中多肽链数目;测定蛋白质分子中多肽链数目;2 2拆分蛋白质分子的多肽链;拆分蛋白质分子的多肽链;3 3断开多肽链内的二硫桥;断开多肽链内的二硫桥;4 4分析每一多肽链的氨基酸组成;分析每一多肽链的氨基酸组成;5 5鉴定多肽链的鉴定多肽链的 n-n-末端和末端和 c-c-末端末端残基;残
22、基;6 6断裂多肽链成较小的肽段,并将它们别离开来;断裂多肽链成较小的肽段,并将它们别离开来;7 7测定各肽段的氨基酸序列;测定各肽段的氨基酸序列;8 8利用重叠肽重建完整多肽链的一级利用重叠肽重建完整多肽链的一级结构;结构;9 9确定半胱氨酸残基形成的确定半胱氨酸残基形成的 s-ss-s 交联桥的位置。交联桥的位置。序列分析中的重要方法和技术有:测定序列分析中的重要方法和技术有:测定 n-n-末端基的苯异硫氰酸酯末端基的苯异硫氰酸酯pitcpitc法,分析法,分析 c-c-末端基的羧肽酶法,用于多肽链局部断裂的酶裂末端基的羧肽酶法,用于多肽链局部断裂的酶裂解和解和 cnbrcnbr 化学裂解
23、,断裂二硫桥的巯基乙醇处理,测定肽段氨基酸化学裂解,断裂二硫桥的巯基乙醇处理,测定肽段氨基酸序列的序列的 edmanedman 化学降解和电喷射串联质谱技术,重建多肽链一级序化学降解和电喷射串联质谱技术,重建多肽链一级序列的重叠肽拼凑法以及用于二硫桥定位的对角线电泳等。列的重叠肽拼凑法以及用于二硫桥定位的对角线电泳等。在不同生物体中行使相同或相似功能的蛋白质称同源蛋白质。同源在不同生物体中行使相同或相似功能的蛋白质称同源蛋白质。同源蛋白质具有明显的序列相似性蛋白质具有明显的序列相似性( (称序列同源称序列同源), ),两个物种的同源蛋白质,两个物种的同源蛋白质,其序列间的氨基酸差异数目与这些物
24、种间的系统其序列间的氨基酸差异数目与这些物种间的系统发生差异是成比例的。并根据同源蛋白质的氨基酸序列资料建立起发生差异是成比例的。并根据同源蛋白质的氨基酸序列资料建立起进化树。同源蛋白质具有共同的进化起源。进化树。同源蛋白质具有共同的进化起源。在生物体内有些蛋白质常以前体形试合成,只有按一定方式裂解除在生物体内有些蛋白质常以前体形试合成,只有按一定方式裂解除去部分肽链之后才出现生物活性,这一现象称蛋白质的激活。血液去部分肽链之后才出现生物活性,这一现象称蛋白质的激活。血液凝固是涉及氨基酸序列断裂的一系列酶原被激活的结果,酶促激活凝固是涉及氨基酸序列断裂的一系列酶原被激活的结果,酶促激活的级联放
25、大,使血凝块迅速形成成为可能。凝血酶原和血清蛋白原的级联放大,使血凝块迅速形成成为可能。凝血酶原和血清蛋白原是两个最重要的血凝因子。血纤蛋白蛋白原在凝血酶的作用下转变是两个最重要的血凝因子。血纤蛋白蛋白原在凝血酶的作用下转变为血清蛋白凝块血块的主要成分。为血清蛋白凝块血块的主要成分。我国在我国在 2020 世纪世纪 6060 年代首次在世界上人工合成了蛋白质年代首次在世界上人工合成了蛋白质结晶牛结晶牛胰岛素。近二、三十年发展起来的固相肽合成是控制合成技术上的胰岛素。近二、三十年发展起来的固相肽合成是控制合成技术上的一个巨大进步,它对分子生物学和基因工程也就具有重要影响和意一个巨大进步,它对分子
26、生物学和基因工程也就具有重要影响和意义。至今利用义。至今利用 merrifieldmerrifield 固相肽合成仪已成功地合成了许多肽和蛋固相肽合成仪已成功地合成了许多肽和蛋白质。白质。 习题习题 1. 1.如果一个相对分子质量为如果一个相对分子质量为 1200012000 的蛋白质,含的蛋白质,含 1010 种氨基酸,并假种氨基酸,并假设每种氨基酸在该蛋白质分子中的数目相等,问这种蛋白质有多少设每种氨基酸在该蛋白质分子中的数目相等,问这种蛋白质有多少种可能的排列顺序?种可能的排列顺序?1010010100解:解:1012000/120=101001012000/120=10100 2 2、
27、有一个、有一个 a a 肽,经酸解分析得知为肽,经酸解分析得知为 lyslys、hishis、aspasp、glu2glu2、alaala 以以及及 valval、tyrtyr 突然两个突然两个 nh3nh3 分子组成。当分子组成。当 a a 肽与肽与 fdnbfdnb 试剂反应后得试剂反应后得dnp-aspdnp-asp;当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。如果我们在实验中将;当用羧肽酶处理后得游离缬氨酸。如果我们在实验中将 a a肽用胰蛋白酶降解时,得到两种肽,其中一种肽用胰蛋白酶降解时,得到两种肽,其中一种lyslys、aspasp、gluglu、alaala、tyrtyr在在 ph6.4ph
28、6.4 时,净电荷为零,另一种时,净电荷为零,另一种hishis、gluglu 以及以及 valval可给除可给除 dnp-hisdnp-his,在,在 ph6.4ph6.4 时,带正电荷。此外,时,带正电荷。此外,a a 肽用糜蛋白酶降肽用糜蛋白酶降解时,也得到两种肽,其中一种解时,也得到两种肽,其中一种aspasp、alaala、tyrtyr在在 ph6.4ph6.4 时全中时全中性,另一种性,另一种lyslys、hishis、glu2glu2 以及以及 valval在在 ph6.4ph6.4 时带正电荷。问时带正电荷。问 a a肽的氨基酸序列如何?肽的氨基酸序列如何?asn-ala-ty
29、r-glu-lys-his-gln-valasn-ala-tyr-glu-lys-his-gln-val解:解:1 1、n-n-末端分析:末端分析:fdnbfdnb 法得:法得:asp-asp-; 2 2、c-c-末端分析:羧肽酶法得:末端分析:羧肽酶法得:-val-val; 3 3、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键,得到的、胰蛋白酶只断裂赖氨酸或精氨酸残基的羧基形成的肽键,得到的是以是以 argarg 和和 lyslys 为为 c-c-末端残基的肽断。酸水解使末端残基的肽断。酸水解使 asnasp+ nh4+asnasp+ nh4+,由已知条件由已知条件lyslys、aspa
30、sp、gluglu、alaala、tyrtyr可得:可得:asn-( )-( )-( )-lys-asn-( )-( )-( )-lys-( )-( )-val( )-( )-val; 4 4、fdnbfdnb 法分析法分析 n-n-末端得末端得 dnp-hisdnp-his,酸水解使,酸水解使 glnglu+nh4+glnglu+nh4+由已由已知条件知条件hishis、gluglu、valval可得:可得:asn-( )-( )-( )-lys-his-gln-valasn-( )-( )-( )-lys-his-gln-val; 5 5、糜蛋白酶断裂、糜蛋白酶断裂 phephe、trpt
31、rp 和和 tyrtyr 等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。由题,得到的一条肽由题,得到的一条肽aspasp、alaala、tyrtyr结合结合3 3、4 4可得该肽可得该肽的氨基酸序列为:的氨基酸序列为:asn-ala-tyr-glu-lys-his-gln-valasn-ala-tyr-glu-lys-his-gln-val它们的氨基酸组成分别是它们的氨基酸组成分别是 argarg、propro 和和 phephe、tyrtyr、lyslys、serser、alaala。试问此七肽的一级结构怎样?试问此七肽的一级结构怎样? 它是一个环肽,序列为:它是一个环肽,序列
32、为:-phe-ser-phe-ser-ala-tyr-lys-pro-arg-ala-tyr-lys-pro-arg-2 2糜蛋白酶断裂糜蛋白酶断裂 phephe、trptrp 和和 tyrtyr 等疏水氨基酸残基的羧基端肽等疏水氨基酸残基的羧基端肽键,由已知两肽段氨基酸组成键,由已知两肽段氨基酸组成alaala、tyrtyr、serser 和和 propro、phephe、lyslys、argarg可得:可得:-( )-( )-tyr-( )-( )-tyr-和和-( )-( )-( )-phe-( )-( )-( )-phe-;3 3由由2 2得的两肽段分别与得的两肽段分别与 fdnbfd
33、nb 反应,分别产生反应,分别产生 dnp-serdnp-ser 和和dnp-lysdnp-lys 可知该两肽段的可知该两肽段的 n-n-末端分别为末端分别为-ser-ser-和和-lys-lys-,结合,结合2 2可得:可得:-ser-ala-tyr-ser-ala-tyr-和和-lys-( )-( )-phe-lys-( )-( )-phe-;4 4胰蛋白酶专一断裂胰蛋白酶专一断裂 argarg 或或 lyslys 残基的羧基参与形成的肽键,由残基的羧基参与形成的肽键,由题生成的两肽段氨基酸组成题生成的两肽段氨基酸组成argarg、propro 和和 phephe、tyrtyr、lysly
34、s、serser、alaala可得:可得:-pro-arg-pro-arg-和和-( )-( )-( )-( )-lys-( )-( )-( )-( )-lys; 综合综合2 2、3 3、4 4可得此肽一级结构为:可得此肽一级结构为:-lys-pro-arg-phe-ser-ala-tyr-lys-pro-arg-phe-ser-ala-tyr- 6 6、一个多肽可复原为两个肽段,它们的序列如下:链、一个多肽可复原为两个肽段,它们的序列如下:链 1 1 为为 ala-cys-ala-cys-phe-pro-lys-arg-trp-cys-arg- arg-phe-pro-lys-arg-trp
35、-cys-arg- arg- val-cys val-cys;链;链 2 2 为为 cys-tyr-cys-phe-cyscys-tyr-cys-phe-cys。当用嗜热菌蛋白酶消化原。当用嗜热菌蛋白酶消化原多肽具有完整的二硫键时可用以下各肽:多肽具有完整的二硫键时可用以下各肽:1 1alaala、cys2cys2、valval;2 2argarg、lyslys、phephe、propro;3 3(arg2(arg2、cys2cys2、trptrp、tyr)tyr);4 4(cys2(cys2、phe)phe)。试指出在该天然多肽中二硫键的位置。试指出在该天然多肽中二硫键的位置。结构如以下图结
36、构如以下图s-ss-s ala-cys-phe-pro-lys-arg-trp-cys-arg-arg-val_cys ala-cys-phe-pro-lys-arg-trp-cys-arg-arg-val_cys s s s s cys-tyr-cys-phe-cys cys-tyr-cys-phe-cys解:嗜热菌蛋白酶作用专一性较差,根据题中已知条件:解:嗜热菌蛋白酶作用专一性较差,根据题中已知条件:1 1消化原多肽得到消化原多肽得到alaala、cys2cys2、valval,说明链,说明链 1 1 在在 2 2 位位 cyscys后及后及 1111 位位 valval 前发生断裂,前
37、发生断裂,2 2 位位 cyscys 与与 1212 位位 cyscys 之间有二硫键;之间有二硫键;2 2由链由链 1 1 序列可得该肽段序列为:序列可得该肽段序列为:-phe-pro-lys-arg-phe-pro-lys-arg-;3 3由由1 12 2可知该肽段可知该肽段(arg2(arg2、cys2cys2、trptrp、tyr)tyr)中必有一中必有一cyscys 来自链来自链 2 2,另一,另一 cyscys 为链为链 1 1 中中 8 8 位位 cyscys,即链,即链 1 1 中中 8 8 位位 cyscys 与与链链 2 2 中的一个中的一个 cyscys 有二硫键;有二硫
38、键;4 4嗜热菌蛋白酶能水解嗜热菌蛋白酶能水解 tyrtyr、phephe 等疏水氨基酸残基,故此肽等疏水氨基酸残基,故此肽cys2cys2、phephe来自链来自链 2 2,结合,结合3 3中含中含 tyrtyr,可知,可知3 3中形成的中形成的二硫键为链二硫键为链 1 81 8 位位 cyscys 与链与链 2 2 中中 3 3 位位 cyscys 与链与链 2 2 中中 3 3 位位 cyscys 之间;之间;4 4中中cys2cys2、phephe说明链说明链 2 2 中中 1 1 位位 cyscys 与与 5 5 位位 cyscys 中有二硫中有二硫键。键。 综合综合1 1、2 2、
39、3 3、4 4可得结果。可得结果。 7 7、一个十肽的氨基酸分析说明其水解液中存在以下产物:、一个十肽的氨基酸分析说明其水解液中存在以下产物: nh4+ asp glu tyr arg nh4+ asp glu tyr arg met pro lys ser phe met pro lys ser phe并观察以下事实:并观察以下事实:1 1用羧肽酶用羧肽酶 a a 和和 b b 处理该十肽无效;处理该十肽无效;2 2胰胰蛋白酶处理产生两各四肽和游离的蛋白酶处理产生两各四肽和游离的 lyslys;3 3梭菌蛋白酶处理产生梭菌蛋白酶处理产生一个四肽和一个六肽;一个四肽和一个六肽;4 4溴化氢处理
40、产生一个八肽和一个二肽,溴化氢处理产生一个八肽和一个二肽,用单字母符号表示其序列位用单字母符号表示其序列位 npnp;5 5胰凝乳蛋白酶处理产生两个胰凝乳蛋白酶处理产生两个三肽和一三肽和一【篇二:生化课后习题答案】学研究的对象和内容是什么?学研究的对象和内容是什么?解答:生物化学主要研究解答:生物化学主要研究: :1 1生物机体的化学组成、生物分子的生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能;结构、性质及功能; 2 2生物分子分解与合成及反应过程中的能量生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化;变化; 3 3生物遗传信息的储存、传递和表达;生物遗传信息的储存、传递和表达; 4 4生物体新陈
41、生物体新陈代谢的调节与控制。代谢的调节与控制。 2 2你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。提示:生物化学是生命科学的基础学科,注意从不同的角度,去理提示:生物化学是生命科学的基础学科,注意从不同的角度,去理解并运用生物化学的知识。解并运用生物化学的知识。 3 3说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。解答:解答:生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、硫等硫等 6 6 种是种是 解答解答 蛋白质、核酸、糖和脂的主
42、要组成元素。碳原子具蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质,即碳原子最外层的有特殊的成键性质,即碳原子最外层的 4 4 个电子可使碳与自身形成个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共价三键,碳还可与氮、氧和氢原子形成共共价单键、共价双键和共价三键,碳还可与氮、氧和氢原子形成共价键。碳与被键合原子形成价键。碳与被键合原子形成 4 4 个共价键的性质个共价键的性质, ,使得碳骨架可形成线使得碳骨架可形成线性、分支以及环状的多性、分支以及环状的多、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基nh2nh2 、羟、羟基基ohoh 、羰基
43、、羰基c c 、羧基、羧基coohcooh 、巯基巯基shsh 、磷酸基、磷酸基po4po4 等功能基团。这些功能基团因氮、等功能基团。这些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及硫和磷有着可变的氧化数及 氮和氧有着较强的电负性而与生命物质氮和氧有着较强的电负性而与生命物质的许多关键作用密切相关。的许多关键作用密切相关。 生物大分子在结构上也有着共同的规律生物大分子在结构上也有着共同的规律性。性。 生物大分子均由相同类型的构件通过一生物大分子均由相同类型的构件通过一 定的共价键聚合成链状,定的共价键聚合成链状,其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件是其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件
44、是 20 20 种基本氨基种基本氨基 酸。酸。氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性n n 端端cc 端端, ,蛋白质蛋白质主链骨架呈主链骨架呈肽单肽单 位位 重复;核酸的构件是核苷酸重复;核酸的构件是核苷酸, ,核苷酸通过核苷酸通过 3, 53, 5- -磷酸二酯键相连,核酸链也具有方磷酸二酯键相连,核酸链也具有方 向性向性(5(5、3 ),3 ),核酸的主链骨架核酸的主链骨架呈呈磷酸磷酸- -核糖或脱氧核糖核糖或脱氧核糖 重复;构成脂质的构件重复;构成脂质的构件 是甘油、脂是甘油、脂肪酸和胆碱,其非极性烃长链也是一种重复结构;构成多糖的构件肪酸和胆碱,
45、其非极性烃长链也是一种重复结构;构成多糖的构件是单糖,单糖是单糖,单糖 间通过糖苷键相连,淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架间通过糖苷键相连,淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。均呈葡萄糖基的重复。二二 蛋白质化学蛋白质化学 1 1用于测定蛋白质多肽链用于测定蛋白质多肽链 n n 端、端、c c 端的常用方法有哪些?基本原理端的常用方法有哪些?基本原理是什么?是什么?解答:解答: 1 1 n- n-末端测定法:常采用末端测定法:常采用 2, 4 2, 4 二硝基氟苯法、二硝基氟苯法、edmanedman降解法、丹磺酰氯法。降解法、丹磺酰氯法。 2, 4 2, 4 二硝基氟苯二硝基氟苯(d
46、nfb(dnfb 或或 fdnb) fdnb)法:多法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与肽或蛋白质的游离末端氨基与 2, 4 2, 4 二硝基氟苯二硝基氟苯 2, 4 dnfb2, 4 dnfb 反应反应 sangersanger 反应反应 生成生成 dnpdnp多肽或多肽或 dnpdnp蛋白质。蛋白质。 , 由于由于 dnfb dnfb 与氨基形成的键对酸水解远比与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此肽键稳定,因此 dnpdnp多肽经酸水解后,只有多肽经酸水解后,只有 nn末端氨基末端氨基 酸为黄酸为黄色色 dnpdnp氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。
47、丹磺酰氯丹磺酰氯(dns)(dns)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯dnscldnscl反应反应 生生成成 dnsdns多肽或多肽或 dnsdns蛋白质。蛋白质。 由于由于 dns dns 与氨基形成的键对酸水解与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,远比肽键稳定, 因此因此 dnsdns多肽经酸水解后,只有多肽经酸水解后,只有 nn末端氨基酸末端氨基酸为强烈的荧光物质为强烈的荧光物质 dnsdns氨基酸,其余的都氨基酸,其余的都 是游离氨基酸。是游离氨基酸。 苯异苯异硫氰酸脂硫氰酸脂pitcpitc 或或 edman edman 降解法:多肽或
48、蛋白质的游离末端氨基降解法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰与异硫氰 酸苯酯酸苯酯pitcpitc反应反应edmanedman 反应反应 ,生成苯氨基硫甲酰,生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中 加热时,加热时, nn末端的末端的 ptcptc氨基酸氨基酸发生环化,发生环化, 生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来, 除去除去nn末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法:氨肽酶法: 氨肽酶氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,是一类肽链外切酶或叫外肽酶, 能从多肽链的能从
49、多肽链的 n n 端逐个地向里切。端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量,根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量, 按反应按反应时间和残基释放量作动力时间和残基释放量作动力 学曲线,就能知道该蛋白质的学曲线,就能知道该蛋白质的 n n 端残基序端残基序列。列。2 2cc末端测定法:常采用肼解法、复原法、羧肽酶法。末端测定法:常采用肼解法、复原法、羧肽酶法。 肼解法:肼解法:蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解,反应中除蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解,反应中除 c c 端氨基酸以游离端氨基酸以游离形式存形式存 在外,其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。在
50、外,其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 复原复原法:法: 肽链肽链 c c 端氨基酸可用硼氢端氨基酸可用硼氢 2 2测得一种血红蛋白含铁测得一种血红蛋白含铁 0.426% 0.426%,计算其最低相对分子质量。一,计算其最低相对分子质量。一种纯酶按质量计算含种纯酶按质量计算含 亮氨酸亮氨酸 1.65% 1.65%和异亮氨酸和异亮氨酸 2.48% 2.48%,问其最低相对分子质量是多少?,问其最低相对分子质量是多少?因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等,所以亮氨酸和异亮氨因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等,所以亮氨酸和异亮氨酸的残基数之比为:酸的残基数之比为: 1.65%:2.48%
51、=2:3 1.65%:2.48%=2:3,因此,该酶分子中至少含,因此,该酶分子中至少含有有 2 2 个亮氨酸,个亮氨酸,3 3 个异亮氨酸。个异亮氨酸。 2 2 4 4何谓蛋白质的变性与沉淀?二者在本质上有何区别?何谓蛋白质的变性与沉淀?二者在本质上有何区别? 解答:蛋解答:蛋白质变性的概念:天然蛋白质受物理或化学因素的影响后,使其失白质变性的概念:天然蛋白质受物理或化学因素的影响后,使其失去原有的去原有的 生物活性,并伴随着物理化学性质的改变,这种作用称为生物活性,并伴随着物理化学性质的改变,这种作用称为蛋白质的变性。蛋白质的变性。 变性的本质:分子中各种次级键断裂,使其空间构变性的本质:
52、分子中各种次级键断裂,使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序象从紧密有序的状态变成松散无序 的状态,一级结构不破坏。的状态,一级结构不破坏。 蛋白蛋白质变性后的表现:质变性后的表现:生物学活性消失;生物学活性消失; 理化性质改变:溶解度下理化性质改变:溶解度下降,黏度增降,黏度增 加,紫外吸收增加,侧链反应增强,对酶的作用敏感,加,紫外吸收增加,侧链反应增强,对酶的作用敏感,易被水解。易被水解。 蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形成稳定蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中的胶体。如果在蛋白质溶液中 加入适当的试剂,加入适当的试剂, 破坏了蛋白质的
53、水破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷,膜或中和了蛋白质的电荷, 则蛋白质胶体溶液就不稳定则蛋白质胶体溶液就不稳定 而出现沉淀而出现沉淀现象。沉淀机理:破坏蛋白质现象。沉淀机理:破坏蛋白质【篇三:大学 生物化学思考题答案】化学研究的对象和内容是什么?化学研究的对象和内容是什么?解答:生物化学主要研究解答:生物化学主要研究: :1 1生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能;生物机体的化学组成、生物分子的结构、性质及功能;2 2生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化;生物分子分解与合成及反应过程中的能量变化;3 3生物遗传信息的储存、传递和表达;生物遗传信息的储存、传递和表达;4 4生
54、物体新陈代谢的调节与控制。生物体新陈代谢的调节与控制。 2 2你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。你已经学过的课程中哪些内容与生物化学有关。提示:生物化学是生命科学的基础学科,注意从不同的角度,去理提示:生物化学是生命科学的基础学科,注意从不同的角度,去理解并运用生物化学的知识。解并运用生物化学的知识。 3 3说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。说明生物分子的元素组成和分子组成有哪些相似的规侓。解答:生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、解答:生物大分子在元素组成上有相似的规侓性。碳、氢、氧、氮、磷、硫等磷、硫等 6 6 种是蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元
55、素。碳原子具种是蛋白质、核酸、糖和脂的主要组成元素。碳原子具有特殊的成键性质,即碳原子最外层的有特殊的成键性质,即碳原子最外层的 4 4 个电子可使碳与自身形成个电子可使碳与自身形成共价单键、共价双键和共价三键,碳还可与氮、氧和氢原子形成共共价单键、共价双键和共价三键,碳还可与氮、氧和氢原子形成共价键。碳与被键合原子形成价键。碳与被键合原子形成 4 4 个共价键的性质个共价键的性质, ,使得碳骨架可形成线使得碳骨架可形成线性、分支以及环状的多种多性的化合物。特殊的成键性质适应了生性、分支以及环状的多种多性的化合物。特殊的成键性质适应了生物大分子多样性的需要。氮、氧、硫、磷元素构成了生物物大分子
56、多样性的需要。氮、氧、硫、磷元素构成了生物分子碳骨架上的氨基分子碳骨架上的氨基nh2nh2、羟基、羟基ohoh、羰基、羰基c c、羧基、羧基coohcooh、巯基、巯基shsh、磷酸基、磷酸基po4po4 等功能基团。这些等功能基团。这些功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负功能基团因氮、硫和磷有着可变的氧化数及氮和氧有着较强的电负性而与生命物质的许多关键作用密切相关。性而与生命物质的许多关键作用密切相关。生物大分子在结构上也有着共同的规律性。生物大分子均由相同类生物大分子在结构上也有着共同的规律性。生物大分子均由相同类型的构件通过一定的共价键聚合成链状,其主链骨架呈现周期
57、性重型的构件通过一定的共价键聚合成链状,其主链骨架呈现周期性重复。构成蛋白质的构件是复。构成蛋白质的构件是 2020 种基本氨基酸。氨基酸之间通过肽键相种基本氨基酸。氨基酸之间通过肽键相连。肽链具有方向性连。肽链具有方向性n n 端端cc 端端, ,蛋白质主链骨架呈蛋白质主链骨架呈“ “肽单位肽单位” ”重复;重复;核酸的构件是核苷酸核酸的构件是核苷酸, ,核苷酸通过核苷酸通过 3, 53, 5- -磷酸二酯键相连,核酸链也磷酸二酯键相连,核酸链也具有方向性具有方向性(5(5、33 ), ),核酸的主链骨架呈核酸的主链骨架呈“ “磷酸磷酸- -核糖或脱氧核糖核糖或脱氧核糖” ”重复;构成脂质的
58、构件是甘油、脂肪酸和胆碱,其非极性烃长链也重复;构成脂质的构件是甘油、脂肪酸和胆碱,其非极性烃长链也是一种重复结构;构成多糖的构件是单糖,单糖间通过糖苷键相连,是一种重复结构;构成多糖的构件是单糖,单糖间通过糖苷键相连,淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。淀粉、纤维素、糖原的糖链骨架均呈葡萄糖基的重复。 2 2 蛋白质化学蛋白质化学 1 1用于测定蛋白质多肽链用于测定蛋白质多肽链 n n 端、端、c c 端的常用方法有哪些?基本原理端的常用方法有哪些?基本原理是什么?是什么?解答:解答:1 1 n- n-末端测定法:常采用末端测定法:常采用 2,42,4二硝基氟苯法、二硝基氟苯法、
59、edmanedman降解法、丹磺酰氯法。降解法、丹磺酰氯法。 2,42,4二硝基氟苯二硝基氟苯(dnfb(dnfb 或或 fdnb)fdnb)法:多肽法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与或蛋白质的游离末端氨基与 2,42,4二硝基氟苯二硝基氟苯2,4dnfb2,4dnfb反应反应sangersanger 反应,生成反应,生成 dnpdnp多肽或多肽或 dnpdnp蛋白质。由于蛋白质。由于 dnfbdnfb 与与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此dnpdnp多肽经酸水解后,多肽经酸水解后,只有只有 nn末端氨基酸为黄色末端氨基酸为黄色 dnpdnp氨基酸衍生
60、物,其余的都是游离氨氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。基酸。 丹磺酰氯丹磺酰氯(dns)(dns)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯dnscldnscl反应生成反应生成 dnsdns多肽或多肽或 dnsdns蛋白质。由于蛋白质。由于 dnsdns 与氨基与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此 dnsdns多肽经酸水解后,只多肽经酸水解后,只有有 nn末端氨基酸为强烈的荧光物质末端氨基酸为强烈的荧光物质 dnsdns氨基酸,其余的都是游离氨基酸,其余的都是游离氨基酸。氨基酸。 苯异硫氰酸脂苯异硫氰酸脂pitc
61、pitc 或或 edmanedman 降解法:多肽或蛋白质的游离降解法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯末端氨基与异硫氰酸苯酯pitcpitc反应反应edmanedman 反应,生成苯氨反应,生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时,基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时,nn末端的末端的ptcptc氨基酸发生环化,生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下氨基酸发生环化,生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,除去来,除去 nn末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。 氨肽酶法:氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链的氨肽酶法:氨
62、肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链的n n 端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量,按反应时间和残基释放量作动力学曲线,就能知道该蛋类和数量,按反应时间和残基释放量作动力学曲线,就能知道该蛋白质的白质的 n n 端残基序列。端残基序列。2 2cc末端测定法:常采用肼解法、复原法、羧肽酶法。末端测定法:常采用肼解法、复原法、羧肽酶法。肼解法:蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解,反应中除肼解法:蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解,反应中除 c c 端氨基端氨基酸以游离形式存酸以游离形式存 在外,其他氨基酸都转
63、变为相应的氨基酸酰肼化物。在外,其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。 羧肽酶法:是一类肽链外切酶,专一的从肽链的羧肽酶法:是一类肽链外切酶,专一的从肽链的 cc末端开始逐末端开始逐个降解,释放出游离的氨基酸。被释放的氨基酸数目与种类随反应个降解,释放出游离的氨基酸。被释放的氨基酸数目与种类随反应时间的而变化。根据释放的氨基酸量摩尔数与反应时间的关系,时间的而变化。根据释放的氨基酸量摩尔数与反应时间的关系,便可以知道该肽链的便可以知道该肽链的 cc末端氨基酸序列。末端氨基酸序列。 2 2测得一种血红蛋白含铁测得一种血红蛋白含铁 0.426%0.426%,计算其最低相对分子质量。一,计算其最低
64、相对分子质量。一种纯酶按质量计算含亮氨酸种纯酶按质量计算含亮氨酸 1.65%1.65%和异亮氨酸和异亮氨酸 2.48%2.48%,问其最低相,问其最低相对分子质量是多少?对分子质量是多少?解答:解答:1 1血红蛋白:血红蛋白:2 2酶:酶:因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等,所以亮氨酸和异亮氨因为亮氨酸和异亮氨酸的相对分子质量相等,所以亮氨酸和异亮氨酸的残基数之比为:酸的残基数之比为: 1.65%:2.48%=2:3 1.65%:2.48%=2:3,因此,该酶分子中至少含有,因此,该酶分子中至少含有 2 2 个亮氨酸,个亮氨酸,3 3 个个异亮氨酸。异亮氨酸。 3 3指出下面指出下面 ph
65、ph 条件下,各蛋白质在电场中向哪个方向移动,即正条件下,各蛋白质在电场中向哪个方向移动,即正极,负极,还是保持原点?极,负极,还是保持原点?1 1胃蛋白酶,在胃蛋白酶,在 ph 5.0ph 5.0;2 2血清清蛋白,在血清清蛋白,在 ph 6.0ph 6.0;解答:解答:1 1胃蛋白酶胃蛋白酶 pi 1.0pi 1.0环境环境 ph 5.0ph 5.0,带负电荷,向正极移动;,带负电荷,向正极移动;2 2血清清蛋白血清清蛋白 pi 4.9pi 4.9环境环境 ph 6.0ph 6.0,带负电荷,向正极移动;,带负电荷,向正极移动; 4 4何谓蛋白质的变性与沉淀?二者在本质上有何区别?何谓蛋白
66、质的变性与沉淀?二者在本质上有何区别?解答:蛋白质变性的概念:天然蛋白质受物理或化学因素的影响后,解答:蛋白质变性的概念:天然蛋白质受物理或化学因素的影响后,使其失去原有的生物活性,并伴随着物理化学性质的改变,这种作使其失去原有的生物活性,并伴随着物理化学性质的改变,这种作用称为蛋白质的变性。用称为蛋白质的变性。变性的本质:分子中各种次级键断裂,使其空间构象从紧密有序的变性的本质:分子中各种次级键断裂,使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态,一级结构不破坏。状态变成松散无序的状态,一级结构不破坏。蛋白质变性后的表现:蛋白质变性后的表现:? ?生物学活性消失;生物学活性消失;? ?理化性
67、质改变:溶理化性质改变:溶解度下降,黏度增加,紫外吸收增加,侧链反应增强,对酶的作用解度下降,黏度增加,紫外吸收增加,侧链反应增强,对酶的作用敏感,易被水解。敏感,易被水解。蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形成稳定的胶体。如蛋白质由于带有电荷和水膜,因此在水溶液中形成稳定的胶体。如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂,破坏了蛋白质的水膜或中和了果在蛋白质溶液中加入适当的试剂,破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷,则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀蛋白质的电荷,则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。沉淀机理:破坏蛋白质的水化膜,中和外表的净电荷。机理:破坏蛋白质的水化膜,中和外表
68、的净电荷。蛋白质的沉淀可以分为两类:蛋白质的沉淀可以分为两类:1 1可逆的沉淀:蛋白质的结构未发生显著的变化,除去引起沉淀可逆的沉淀:蛋白质的结构未发生显著的变化,除去引起沉淀的因素,蛋白质仍能溶于原来的溶剂中,并保持天然性质。如盐析的因素,蛋白质仍能溶于原来的溶剂中,并保持天然性质。如盐析或低温下的乙醇或丙酮短时间作用蛋白质。或低温下的乙醇或丙酮短时间作用蛋白质。2 2不可逆沉淀:蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质变性不可逆沉淀:蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质变性而沉淀,不再能溶于原溶剂。如加热引起蛋白质沉淀,与重金属或而沉淀,不再能溶于原溶剂。如加热引起蛋白质沉淀,与重金属或某
69、些酸类的反应都属于此类。某些酸类的反应都属于此类。蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在,并不析出。蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在,并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已经变性。已经变性。1 1测定小肽的氨基酸序列。测定小肽的氨基酸序列。2 2鉴定肽的氨基末端残基。鉴定肽的氨基末端残基。3 3不含二硫键的蛋白质的可逆变性。假设有二硫键存在时还需加不含二硫键的蛋白质的可逆变性。假设有二硫键存在时还需加什么试剂?什么试剂?4 4在芳香族氨基酸残基羧基侧水解肽键。在芳香族氨基酸残基羧
70、基侧水解肽键。5 5在甲硫氨酸残基羧基侧水解肽键。在甲硫氨酸残基羧基侧水解肽键。6 6在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。在赖氨酸和精氨酸残基侧水解肽键。解答:解答:1 1异硫氰酸苯酯;异硫氰酸苯酯;2 2丹黄酰氯;丹黄酰氯;3 3脲;脲;?-?-巯基乙醇巯基乙醇复原二硫键;复原二硫键;4 4胰凝乳蛋白酶;胰凝乳蛋白酶;5 5cnbrcnbr;6 6胰蛋白酶。胰蛋白酶。 6 6由以下信息求八肽的序列。由以下信息求八肽的序列。1 1酸水解得酸水解得 ala ala,argarg,leuleu,metmet,phephe,thrthr,2val2val。2 2sangersanger 试剂处理得试剂处
71、理得 dnp-aladnp-ala。3 3胰蛋白酶处理得胰蛋白酶处理得 alaala,argarg,thrthr 和和 leu leu,metmet,phephe,2val2val。当。当以以 sangersanger 试剂处理时分别得到试剂处理时分别得到 dnp-aladnp-ala 和和 dnp-valdnp-val。4 4溴化氰处理得溴化氰处理得 alaala,argarg,高丝氨酸内酯,高丝氨酸内酯,thrthr,2val2val,和,和 leuleu,phephe,当用,当用 sangersanger 试剂处理时,分别得试剂处理时,分别得 dnp-aladnp-ala 和和 dnp-
72、leudnp-leu。解答:由解答:由2 2推出推出 n n 末端为末端为 alaala;由;由3 3推出推出 valval 位于位于 n n 端第四,端第四,argarg 为第三,而为第三,而 thrthr 为第二;溴化氰裂解,得出为第二;溴化氰裂解,得出 n n 端第六位是端第六位是 metmet,由于第七位是由于第七位是 leuleu,所以,所以 phephe 为第八;由为第八;由4 4,第五为,第五为 valval。所以。所以八肽为:八肽为:ala-thr-arg-val-val-met-leu-pheala-thr-arg-val-val-met-leu-phe。 8 8当一种四肽与
73、当一种四肽与 fdnbfdnb 反应后,用反应后,用 5.7mol/lhcl5.7mol/lhcl 水解得到水解得到 dnp-valdnp-val及其他及其他 3 3 种氨基酸;当这四肽用胰蛋白酶水解时发现两种碎片段;种氨基酸;当这四肽用胰蛋白酶水解时发现两种碎片段;其中一片用其中一片用 libh4libh4下标复原后再进行酸水解,水解液内有氨基乙下标复原后再进行酸水解,水解液内有氨基乙醇和一种在浓硫酸条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物的氨醇和一种在浓硫酸条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物的氨基酸。试问这四肽的一级结构是由哪几种氨基酸组成的?基酸。试问这四肽的一级结构是由哪几种氨基酸组成的?解
74、答:解答:1 1四肽与四肽与 fdnbfdnb 反应后,用反应后,用 5.7mol/lhcl5.7mol/lhcl 水解得到水解得到 dnp-valdnp-val,证明证明 n n 端为端为 valval。2 2libh4libh4 复原后再水解,水解液中有氨基乙醇,证明肽的复原后再水解,水解液中有氨基乙醇,证明肽的 c c 端为端为glygly。3 3水解液中有在浓水解液中有在浓 h2so4h2so4 条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产条件下能与乙醛酸反应产生紫红色产物的氨基酸,说明此氨基酸为物的氨基酸,说明此氨基酸为 trptrp。说明。说明 c c 端为端为 glyglytrptrp4 4
75、根据胰蛋白酶的专一性,得知根据胰蛋白酶的专一性,得知 n n 端片段为端片段为 valvalargarglyslys,以以1 1、2 2、3 3结果可知道四肽的顺序:结果可知道四肽的顺序: n nvalvalargarglyslystrptrpglyglyc c。 9 9概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。解答:解答:1 1测定蛋白质中氨基酸组成。测定蛋白质中氨基酸组成。2 2蛋白质的蛋白质的 n n 端和端和 c c 端的测定。端的测定。3 3应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂,各自
76、得到一系列大小不同的肽段。断裂,各自得到一系列大小不同的肽段。4 4别离提纯所产生的肽,并测定出它们的序列。别离提纯所产生的肽,并测定出它们的序列。5 5从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排从有重叠结构的各个肽的序列中推断出蛋白质中全部氨基酸排列顺序。列顺序。如果蛋白质含有一条以上的肽链,则需先拆开成单个肽链再按上述如果蛋白质含有一条以上的肽链,则需先拆开成单个肽链再按上述原则确定其一级结构。如是含二硫键的蛋白质,也必须在测定其氨原则确定其一级结构。如是含二硫键的蛋白质,也必须在测定其氨基酸排列顺序前,拆开二硫键,使肽链分开,并确定二硫键的位置。基酸排列顺序前,拆开二硫键,使
77、肽链分开,并确定二硫键的位置。拆开二硫键可用过甲酸氧化,使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺酸。拆开二硫键可用过甲酸氧化,使胱氨酸部分氧化成两个半胱氨磺酸。3 3 核酸核酸 1 1 电泳别离四种核苷酸时,通常将缓冲液调到什么电泳别离四种核苷酸时,通常将缓冲液调到什么 phph?此时它?此时它们是向哪极移动?移动的快慢顺序如何们是向哪极移动?移动的快慢顺序如何? ? 将四种核苷酸吸附于阴将四种核苷酸吸附于阴离子交换柱上时,应将溶液调到什么离子交换柱上时,应将溶液调到什么 phph? 如果用逐渐降低如果用逐渐降低 phph 的的洗脱液对阴离子交换树脂上的四种核苷酸进行洗脱别离,其洗脱顺洗脱液对阴离子交换
78、树脂上的四种核苷酸进行洗脱别离,其洗脱顺序如何?为什么?序如何?为什么?解答:解答: 电泳别离电泳别离 4 4 种核苷酸时应取种核苷酸时应取 ph3.5ph3.5 的缓冲液,在该的缓冲液,在该 phph 时,时,这这 4 4 种单核苷酸之间所带负电荷差异较大,它们都向正极移动,但种单核苷酸之间所带负电荷差异较大,它们都向正极移动,但移动的速度不同,依次为:移动的速度不同,依次为:umpgmpampcmpumpgmpampcmp; 应取应取 ph8.0ph8.0,这,这样可使核苷酸带较多负电荷,利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然样可使核苷酸带较多负电荷,利于吸附于阴离子交换树脂柱。虽然ph 11.
79、4ph 11.4 时核苷酸带有更多的负电荷,但时核苷酸带有更多的负电荷,但 phph 过高对别离不利。过高对别离不利。 当当不考虑树脂的非极性吸附时,根据核苷酸负电荷的多少来决定洗脱不考虑树脂的非极性吸附时,根据核苷酸负电荷的多少来决定洗脱速度,则洗脱顺序为速度,则洗脱顺序为 cmpamp gmp umpcmpamp gmp ump,但实际上核苷酸和聚苯,但实际上核苷酸和聚苯乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附,嘌呤碱基的非极性吸乙烯阴离子交换树脂之间存在着非极性吸附,嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的附是嘧啶碱基的 3 3 倍。静电吸附与非极性吸附共同作用的结果使洗倍。静电吸附与非极性吸附共
80、同作用的结果使洗脱顺序为:脱顺序为:cmp amp ump gmpcmp amp ump gmp。 2 2为什么为什么 dnadna 不易被碱水解,而不易被碱水解,而 rnarna 容易被碱水解容易被碱水解? ?解答:因为解答:因为 rnarna 的核糖上有的核糖上有 2?-oh2?-oh 基,在碱作用下形成基,在碱作用下形成 2?,3?-2?,3?-环磷环磷酸酯,继续水解产生酸酯,继续水解产生 2?-2?-核苷酸和核苷酸和 3?-3?-核苷酸。核苷酸。dnadna 的脱氧核糖上无的脱氧核糖上无2?-oh2?-oh 基,不能形成碱水解的中间产物,故对碱有一定抗性。基,不能形成碱水解的中间产物,
81、故对碱有一定抗性。 3 3一个双螺旋一个双螺旋 dnadna 分子中有一条链的成分分子中有一条链的成分a = 0.30a = 0.30,g = 0.24g = 0.24, 请推测这一条链上的请推测这一条链上的tt和和cc的情况。的情况。 互补链的互补链的aa,gg,tt和和cc的情况。的情况。解答:解答: t + c = 1 t + c = 1 0.300.30 0.24 = 0.460.24 = 0.46; t = 0.30 t = 0.30,c = 0.24c = 0.24,a + g = 0.46a + g = 0.46。 4 4对双链对双链 dnadna 而言,而言, 假设一条链中假设
82、一条链中(a + g)/(t + c)= 0.7(a + g)/(t + c)= 0.7,则互补,则互补链中和整个链中和整个 dnadna 分子中分子中(a+g)/(t+c)(a+g)/(t+c)分别等于多少?分别等于多少? 假设一条链中假设一条链中(a + t)/(g + c)= 0.7(a + t)/(g + c)= 0.7,则互补链中和整个,则互补链中和整个 dnadna 分子中分子中(a + t)/(g + c)(a + t)/(g + c)分分别等于多少别等于多少 ? 8 8概述超螺旋概述超螺旋 dnadna 的生物学意义。的生物学意义。解答:解答: 超螺旋超螺旋 dnadna 比松
83、弛型比松弛型 dnadna 更紧密,使更紧密,使 dnadna 分子的体积更分子的体积更小,得以包装在细胞内;小,得以包装在细胞内; 超螺旋会影响双螺旋分子的解旋能力超螺旋会影响双螺旋分子的解旋能力, ,从从而影响到而影响到 dnadna 与其他分子之间的相互作用;与其他分子之间的相互作用; 超螺旋有利于超螺旋有利于 dnadna 的的转录、复制及表达调控。转录、复制及表达调控。 9 9为什么自然界的超螺旋为什么自然界的超螺旋 dnadna 多为负超螺旋?多为负超螺旋?解答:环状解答:环状 dnadna 自身双螺旋的过度旋转或旋转不足都会导致超螺旋,自身双螺旋的过度旋转或旋转不足都会导致超螺旋
84、,这是因为超螺旋将使分子能够释放由于自身旋转带来的应力。双螺这是因为超螺旋将使分子能够释放由于自身旋转带来的应力。双螺旋过度旋转导致正超螺旋,而旋转不足将导致负超螺旋。虽然两种旋过度旋转导致正超螺旋,而旋转不足将导致负超螺旋。虽然两种超螺旋都能释放应力,但是负超螺旋时,如果发生超螺旋都能释放应力,但是负超螺旋时,如果发生 dnadna 解链即氢解链即氢链断开,部分双螺旋分开就能进一步释放应力,而链断开,部分双螺旋分开就能进一步释放应力,而 dnadna 转录和复转录和复制需要解链。因此自然界环状制需要解链。因此自然界环状 dnadna 采取负超螺旋,这可以通过拓扑采取负超螺旋,这可以通过拓扑异
85、构酶的操作实现。异构酶的操作实现。 10 10真核生物基因组和原核生物基因组各有哪些特点真核生物基因组和原核生物基因组各有哪些特点? ?解答:解答: 不同点不同点: : 真核生物真核生物 dnadna 含量高,碱基对总数可达含量高,碱基对总数可达 10 1110 11,且与组蛋白稳定结合形成染色体,具有多个复制起点。原核生物且与组蛋白稳定结合形成染色体,具有多个复制起点。原核生物dnadna 含量低,不含组蛋白,称为类核体,只有一个复制起点。含量低,不含组蛋白,称为类核体,只有一个复制起点。 真真核生物有多个呈线形的染色体;原核生物只有一条环形染色体。核生物有多个呈线形的染色体;原核生物只有一
86、条环形染色体。真核生物真核生物 dnadna 中含有大量重复序列,原核生物细胞中无重复序列。中含有大量重复序列,原核生物细胞中无重复序列。 真核生物中为蛋白质编码的大多数基因都含有内含子真核生物中为蛋白质编码的大多数基因都含有内含子( (有断裂基因有断裂基因) );原核生物中不含内含子。原核生物中不含内含子。 真核生物的真核生物的 rnarna 是细胞核内合成的,它是细胞核内合成的,它必须运输穿过核膜到细胞质才能翻译,这样严格的空间间隔在原核必须运输穿过核膜到细胞质才能翻译,这样严格的空间间隔在原核生物内是不存在的。生物内是不存在的。 原核生物功能上密切相关的基因相互靠近,原核生物功能上密切相
87、关的基因相互靠近,形成一个转录单位,称操纵子,真核生物不存在操纵子。形成一个转录单位,称操纵子,真核生物不存在操纵子。 病毒基病毒基因组中普遍存在重叠基因,但近年发现这种情况在真核生物也不少因组中普遍存在重叠基因,但近年发现这种情况在真核生物也不少见。相同点见。相同点: :都是由相同种类的核苷酸构成的的双螺旋结构,均是遗都是由相同种类的核苷酸构成的的双螺旋结构,均是遗传信息的载体,均含有多个基因。传信息的载体,均含有多个基因。 11 11如何看待如何看待 rnarna 功能的多样性功能的多样性? ?它的核心作用是什么它的核心作用是什么? ?解答:解答:rnarna 的功能主要有的功能主要有:
88、: 控制蛋白质合成;控制蛋白质合成; 作用于作用于 rnarna 转录转录后加工与修饰;后加工与修饰; 参与细胞功能的调节;参与细胞功能的调节; 生物催化与其他细胞持生物催化与其他细胞持家功能;家功能;遗传信息的加工;遗传信息的加工;可能是生物进化时比蛋白质和可能是生物进化时比蛋白质和 dnadna更早出现的生物大分子。其核心作用是既可以作为信息分子又可以更早出现的生物大分子。其核心作用是既可以作为信息分子又可以作为功能分子发挥作用。作为功能分子发挥作用。 12 12什么是什么是 dnadna 变性?变性?dnadna 变性后理化性质有何变化?变性后理化性质有何变化?解答:解答:dnadna
89、双链转化成单链的过程称变性。引起双链转化成单链的过程称变性。引起 dnadna 变性的因素很变性的因素很多,如高温、超声波、强酸、强碱、有机溶剂和某些化学试剂如多,如高温、超声波、强酸、强碱、有机溶剂和某些化学试剂如尿素,酰胺尿素,酰胺) )等都能引起变性。等都能引起变性。 dna dna 变性后的理化性质变化主要有:变性后的理化性质变化主要有: 天然天然 dnadna 分子的双螺旋结构解链变成单链的无规则线团,生物学分子的双螺旋结构解链变成单链的无规则线团,生物学活性丧失;活性丧失; 天然的线型天然的线型 dnadna 分子直径与长度之比可达分子直径与长度之比可达 1 11010,其,其水溶
90、液具有很大的黏度。变性后,发生了螺旋水溶液具有很大的黏度。变性后,发生了螺旋- -线团转变,黏度显著线团转变,黏度显著降低;降低; 在氯化铯溶液中进行密度梯度离心,变性后的在氯化铯溶液中进行密度梯度离心,变性后的 dnadna 浮力密浮力密度大大增加,故沉降系数度大大增加,故沉降系数 s s 增加;增加; dna dna 变性后,碱基的有序堆积变性后,碱基的有序堆积被破坏,碱基被暴露出来,因此,紫外吸收值明显增加,产生所谓被破坏,碱基被暴露出来,因此,紫外吸收值明显增加,产生所谓增色效应。增色效应。 dna dna 分子具旋光性,旋光方向为右旋。由于分子具旋光性,旋光方向为右旋。由于 dnadna 分子分子的高度不对称性,因此旋光性很强,其的高度不对称性,因此旋光性很强,其a = 150a = 150。当。当 dnadna 分子变性分子变性时,比旋光值就大大下降。时,比旋光值就大大下降。 13 13哪些因素影响哪些因素影响 tmtm 值的大小?值的大小?解答:影响解答:影响 tmtm 的因素主要有:的因素主要有: g-c g-c 对含量。对含量。g-cg-c 对含对含 3 3 个氢键,个氢键,a-ta-t 对含对含 2 2 个氢键,故个氢键,故