《级硕士高级免疫学实验技术-概述课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《级硕士高级免疫学实验技术-概述课件（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、高级免疫学实验技术高级免疫学实验技术 2012级硕士研究生吉林大学白求恩医学院免疫学系袁红艳级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术-概述概述选用教材选用教材级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术-概述概述免疫学实验课要求免疫学实验课要求不许迟到、早退、缺课。不许迟到、早退、缺课。不允许擅自换教室。不允许擅自换教室。穿白大衣。穿白大衣。爱爱护护实实验验器器材材（使使用用后后用用水水冲冲洗洗，然然后后放放入指定地点），损坏者按价赔偿。入指定地点），损坏者按价赔偿。课后认真打扫教室卫生（擦地面和桌面）。课后认真打扫教室卫生（擦地面和桌面）。关掉手机或设置为振动状态。关掉手机或设置
2、为振动状态。级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述实验分组实验分组级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述实验操作内容安排实验操作内容安排1.1.淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验2.2.酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）3.3.免疫印迹试验免疫印迹试验(Western blot)(Western blot)4.4.巨噬细胞吞噬功能测定巨噬细胞吞噬功能测定 级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述1.1.1.1.免疫细胞的分离免疫细胞的分离免疫细胞的分离免疫细胞的分离2.2.2.2.淋巴细胞功能检测淋巴细
3、胞功能检测淋巴细胞功能检测淋巴细胞功能检测3.3.3.3.经典的抗原抗体反应经典的抗原抗体反应经典的抗原抗体反应经典的抗原抗体反应4.4.4.4.免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术免疫标记技术5.5.5.5.多克隆抗体的制备多克隆抗体的制备多克隆抗体的制备多克隆抗体的制备6.6.6.6.免疫分子生物学技术免疫分子生物学技术免疫分子生物学技术免疫分子生物学技术7.7.7.7.细胞因子的检测细胞因子的检测细胞因子的检测细胞因子的检测8.8.8.8.单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备自讲安排自讲安排级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述自讲评分
4、标准自讲评分标准评估细则评估细则评估细则评估细则分值分值分值分值积极参与，注重个性发挥积极参与，注重个性发挥积极参与，注重个性发挥积极参与，注重个性发挥2 2 2 2备课充分备课充分备课充分备课充分, , , ,具有简单讲稿或提纲具有简单讲稿或提纲具有简单讲稿或提纲具有简单讲稿或提纲4 4 4 4讲授内容准确、熟练、清楚讲授内容准确、熟练、清楚讲授内容准确、熟练、清楚讲授内容准确、熟练、清楚4 4 4 4板书板书板书板书( ( ( (或幻灯或幻灯或幻灯或幻灯) ) ) )工整、清晰工整、清晰工整、清晰工整、清晰2 2 2 2注重联系相关知识注重联系相关知识注重联系相关知识注重联系相关知识2 2
5、 2 2熟练运用专业词汇熟练运用专业词汇熟练运用专业词汇熟练运用专业词汇2 2 2 2形式多样，启发诱导形式多样，启发诱导形式多样，启发诱导形式多样，启发诱导2 2 2 2教态大方，语言文雅、生动教态大方，语言文雅、生动教态大方，语言文雅、生动教态大方，语言文雅、生动2 2 2 2总计总计总计总计20202020级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述考核方式考核方式级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述考核要求考核要求自讲自评（自讲自评（自讲自评（自讲自评（20202020分），每组成员合作准备资料和上讲台讲述，分），每组成员合作准备资料和上讲台
6、讲述，分），每组成员合作准备资料和上讲台讲述，分），每组成员合作准备资料和上讲台讲述，老师及其他组给评分，取平均成绩，老师及其他组给评分，取平均成绩，老师及其他组给评分，取平均成绩，老师及其他组给评分，取平均成绩，4 4 4 4人给相同的自讲成绩。人给相同的自讲成绩。人给相同的自讲成绩。人给相同的自讲成绩。综合考试（综合考试（综合考试（综合考试（40404040分），共四个大题，每题分），共四个大题，每题分），共四个大题，每题分），共四个大题，每题10101010分。（周五下午）分。（周五下午）分。（周五下午）分。（周五下午）出勤情况（出勤情况（出勤情况（出勤情况（10101010分），每分）
7、，每分），每分），每4 4 4 4学时学时学时学时1 1 1 1分。分。分。分。实验设计（实验设计（实验设计（实验设计（30303030分），应用免疫学相关实验方法，设计与自分），应用免疫学相关实验方法，设计与自分），应用免疫学相关实验方法，设计与自分），应用免疫学相关实验方法，设计与自己专业的课题。（己专业的课题。（己专业的课题。（己专业的课题。（12.2912.2912.2912.29之前上交，如能完成可在本周五上之前上交，如能完成可在本周五上之前上交，如能完成可在本周五上之前上交，如能完成可在本周五上交）交）交）交）谈谈你对本次免疫学实验教学的看法。包括谈谈你对本次免疫学实验教学的看法。
8、包括谈谈你对本次免疫学实验教学的看法。包括谈谈你对本次免疫学实验教学的看法。包括: : : :内容安排、备内容安排、备内容安排、备内容安排、备课情况、讲授情况等的优缺点、意见与建议。（最后一次课情况、讲授情况等的优缺点、意见与建议。（最后一次课情况、讲授情况等的优缺点、意见与建议。（最后一次课情况、讲授情况等的优缺点、意见与建议。（最后一次课当堂写。）课当堂写。）课当堂写。）课当堂写。）级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述实验设计实验设计应用免疫学相关实验方法，设计与自己专业的课题。应用免疫学相关实验方法，设计与自己专业的课题。应用免疫学相关实验方法，设计与自己专业的
9、课题。应用免疫学相关实验方法，设计与自己专业的课题。包括包括包括包括: : : :1 1 1 1）题目）题目）题目）题目2 2 2 2）研究内容）研究内容）研究内容）研究内容3 3 3 3）研究方案）研究方案）研究方案）研究方案4 4 4 4）创新点）创新点）创新点）创新点级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述实验设计的原则实验设计的原则研究的题目：确定研究题目是开展研究工作的首要任研究的题目：确定研究题目是开展研究工作的首要任研究的题目：确定研究题目是开展研究工作的首要任研究的题目：确定研究题目是开展研究工作的首要任务。务。务。务。研究摘要：研究背景，要开展的主要研究
10、（利用什么研究摘要：研究背景，要开展的主要研究（利用什么研究摘要：研究背景，要开展的主要研究（利用什么研究摘要：研究背景，要开展的主要研究（利用什么样的方法开展研究），研究意义（本次研究的预期成样的方法开展研究），研究意义（本次研究的预期成样的方法开展研究），研究意义（本次研究的预期成样的方法开展研究），研究意义（本次研究的预期成果及其推动科学进步的作用）。果及其推动科学进步的作用）。果及其推动科学进步的作用）。果及其推动科学进步的作用）。研究内容：叙述主要开展的工作。研究内容：叙述主要开展的工作。研究内容：叙述主要开展的工作。研究内容：叙述主要开展的工作。研究方案：利用什么样的手段去解决研究
11、内容提到的研究方案：利用什么样的手段去解决研究内容提到的研究方案：利用什么样的手段去解决研究内容提到的研究方案：利用什么样的手段去解决研究内容提到的相关工作。相关工作。相关工作。相关工作。研究的特色与创新之处：主要科学贡献。研究的特色与创新之处：主要科学贡献。研究的特色与创新之处：主要科学贡献。研究的特色与创新之处：主要科学贡献。级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述题目：题目：题目：题目：XXXXXXXX细胞因子诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究细胞因子诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究细胞因子诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究细胞因子诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制研
12、究摘要：肺癌是最常见的肿瘤之一。摘要：肺癌是最常见的肿瘤之一。摘要：肺癌是最常见的肿瘤之一。摘要：肺癌是最常见的肿瘤之一。XXXXXXXX与多种肿瘤的发生发与多种肿瘤的发生发与多种肿瘤的发生发与多种肿瘤的发生发展有关，但其在肺癌中的作用仍缺乏报道。本研究采用人展有关，但其在肺癌中的作用仍缺乏报道。本研究采用人展有关，但其在肺癌中的作用仍缺乏报道。本研究采用人展有关，但其在肺癌中的作用仍缺乏报道。本研究采用人肺癌细胞，利用流式细胞术分析肺癌细胞，利用流式细胞术分析肺癌细胞，利用流式细胞术分析肺癌细胞，利用流式细胞术分析XXXXXXXX诱导人肺癌细胞凋亡作诱导人肺癌细胞凋亡作诱导人肺癌细胞凋亡作诱
13、导人肺癌细胞凋亡作用，通过分析用，通过分析用，通过分析用，通过分析Caspase3,8,12Caspase3,8,12Caspase3,8,12Caspase3,8,12等确定等确定等确定等确定XXXXXXXX诱导肿瘤细胞凋亡诱导肿瘤细胞凋亡诱导肿瘤细胞凋亡诱导肿瘤细胞凋亡机制。本研究不仅可以进一步揭示机制。本研究不仅可以进一步揭示机制。本研究不仅可以进一步揭示机制。本研究不仅可以进一步揭示XXXXXXXX抗肿瘤作用机制，也抗肿瘤作用机制，也抗肿瘤作用机制，也抗肿瘤作用机制，也为寻找新的肺癌治疗方法提供研究基础。为寻找新的肺癌治疗方法提供研究基础。为寻找新的肺癌治疗方法提供研究基础。为寻找新的
14、肺癌治疗方法提供研究基础。实验设计的基本思路实验设计的基本思路级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述研究内容：研究内容：研究内容：研究内容：1 1 1 1）XXXXXXXX在人肺癌肿瘤细胞的表达分析，确定在人肺癌肿瘤细胞的表达分析，确定在人肺癌肿瘤细胞的表达分析，确定在人肺癌肿瘤细胞的表达分析，确定XXXXXXXX表达与肺肿瘤的关系。表达与肺肿瘤的关系。表达与肺肿瘤的关系。表达与肺肿瘤的关系。2 2 2 2）检测患者血清）检测患者血清）检测患者血清）检测患者血清XXXXXXXX水平，确定其水平，确定其水平，确定其水平，确定其辅助诊断肺癌的价值辅助诊断肺癌的价值辅助诊断肺
15、癌的价值辅助诊断肺癌的价值 研究方案：研究方案：研究方案：研究方案：1 1 1 1）采用肿瘤组织切片，通过免疫细胞化学染）采用肿瘤组织切片，通过免疫细胞化学染）采用肿瘤组织切片，通过免疫细胞化学染）采用肿瘤组织切片，通过免疫细胞化学染色观察色观察色观察色观察XXXXXXXX在人肺癌组织中的表达情况。在人肺癌组织中的表达情况。在人肺癌组织中的表达情况。在人肺癌组织中的表达情况。2 2 2 2）采用）采用）采用）采用ELISAELISAELISAELISA法检法检法检法检测血清测血清测血清测血清XXXXXXXX水平。水平。水平。水平。研究的特色与创新之处：本研究阐述了研究的特色与创新之处：本研究阐
16、述了研究的特色与创新之处：本研究阐述了研究的特色与创新之处：本研究阐述了XXXXXXXX与肺癌的关系，与肺癌的关系，与肺癌的关系，与肺癌的关系，并提出并提出并提出并提出XXXXXXXX可作为肺癌的血清学诊断标志物，研究发现可作为肺癌的血清学诊断标志物，研究发现可作为肺癌的血清学诊断标志物，研究发现可作为肺癌的血清学诊断标志物，研究发现XXXXXXXX可可可可以诱导肺癌细胞凋亡，并阐述了其作用机制。以诱导肺癌细胞凋亡，并阐述了其作用机制。以诱导肺癌细胞凋亡，并阐述了其作用机制。以诱导肺癌细胞凋亡，并阐述了其作用机制。实验设计的基本思路实验设计的基本思路级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验
17、技术- -概述概述免疫学实验技术概述免疫学实验技术概述级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述 小调查-对免疫学实验技术的了解对免疫学实验技术的了解目前你知道的免疫学实验技术有哪些？目前你知道的免疫学实验技术有哪些？这些免疫学实验技术的原理是什么？这些免疫学实验技术的原理是什么？这些技术有什么应用？这些技术有什么应用？级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述免疫学实验技术概述免疫学实验技术概述现代免疫现代免疫学技术学技术级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述免疫学技术的范畴免疫学技术的范畴1 1、对具有免疫活性物质的定性、定量
18、测定、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2 2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述免疫学检测技术的评价免疫学检测技术的评价一、评价标准一、评价标准SpecificitySpecificity（特异）（特异）SensitivitySensitivity（敏感）（敏感）SimplicitySimplicity（简便）（简便）SafetySafety（安全）（安全）SavingSaving（节约）（节约）二、特异性与敏感性的关系二、特异性与敏感性的关系特异性高、敏感性低特异性高、敏感性低敏感性高
19、、特异性低敏感性高、特异性低级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述免疫学实验技术概述免疫学实验技术概述抗原抗体反应抗原抗体反应淋巴细胞的检测技术淋巴细胞的检测技术细胞因子的检测技术细胞因子的检测技术免疫学常用的分子生物学技术免疫学常用的分子生物学技术级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述多克隆抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体基因工程抗体 前两者常用于实验研究，而后者用于前两者常用于实验研究，而后者用于临床治疗研究。临床治疗研究。抗体的应用抗体的应用级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述多克隆抗体是通过免疫动物
20、血清分离获得多克隆抗体是通过免疫动物血清分离获得n优点：优点：制备方法比较简单，价格低廉，制备所需时制备方法比较简单，价格低廉，制备所需时间短等间短等 在确定新基因编码蛋白研究方面，仍然是首在确定新基因编码蛋白研究方面，仍然是首选抗体类型。但由于多克隆抗体含有针对多个抗原选抗体类型。但由于多克隆抗体含有针对多个抗原表位的抗体成分，也可能包括抗原变性后暴露的新表位的抗体成分，也可能包括抗原变性后暴露的新抗原表位，因此，多克隆抗体在检测变性抗原抗原表位，因此，多克隆抗体在检测变性抗原如采用如采用Western BlotWestern Blot检测蛋白时，其效果比单克隆检测蛋白时，其效果比单克隆抗体
21、更敏感。抗体更敏感。多克隆抗体多克隆抗体级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述n缺点：缺点：纯度差纯度差易发生交叉反应易发生交叉反应来源有限来源有限所产生的抗体因动物个体差异滴度不同所产生的抗体因动物个体差异滴度不同不易标准化不易标准化 因免疫动物血清中含有非常复杂的多种蛋因免疫动物血清中含有非常复杂的多种蛋白质成分，所以在进行实验室分析、检测之前，必白质成分，所以在进行实验室分析、检测之前，必须将其有效的抗体成分分离、纯化。须将其有效的抗体成分分离、纯化。多克隆抗体多克隆抗体级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述单克隆抗体单克隆抗体(mAb)(
22、mAb)是通过是通过B B细胞杂交瘤获得细胞杂交瘤获得n与多克隆抗体相比，单克隆抗体主要具有以下三个与多克隆抗体相比，单克隆抗体主要具有以下三个显著特点（优点）：显著特点（优点）： 高度均质性高度均质性高度特异性高度特异性来源稳定来源稳定n不足：不足：制备方法比较复杂，价格昂贵，制备所需时间较长。制备方法比较复杂，价格昂贵，制备所需时间较长。单克隆抗体单克隆抗体级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述mAbmAb是由起始于一个是由起始于一个B B淋巴细胞的单克隆细淋巴细胞的单克隆细胞系所分泌的，因此是一种每个抗体分子胞系所分泌的，因此是一种每个抗体分子的结构的结构( (包
23、括氨基酸排列顺序和空间构型包括氨基酸排列顺序和空间构型) )都相同的均质性抗体。都相同的均质性抗体。高度均质性高度均质性级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述mAbmAb只专一的识别抗原分子上单个抗原位点，因此只专一的识别抗原分子上单个抗原位点，因此容易获得特异性抗体，较少产生交叉反应。容易获得特异性抗体，较少产生交叉反应。高度特异性高度特异性级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述可大量生产，当得到稳定分泌可大量生产，当得到稳定分泌mAbmAb的杂交瘤细胞系的杂交瘤细胞系后，可置液氮中长期保存，需要时取出复苏，既后，可置液氮中长期保存，需要时取出
24、复苏，既可在体外培养中收获可在体外培养中收获mAbmAb，也可将杂交瘤细胞接种，也可将杂交瘤细胞接种入同系小鼠腹腔内，然后从荷瘤小鼠的腹水中收入同系小鼠腹腔内，然后从荷瘤小鼠的腹水中收获大量获大量mAbmAb。来源稳定来源稳定级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述u根据实验的目的不同，其分离、纯化的纯度要求根据实验的目的不同，其分离、纯化的纯度要求也不同。也不同。作为作为ELISAELISA检测时的抗体，部分情况下饱和硫酸胺检测时的抗体，部分情况下饱和硫酸胺纯化即可；纯化即可；最常使用的抗体是经过最常使用的抗体是经过A A蛋白蛋白(Protein A)(Protein
25、A)亲和层亲和层析获得的析获得的IgGIgG型抗体；型抗体；免疫放射测定的标记用抗体必须达到双级纯才可免疫放射测定的标记用抗体必须达到双级纯才可应用应用( (亲和层析纯亲和层析纯+SDS+SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳纯聚丙烯酰胺凝胶电泳纯) )。纯度要求纯度要求级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述u单克隆抗体在制备过程中经过严格的筛选，因此应单克隆抗体在制备过程中经过严格的筛选，因此应根据不同的应用目的选择不同单克隆抗体亚类，如根据不同的应用目的选择不同单克隆抗体亚类，如标明供标明供ELISAELISA检测用的单克隆抗体，可能不适合检测用的单克隆抗体，可能不适合Weste
26、rn BlotWestern Blot检测。检测。u作为初学者尤其应该注意各类单克隆抗体标明的应作为初学者尤其应该注意各类单克隆抗体标明的应用范围，而多克隆抗体一般情况下均有较宽的适用用范围，而多克隆抗体一般情况下均有较宽的适用范围。范围。适用范围适用范围级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述一抗和二抗一抗和二抗一级抗体：抗原特异性的抗体一级抗体：抗原特异性的抗体一级抗体：抗原特异性的抗体一级抗体：抗原特异性的抗体二级抗体：抗抗体（针对一抗的二级抗体：抗抗体（针对一抗的二级抗体：抗抗体（针对一抗的二级抗体：抗抗体（针对一抗的FcFcFcFc段，具有种属段，具有种属段，具
27、有种属段，具有种属特异性）特异性）特异性）特异性） AgAg级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述沉淀反应沉淀反应凝集反应凝集反应免疫标记技术免疫标记技术抗原抗体反应抗原抗体反应级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述 淋巴细胞的检测技术淋巴细胞的检测技术淋巴细胞的分离淋巴细胞的分离淋巴细胞的功能测定技术淋巴细胞的功能测定技术级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述细胞因子的检测技术细胞因子的检测技术生物活性检测生物活性检测免疫学检测免疫学检测分子杂交分子杂交PCRPCR检测检测级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述免疫学常用的分子生物学技术免疫学常用的分子生物学技术免疫印迹技术免疫印迹技术免疫免疫PCRPCR免疫沉淀免疫沉淀级硕士高级免疫学实验技术级硕士高级免疫学实验技术- -概述概述
