《血红蛋白的提取和分离人教版选修一ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血红蛋白的提取和分离人教版选修一ppt课件（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、课题 3 血红蛋白的提取和分别关于血红蛋白的提取和分别的根底知识1凝胶色谱法分配色谱法相对分子质量的大小凝 胶 色 谱 法 也 称 作 _ ， 是 根 据_分别蛋白质的有效方法。2缓冲溶液酸碱12 种缓冲剂水运用比例(1) 缓冲溶 液的作用： 在一定范围 内可以抵御 _ 和_对溶液 pH 值的影响。(2) 配制：缓冲溶液通常由 _溶解于_中配制而成的。调理缓冲剂的_就可以得到不同 pH 值范围内的缓冲液。3电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(1) 概 念： 电泳是指 _ 在 电场 的作 用下 发生 的_过程。带电粒子迁移(2) 两 种 常 用 的 电 泳 方 法 是 _ 和_，在测定蛋白质分
2、子量时通常运用_。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带_的多少以及_等因素。净电荷分子的大小SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳血红蛋白的提取和分别的实验1流程：蛋白质的提取和分别普通分为四步：_、粗分别、_和纯度鉴定。纯化2样品处置：(1)红细胞的洗涤：目的是_，以利于后续步骤分别纯化。去除杂蛋白甲苯血红蛋白的水溶液(2)血红蛋白的释放：在蒸馏水和_的作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。(3)分别血红蛋白溶液：将混合液离心后，试管中的溶液分为 4 层，第 3 层是红色透明液体，这是_。样品处置3粗分别：透析可以去除样品中_的杂质，或用于改换样品的_。4纯化：凝胶色谱操作。分子量较小缓冲液分别的种类
3、相对分子质量直径大小运动方式运动速度运动路程洗脱次序大分子物质大大于凝胶颗粒空隙，分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间垂直向下的运动较快 较短先小分子物质小小于凝胶颗粒空隙，分子可以进入凝胶颗粒内部垂直向下的运动，无规那么的分散运动较慢 较长后凝胶色谱法分别蛋白质的原理比较工程DNA 的粗提取与鉴定血红蛋白的提取与分别资料选择鸡血细胞等含 DNA 丰富的生物组织哺乳动物成熟的红细胞破碎细胞的方式动物细胞：吸水涨破；植物细胞：洗涤剂、食盐搅拌研磨等加蒸馏水和甲苯搅拌去除杂质的方式用不同浓度的 NaCl 溶液处置；用酒精处置；用蛋白酶处置等透析处置；纯化处置鉴定方式二苯胺；沸水浴SDS聚丙
4、烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量DNA 与血红蛋白的提取和分别的实验过程比较血红蛋白的提取与分别【例 1】选用哺乳动物红细胞作分别蛋白质的实验资料，有何益处()A红细胞无细胞核B红细胞无细胞膜C红细胞蛋白质含量高D红细胞 DNA 含量高【名师点拨】：哺乳动物的红细胞没有细胞核，提取时杂质较少，能得到更纯真的血红蛋白。【答案】：A【配对练习 1】洗涤红细胞时，分别所用方法为()A低速长时间离心B低速短时间离心C高速长时间离心D高速短时间离心解析：洗涤红细胞时，分别所用方法为低速短时间离心。答案：B用疑胶色谱法分别蛋白质【例 2】用凝胶色谱法分别蛋白质时，分子量大的蛋白质()A路程较长，挪
5、动速度较慢B路程较长，挪动速度较快C路程较短，挪动速度较慢D路程较短，挪动速度较快【名师点拨】：在凝胶小球体内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质经过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，挪动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部挪动，路程较短，挪动速度较快。【答案】：D【配对练习 2】凝胶色谱柱分别法分别蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是()A改动蛋白质分子经过凝胶时的途径B吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的挪动速度C将酶或细胞固定在凝胶中D与蛋白质分子进展化学反响，从而影响其挪动速度解析：凝胶的种类较多
6、，但每一种凝胶内部都有空隙，相对分子质量不同的蛋白质经过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质经过的途径比相对分子质量较大的蛋白质经过的途径要长，由此相对分子质量不同的蛋白质得以分别。答案：A聚丙烯酰胺凝胶电泳法【例 3】用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分别和提取血清蛋白的实验操作中，错误的选项是()A点样时将样品小心加到电泳样品槽的胶面上B电泳时，将稳压稳流电泳仪的电流稳定在 10 mAC染色时用 0.05%考马斯亮蓝 R250 染色液D脱色用 7%乙酸浸泡漂洗数次，直至蓝色背景褪去【名师点拨】：用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分别和提取蛋白质的实验操作顺序为点样电泳染色脱色制干胶板。点样用微量注射器取 0.5 L 样品小心地将样品加在样品槽的胶面上。电泳时翻开电泳仪开关，电流调在 10 mA，待样品进入分离胶时将电流调至 2030 mA。溴酚蓝到达分别胶底部上方约1 cm 处，封锁电源。【答案】：B【配对练习 3】SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法参与 SDS 的作用是()A增大蛋白质的相对分子质量B改动蛋白质的外形C掩盖不同种蛋白质的电荷差别D减少蛋白质的相对分子量解析：SDS 可以消除净电荷对迁移率的影响。答案：C
