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1、DNADNA多聚酶链式反应扩增多聚酶链式反应扩增DNADNA片断片断课题2局砾突凌渊柄音匠帝点昂山醇客窄颁凸起刑沽密贮丧震可侄矮醛摘咽渣殃52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA1 1、多聚酶链式反应的概念、多聚酶链式反应的概念一一 、课题背景、课题背景2 2、多聚酶链式反应的应用：、多聚酶链式反应的应用： 的诊的诊断、断、 、 、 和和DNADNA 等各方面。等各方面。遗传疾病遗传疾病刑侦破案刑侦破案 古生物学古生物学基因克隆基因克隆序列测定序列测定批校恃烟礼偷烃搽鬼钧仗嘲状腹蒜守仅蟹季搬传付拧猎险炮啡台疫笔恢襄52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA1 1、
2、DNADNA分子的组成成分和结构分子的组成成分和结构DNA DNA 分子的基本组成单位是分子的基本组成单位是 . .共有共有 种种, ,每个基本单位是由一分每个基本单位是由一分子的子的 、一分子的、一分子的 、和一分子的、和一分子的 构成。构成。脱氧核甘酸脱氧核甘酸4 4磷酸磷酸碱基碱基脱氧核糖脱氧核糖那么那么DNADNA分子的平面结构怎分子的平面结构怎样呢？样呢？二二 、基础知识、基础知识麦椿锦到遁春功机皿蒸战礁宰米孕窗链块搐漏靛橇番竭跟栖臣赴篷鹃涝窟52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA2 2、DNADNA分子复制的分子复制的过程过程参与的组分参与的组分在在DNADNA复
3、制中的作用复制中的作用解旋酶解旋酶打开打开DNADNA双链双链DNADNA母链母链提供提供DNADNA复制的模板复制的模板4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸合成子链的原料合成子链的原料DNADNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成DNADNA子链子链引物引物使使DNADNA聚合酶能够从引物的聚合酶能够从引物的3 3 端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸怖纲嘉窟侩该嫁失居残蛾誊赏凿伸烈斜跃芽啮奔业愿霞凌趁涌燃勺诛青弊52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA解旋酶解旋酶DNADNA母链母链4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合酶引物引物（ RNA）打开打开DNADNA双链双
4、链模板模板合成子链原料合成子链原料催化子链合成催化子链合成使使DNADNA聚合酶能从引聚合酶能从引物物3 3端开始连接端开始连接脱氧核苷酸脱氧核苷酸 思考：思考：3 3、体内体内DNADNA复制的条件复制的条件是什么是什么？ 体外扩增体外扩增DNA DNA 如何提供相似环境？如何提供相似环境？ 变性变性（ 80-100 ）TaqTaq聚合酶（耐高温）聚合酶（耐高温）20203030个核苷酸构个核苷酸构成成DNADNA或或RNARNA盛盟滚所桐危忙兔富窗朝囤簇癌琢坊衫佰舆妹食悔痰国寨衬裙敌洋捷在漳52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNADNA双链双链单链单链变性（加热变性（加热8
5、0-100 ）复性（缓慢冷却）复性（缓慢冷却）4 4、DNA DNA 分子的热变性原理：分子的热变性原理：变性的目的：变性的目的：复性的目的：复性的目的：解开双链解开双链有利于引物有利于引物和引物和引物与两条单链与两条单链的结合的结合酉慨豹谜乡悯抑怎溅娥喉誓费稀今娄辊檀血灶试球胃苫质火陋川选忠纪给52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（一）（一） 、PCRPCR技术的原理技术的原理利用利用DNADNA分子的分子的热变性热变性原理，通过控制原理，通过控制温度温度来来控制双链的控制双链的解聚解聚与与结合，结合，从而完成从而完成体外体外DANDAN分分子的扩增子的扩增。体外体外DN
6、ADNA复制的条件：复制的条件： 四种脱氧核苷酸、四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、耐高温的聚合酶、引物、 模板；缓冲溶液和模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。严格控制温度的温控设备。复制的方向：复制的方向：子链的子链的5 5端向端向 3 3端延伸。端延伸。皇庶意卜道蜂鸽萨有滨期犬宪款的貌监蔷寝粱喀态云谣浚深量具研返挤撮52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（一）、（一）、PCRPCR技术原理技术原理PCRPCR参与的组分参与的组分在在DNADNA复制中的作用复制中的作用高温变性高温变性解旋酶解旋酶打开打开DNADNA双链双链DNADNA母链母链提供提供DNADNA复
7、制的模板复制的模板4 4种脱氧核种脱氧核苷酸苷酸合成子链的原料合成子链的原料TaqTaq酶（耐高温）酶（耐高温）DNADNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成DNADNA子链子链20-3020-30个核苷酸构个核苷酸构成成DNADNA或或RNARNA单链单链引物引物使使DNADNA聚合酶能够从聚合酶能够从引物的引物的3 3端开始连端开始连接脱氧核苷酸接脱氧核苷酸踞骗土工鞍麦瘴团僳惑艇晌欺斯踞侥汉业溯农膜炬义井易蝶刊壹钵片庶死52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（二）、（二）、PCRPCR的反应过程的反应过程每个循环包括：每个循环包括：变性变性 复性复性延伸延伸 从第二轮循环开始，
8、上一次循环的从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且产物也可以作为模板参与反应，并且由由引物引物延伸而成的延伸而成的DNADNA单链会与引物单链会与引物结合，进行结合，进行DNADNA的延伸，的延伸，这样，这样，DNADNA聚合聚合酶只能特异性地复制酶只能特异性地复制处于两个引物之间处于两个引物之间的的DNADNA序列序列，使这段固定长度的序列，使这段固定长度的序列呈呈指数扩增指数扩增。妖吭附蕉宠男晕概卫莲袜威槛茅麓汁著基捉雪似歪序温混笼玄隘蛊够懈悟52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNADNADNA双链反向平行双链反向平行3553波礁郊连性痉雇刘寐狙枯韵
9、谍氟垒吗合柳奏佐砒怕柜噶琳察显啡娥绰赐贪52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA1 1、DNADNA分子的分子的3 3 端与端与5 5 端端-OH-OH端为端为3 3 ; ; 磷酸基团的末端为磷酸基团的末端为5 5。2 2、DNADNA分子由两条分子由两条反向平行反向平行的脱氧核苷酸的脱氧核苷酸链根据链根据碱基互补配对原则碱基互补配对原则形成形成氢键氢键连接而连接而成。成。吓琵富克美览咋飞董羞吸禁袁速舱菏审尤奸二俐猛漆贡疙瘁联搭沧波顷盔52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA基本单位基本单位趋逛加阑炮富羔地瘫脐爸疵想观步扼掂无觅互谰汤式龟答贾改廷畜匝魂狗52多聚
10、酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNAATGCATGC3355匆租毖澡咳资痴夯勿篷禽层迹萎熔薛改轰游荐山撩棋假穷枪竹撬鹿痢烷惰52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA实验操作步骤：实验操作步骤：（准备）（准备）按配方将所需试剂摆放在实验桌上按配方将所需试剂摆放在实验桌上（移液）（移液）用用微量移液器微量移液器按配方在微量离心管按配方在微量离心管中依次加入各组分中依次加入各组分（混合）（混合）盖严盖严离心管离心管口的盖子，用手指轻轻口的盖子，用手指轻轻弹击管壁弹击管壁（离心）（离心）将微量离心管放在将微量离心管放在离心机离心机上上（反应）（反应）将离心管放入将离心管放入
11、PCRPCR仪仪上，设置好上，设置好PCRPCR仪的循环程序仪的循环程序 穴绒尚甩膊踞挑瑞涸狸拍砖乐钝橙猎劲躁淬牧萤映邪瓢落耀契纤囱功涧洲52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA反应周期高温变性高温变性低温复性低温复性(退火退火)适温延伸适温延伸反应循环数：扩增倍数：109以上以上30多次多次留摇械荡卖柱左浙患律昭舌付挝宅炊凿汉强雄怕泰伍狭女唉糜主撼献赁毫52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA以便增加大分子模板以便增加大分子模板DNADNA彻底变性彻底变性的概率的概率（二）、（二）、PCR的反应过程的反应过程1 1、循环之前的一次预变性、循环之前的一次预变性2
12、 2、PCR PCR 一般要经历一般要经历三十多三十多次循环次循环巍侩舵夹羚刨拙婶侠莎焕镰枕各枣傻唆戮洗惊细掩勒饯醒奋克疑乒伊那轻52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA5/3/GGTC3/5/GACC5/3/AG引物引物5/3/GG引物引物变性变性复性复性延伸延伸复制过程复制过程戊解纂驮宝铀藐还剥堵凭咨顾素盟组捶痢洋汾捉承袄挚果猜在乘畜掠懂沧52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA5/3/GGTC5/3/GGTC5/3/GA引物引物5/3/GA引物引物5/3/GG引物引物5/3/GA引物引物3/ 郴谗盛焊俺绪操亦石竖宗娄靳赘市使粒智蔚弹素容殊锐肩磅拎仁孝清啊窍
13、52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA3/5/GACC3/5/GACC5/3/GG引物引物5/3/GG引物引物5/3/GG引物引物3/5/3/GA引物引物耪盲人铀靶浩憋枯疆挣溺宴酪氰善滇转倡钢跪艺峪赖奎腮框册诅玩嫂耶雄52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（1 1）变性：当温度上升到变性：当温度上升到90 90 以上时，以上时，双链双链DNADNA解聚为单链。解聚为单链。（2 2）复性：温度下降到）复性：温度下降到50 50 左右，两种左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链引物通过碱基互补配对与两条单链DNADNA结合。结合。（3 3）延伸：温度上升到）延
14、伸：温度上升到7272左右，溶液中左右，溶液中的的四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸(A(A，T T，C C，G)G)在在DNADNA聚合聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的新的DNADNA链。链。（二）、（二）、PCRPCR的反应过程的反应过程3 3、每个循环包括、每个循环包括：变性变性 复性复性延伸延伸蠢元揖醋衷荆妙棠貌磁啤卸保鸵荆桥石抹煞断蕾损愁真磐依汲氮尼拆亲给52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（1）PCR循环循环-变性变性9595变性变性贮纠捷头摆柞近档场罪斗程捌弃房燥跨荧纶吏蛙坚覆斡棚沃抢五吁鉴酬册52多聚酶链式反应扩增D
15、NA52多聚酶链式反应扩增DNA（1）PCR循环循环-变性变性9595变性变性水曝常瓮仟兑张癸桑览屏攻织刚晃喧栖拽缺烈郴淄犯行赏沪垮绰匝腮谐藩52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（1）PCR循环循环-变性变性9595变性变性淮旨勘杆企杭炬忆句皂锋骑能丢蒲腆臭更恍赐猴眯骂庄婶签幻哉涩翔艾应52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（2）PCR循环循环复性复性5555复性复性杜竿捧琉壬坡功库伞锣折清宗桨塘庐丈涧纫社骆民杏甲桐础实涤型敏坪春52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（3）PCR循环循环延伸延伸秩理探搏库覆靛允界儡柑洛浑寒辨凡却优滴沂阿赛
16、柞卡皮彭椅毙锗镍摈草52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（3）PCR循环循环延伸延伸膜气岩捡狱却研土啦恰纺浆杜了著扩铸蔓舅梗袜泽绎适毡酿溅镰趟嗡瞅喳52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（3）PCR循环循环延伸延伸蒲候辫助罩貉滤豪汀年乐熙爬壶穗镇消悸请啦钢予哮朔肥台精啤温姐氓函52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA（3）PCR循环循环延伸延伸汕臀吊矽染秋省促剩透瞅倪澜堑骡睡兼的烦臣岁楼配界瑰餐饥查缨拆加脉52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA4 4、循环特点：、循环特点：上一次循环的产物为下一循环的模板上一次循环的产物为
17、下一循环的模板 结果单链中有最初母链的只两条（无引物结果单链中有最初母链的只两条（无引物存在于两个子代存在于两个子代DNADNA分子中分子中 其它子代其它子代DNADNA分子都为双引物分子式分子都为双引物分子式 处于两引物之间的处于两引物之间的DNADNA序列呈指数增长序列呈指数增长1 12 2N N扇镍渔捞丈平刻碘逐宙傻呀拭矛锤桩贾阔菲倚钾朋灵臼漳宜棋呵堑貉夯洁52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA三、实验步骤：三、实验步骤：准备准备好好PCRPCR反应体系的配方反应体系的配方用微量用微量移液器移液器按配方在往微量离按配方在往微量离心管中加入各组分心管中加入各组分盖严盖子，
18、用手指轻轻弹击盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁管壁混合混合反应液反应液离心离心10S10S将离心管放入将离心管放入PCRPCR仪上，设置好仪上，设置好循环程序进行循环程序进行反应反应昌衰堕雌组归民慷友抗伦籽围炬栓儡戎镭装吧算誊牙酱佛法楷挛桩猾烂条52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA四、操作提示：四、操作提示： 操作提示操作提示 1 1为避免外源为避免外源DNADNA等因素的污染，等因素的污染，PCRPCR实验中实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行在使用前必须进行高压灭菌高压灭菌。 2 2PCRPCR所用的缓冲
19、液和酶应所用的缓冲液和酶应分装成小份分装成小份，并，并在在-20-20储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在放在冰块上缓慢融化冰块上缓慢融化。 3 3在微量离心管中添加反应成分时，每吸取在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换枪头都必须更换。所有。所有的成分都加入后，盖严离心管口的盖子，的成分都加入后，盖严离心管口的盖子，用手指用手指轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀，再将微，再将微量离心管放在离心机上，离心约量离心管放在离心机上，离心约10s10s，使反应液，使反应液
20、集中在离心管底部，再放入集中在离心管底部，再放入PCRPCR仪中进行反应。仪中进行反应。目的：目的：避免外源性避免外源性DNA大量扩增造成假阳性反应。大量扩增造成假阳性反应。燎钻雹弥资昆墅阴驻锋坑侵肌劈德攻候沥卧厉咏锚即挖韭诺迟减焉模醚累52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA五、结果分析与评价五、结果分析与评价1 1、原理：、原理：DNADNA在在260nm260nm的紫外线波段有的紫外线波段有一强烈的吸收峰一强烈的吸收峰( (图图5-11)5-11)。可以利用。可以利用DNADNA的这一特点进行的这一特点进行DNADNA含量的测定。含量的测定。该响捻瞪珊舀参邯忽汝眩洲圃噶泵
21、谅玉愈励吃供穷偷牙非巫攒喜拉过汝亢52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA注意事项：详见操作提示注意事项：详见操作提示 五、结果分析与评价五、结果分析与评价DNA 含量的测定：稀释含量的测定：稀释对照调零对照调零测定测定计算（公式见计算（公式见P63）波长波长260nm260nm处处读数读数蒸馏水蒸馏水做对照做对照5050倍倍累恩蚂逛狞奇颐松摊岂涌刮橱阮吁袄绊付飞团人迫棋熔吗抗旭皑踞杏溉掩52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA实验结果与分析实验结果与分析DNADNA含量含量(ug/mI)=50 (ug/mI)=50 （260nm260nm的读数）的读数） 稀释
22、倍数稀释倍数湘焙蔬碟妙幼杏允律蛛肠兔卫芭哦敷陈饥脱笋哀沁赡村郝担掏瑰稗目舒粮52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA六、课题延伸六、课题延伸1 1、PCRPCR优点：优点：2 2、PCRPCR技术的应用技术的应用P58P58原理虽然复杂，但操作却十分简单。快原理虽然复杂，但操作却十分简单。快速、高效、灵活和易于操作速、高效、灵活和易于操作 严反墙死笑棋镰粤舔盾锐路测藕双帐司锥佰腕倘勿肠突铬烘辱数丙鄂稳射52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNAPCRPCR技术与体内技术与体内DNADNA复制的区别：复制的区别： 1. PCR 1. PCR不需要解旋酶；体内不需要解
23、旋酶；体内DNADNA复制复制需要；需要； 2. PCR 2. PCR需要耐热的需要耐热的DNADNA聚合酶（常用聚合酶（常用TaqDNATaqDNA聚合酶），而其他生物体内的聚聚合酶），而其他生物体内的聚合酶在高温时会变性；合酶在高温时会变性； 3. PCR 3. PCR一般要经历三十多次循环，而一般要经历三十多次循环，而生物体内生物体内DNADNA复制需要生物体自身的复复制需要生物体自身的复制制。 侄挺堤杭腊菏晤月稽茎溺寞挟蚁却凡生驴滓摸签逸日荚翁苟标炒套哈辱顺52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA练习练习 ( (课堂检测课堂检测) )1 1、DNADNA单链的单链的_末
24、端为末端为3 3端端, , _末端为末端为5 5端端, ,在在DNADNA复制时复制时, ,引引物从模板链的物从模板链的_端配对结合端配对结合. .在在_酶的作用下酶的作用下, ,从引物的从引物的_端端, ,使子链向下延伸使子链向下延伸. .2 2每次循环可以分为每次循环可以分为_这三个过程这三个过程, ,对应温度分别为对应温度分别为_._.磷酸基团磷酸基团羟基羟基羟基羟基DNA聚合聚合3/变性、复性、延伸变性、复性、延伸9595、55 55 、72 72 9090以上、以上、5050左右左右 、72 72 左右左右传爆多缉导圆促二止搽汛轩省乏嘛椿悉忘臂涤潜壤淹邮携招抉姻哗炉酶燃52多聚酶链式
25、反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA练习练习 ( (教材教材P63)P63)1 1、一个、一个DNADNA片段经过片段经过3030次循环后能形次循环后能形成成_个这样的片段个这样的片段. .2 2、依据、依据DNADNA吸收紫外光的情况吸收紫外光的情况, ,用紫外用紫外分光光度计测得分光光度计测得DNA=_DNA=_230l50 x(260nm50 x(260nm的读数的读数)x)x稀释倍数稀释倍数奋困硬挚笛皋窍床存壕淤憎俄所饵笨凭党岔期粉抉傻检坠辩准孔涛驭模动52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA练习巩固练习巩固1 1、关于、关于PCRPCR技术的应用，错误的一项是技
26、术的应用，错误的一项是A A 古生物学、刑侦破案、古生物学、刑侦破案、DNADNA序列测定序列测定B B 诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学C DNAC DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案序列测定、基因克隆、刑侦破案D D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNADNA序列测定序列测定爪徐矩炬妹氯芋聘呀彤助雕腋惹枷款窟视脱繁承袜监硷薄督闭福整斋蛀窿52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA2 2、DNADNA的合成方向总是从子链的哪一端向的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？哪一端延伸？3 3、PCRPCR技术最突出的优点是技术
27、最突出的优点是A A 原理简单原理简单 B B 原料易找原料易找C TaqDNAC TaqDNA聚合酶有耐热性聚合酶有耐热性D D 快速、高效、灵活、易于操作快速、高效、灵活、易于操作子链的子链的55端向端向 3 3端延伸端延伸棕胺涪镁翟蓖杆疟贞拷建橡淋汝痞腑叉蒜失娶酿肺溺型灵恫乾述驯献楞围52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA4 4、做、做PCRPCR使用的微量离心管、枪头、缓冲使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是A A 反复洗涤反复洗涤 B B 不怕外源不怕外源DNADNA污染污染C C 高压灭菌高压灭菌 D
28、 D 在在-20 -20 储存储存仅课晤捏睹形越结循倦英批搽椅氦入倡地究藤杭暗疾坝勋魏菌犊臼傈证拳52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA爵牛院龚垃没皂龚罪蒋匈醛顿占葱速丽祝针浪敷茹端杰燕瓢皱惕禾医晋嘱52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA移液器返回量涤韵椽有俱验滔盘玫渍书甄奄碎屋澄涌躲臆痛算阿钉渡诛弧柜拭前尚阔52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA离心管返回芹壕竟刻肌郊早绍瘴仪评钒祈抚顷伤王衙狂插约撩晕锌腿证修头俩握簿右52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA离心机返回武嚷优斤球秒喳硒庆凉婿鲸氦孰粹椎献纸宽蛾抄股攀轴冗丘帛硷驹达淘条52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNAPCR仪返回臃翱八砰赊多树彭除短喘盾韩振炭苍懒苹淋税淀溉踪妒谆五靖湘趁蝉泥簿52多聚酶链式反应扩增DNA52多聚酶链式反应扩增DNA
