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1、 非发酵革兰阴性杆菌非发酵革兰阴性杆菌非发酵非发酵(Nonfermenters)革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌n非发酵菌是一群需氧、无芽孢、氧化分解利用糖非发酵菌是一群需氧、无芽孢、氧化分解利用糖类或是不利用糖做为能量来源的革兰阴性杆菌。类或是不利用糖做为能量来源的革兰阴性杆菌。n通常所讲的非发酵菌指在通常所讲的非发酵菌指在KIA外表外表24小时内能够小时内能够生长，在底部不生长的需氧革兰阴性杆菌。生长，在底部不生长的需氧革兰阴性杆菌。主要的非发酵革兰阴性杆菌属主要的非发酵革兰阴性杆菌属n假单胞菌属：n产碱杆菌属n黄杆菌属：n无色杆菌属n莫拉菌属：n不动杆菌属:n莫拉菌属n丛毛菌属 葡萄糖氧化葡萄糖
2、氧化- -发酵发酵O/FO/F试验试验初步分群鉴定试验初步分群鉴定试验n1 1、葡萄糖氧化、葡萄糖氧化- -发酵发酵O/FO/F试验试验n OF OF培养基培养基: :蛋白胨和糖类的比例为蛋白胨和糖类的比例为1:51:5而不同于而不同于发酵菌的发酵菌的1:21:2。n2 2、动力、动力半固体培养基半固体培养基: :应只穿刺培养基顶部应只穿刺培养基顶部4mm4mm，在培养，在培养4-64-6小时后首次观察结果小时后首次观察结果,24,24和和4848小时后再次观察小时后再次观察结果。更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。结果。更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。n3 3、氧化酶阳性、氧化酶阳性n 但并非所
3、有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌都是非但并非所有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌都是非发酵菌。发酵菌。常见非发酵菌革兰阴性杆菌的初步分群鉴定常见非发酵菌革兰阴性杆菌的初步分群鉴定试试 验验 假单胞假单胞 无色杆无色杆 黄杆黄杆 不动杆不动杆 产碱杆产碱杆 丛毛丛毛 莫拉莫拉 菌属菌属 菌属菌属 菌属菌属 菌属菌属 菌属菌属 菌属菌属 菌属菌属n氧化酶氧化酶 + + +/- - + + +/- n葡萄糖氧化葡萄糖氧化-发酵发酵nO/F试验试验 0/- 0 0 0/- - - - n动力动力 +/- +/- +/- - + + -一、假单胞菌属假单胞菌属(Pseudomonas)n直或微弯无芽孢革兰阴性杆菌，氧
4、化酶阳直或微弯无芽孢革兰阴性杆菌，氧化酶阳性，动力性，动力+ +一个或多个极鞭毛，严格一个或多个极鞭毛，严格需氧，氧化利用葡萄糖、触酶阳性、需氧，氧化利用葡萄糖、触酶阳性、 MAC MAC生长，水溶性色素。生长，水溶性色素。 铜绿铜绿 荧光荧光 恶臭恶臭 斯氏斯氏 曼多辛曼多辛 假产碱假产碱 产碱产碱 氧化酶 99 97 100 100 100 100 96 麦康凯 100 100 100 100 100 100 96 42 100 0 0 69 100 94 0硝酸盐复原 98 19 0 100 100 100 94青脓素 65 91 82 0 0 0 0精氨酸 100 97 100 0 1
5、00 78 12 明胶液化 82 100 0 0 0 0 0葡萄糖 97 100 100 96 100 9 0木糖 90 100 100 93 75 18 0乳糖 1 24 25 0 0 0 0麦芽糖 1 2 31 100 0 0 0甘露醇 70 53 25 89 0 0 0鞭毛数 1 1 1 1 1 1 1铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌P.aeruginosan分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。n感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病人及静感染多发生于烧伤
6、、急性白血病、器官移植病人及静脉药瘾者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置脉药瘾者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置的导管、创面、外耳道、角膜和渗出性皮肤伤口处的导管、创面、外耳道、角膜和渗出性皮肤伤口处n囊性纤维化病人呼吸道别离的铜绿假单胞菌具有生物囊性纤维化病人呼吸道别离的铜绿假单胞菌具有生物膜其产生的大量藻酸盐包围了菌体所致，导致本膜其产生的大量藻酸盐包围了菌体所致，导致本病的治疗困难和高死亡率。病的治疗困难和高死亡率。n其淡蓝色脓性渗出物及闻到绿脓素的生姜样气味具有其淡蓝色脓性渗出物及闻到绿脓素的生姜样气味具有特征性。特征性。生物学特性生物学特性 n直或微弯杆菌，有荚膜，直或微弯
7、杆菌，有荚膜，单端单端有有1根鞭毛根鞭毛，运动活泼，运动活泼 n严格严格需氧，需氧，最适生长温度最适生长温度35， 4不生长，不生长，42生长生长n严格需氧，严格需氧，氧化氧化利用葡萄糖、利用葡萄糖、 MAC生长生长n血平板上形成大而扁平，血平板上形成大而扁平，湿润，边缘不齐，有金属湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血色菌落，并形成透明溶血环。环。n有时可产生水滴样样菌落，有时可产生水滴样样菌落，无色素不溶血囊性纤维无色素不溶血囊性纤维化病人化病人色素形成色素形成n在普通琼脂平板上产生特征在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿脓素和性的蓝
8、绿色水溶性绿脓素和带荧光水溶性青脓素带荧光水溶性青脓素(荧光荧光素素)荧光假单胞菌和恶臭荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌也可产生。假单胞菌也可产生。荧光素青脓素铜绿假单胞菌的分型铜绿假单胞菌的分型n药敏分型药敏分型n血清学分型：菌体血清学分型：菌体O抗原抗原n噬菌体分型噬菌体分型n质粒指纹图谱分析质粒指纹图谱分析n重复序列重复序列PCRn脉冲场凝胶电泳脉冲场凝胶电泳质粒指纹图谱分析铜绿假单胞菌的耐药性铜绿假单胞菌的耐药性n细菌耐药机制细菌耐药机制外膜通透性降低外膜通透性降低产生灭活酶或钝化酶产生灭活酶或钝化酶主动外排系统将抗生素泵出胞外主动外排系统将抗生素泵出胞外抗菌药物作用靶位改变抗菌药物作用靶位
9、改变n各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能发生耐药。都可能发生耐药。铜绿假单胞菌感染的控制铜绿假单胞菌感染的控制n易感危重病人不应安排在已有过铜绿假单胞菌感易感危重病人不应安排在已有过铜绿假单胞菌感染的病房染的病房n各种抗菌药物、溶液、软膏、器械等应防止被铜各种抗菌药物、溶液、软膏、器械等应防止被铜绿假单胞菌污染绿假单胞菌污染n采取适当的分型方法对感染菌株进行流行病学调采取适当的分型方法对感染菌株进行流行病学调查和监控查和监控荧光假单胞菌荧光假单胞菌(P.fluorescens)n产青脓素，但不能产绿脓素，产青脓素，但不能产绿脓素， 4生长生长
10、, 42 不生长不生长, 最适温度最适温度25-30 。n见于水和土壤中，都可作为咽部的正常菌群存见于水和土壤中，都可作为咽部的正常菌群存在，是人类少见的条件致病菌在，是人类少见的条件致病菌n荧光假单胞菌和荧光假单胞菌和污染的血制品污染的血制品关系密切，可见关系密切，可见于近期接受过血液制品而致菌血症的患者。于近期接受过血液制品而致菌血症的患者。 嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌n窄食单胞菌属窄食单胞菌属,假单胞菌科，嗜麦芽窄食单胞假单胞菌科，嗜麦芽窄食单胞菌分布广泛，可引起条件感染是一种重要的医菌分布广泛，可引起条件感染是一种重要的医院获得性病原体，本菌可别离于几乎所有部位，院获得性病原体，
11、本菌可别离于几乎所有部位，最常见的是呼吸道最常见的是呼吸道.n引起本菌定植和感染的危险因素有：机械通气、引起本菌定植和感染的危险因素有：机械通气、广谱抗生素的预防性应用、化疗、插管和中性广谱抗生素的预防性应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。粒细胞减少等。嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌n嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛丛极鞭毛，血，血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味有氨气味。n根据根据 赖氨酸脱羧酶试验阳性和赖氨酸脱羧酶试验阳性和DNA酶阳性、氧化酶酶阳性、氧化酶阴性阴性可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧
12、化可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。 不动杆菌属不动杆菌属n广泛分布于自然和医院环境中，能在潮湿和枯燥的外表广泛分布于自然和医院环境中，能在潮湿和枯燥的外表生存，也可存在于健康人的皮肤生存，也可存在于健康人的皮肤. .n无动力、氧化酶阴性、硝酸盐复原阴性无动力、氧化酶阴性、硝酸盐复原阴性n醋酸钙不动杆菌醋酸钙不动杆菌n鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌n在非发酵菌中本菌是在临床标本中的别离在非发酵菌中本菌是在临床标本中的别离阳性率仅次于铜绿假单胞菌而居第二位的阳性率仅次于铜绿假单胞菌而居第二位的条件致病菌，通常不动杆
13、菌对健康人体不条件致病菌，通常不动杆菌对健康人体不致病，但对体弱者可引起感染。致病，但对体弱者可引起感染。n本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境外表生存，所以由本菌引起的医院获环境外表生存，所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势，医院获得性感染得性感染有增加的趋势，医院获得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或或ICUICU的住院患者。的住院患者。产碱杆菌属产碱杆菌属n氧化酶阳性的革兰氏阴性杆菌，不分解糖类氧化酶阳性的革兰氏阴性杆菌，不分解糖类,周鞭毛，周鞭毛，在含蛋白的在含蛋白的肉汤中产氨肉汤中产氨。有医学
14、意义的产碱杆菌属主要有有医学意义的产碱杆菌属主要有n木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种A.xylosoxidans subsp. Xylosoxidansn木糖氧化产碱杆菌脱硝亚种木糖氧化产碱杆菌脱硝亚种A.xylosoxidans subsp.denitrificansn粪产碱杆菌粪产碱杆菌A.faecalisn皮氏产碱杆菌皮氏产碱杆菌A.piechaudiin粪产碱杆菌大局部感染是条件致病，主要来自潮粪产碱杆菌大局部感染是条件致病，主要来自潮湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿是常见发现部位。尿是常见发现部位。氧化
15、酶阴性，无动力氧化酶阴性，无动力不动杆菌属不动杆菌属氧化酶阴性，有动力氧化酶阴性，有动力洋葱伯克菌洋葱伯克菌(93%氧化酶弱阳性氧化酶弱阳性)唐菖蒲伯克菌唐菖蒲伯克菌浅黄华美单胞菌浅黄华美单胞菌栖稻黄素单胞菌栖稻黄素单胞菌少动鞘氨醇单胞菌少动鞘氨醇单胞菌(94%氧化酶阳性氧化酶阳性)嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌氧化酶阳性，无动力氧化酶阳性，无动力动物伤口伯杰菌动物伤口伯杰菌短稳杆菌短稳杆菌尿道寡源菌尿道寡源菌威克菌属威克菌属莫拉菌属莫拉菌属华美杆菌属华美杆菌属氧化酶阳性，有动力氧化酶阳性，有动力产碱杆菌产碱杆菌洋葱伯克菌洋葱伯克菌皮氏伯克菌皮氏伯克菌类鼻疽伯克菌类鼻疽伯克菌铜绿假单胞菌及其
16、他大局部假单胞铜绿假单胞菌及其他大局部假单胞菌菌非非发发酵酵菌菌 实验室发现和鉴定非发酵菌的原那么：1、除了铜绿假单胞菌、鼻疽伯克菌、假鼻疽伯克氏菌和脑膜脓毒华美杆菌，非发酵菌的毒力一般较低，易于感染非发酵菌的特定环境和疾病因素包括：1恶性肿瘤、导管插入术、气管开口术、淋巴穿刺，透析、灌洗和瓣膜置换等。2长期皮质类固醇、抗生素和抗肿瘤治疗。3患有代谢性或慢性感染性疾病4烧伤、开放性伤口及各种渗出性损伤。2、大多数非发酵菌在不同环境中都有其自、大多数非发酵菌在不同环境中都有其自然定植部位，可成为人类感染的潜在传然定植部位，可成为人类感染的潜在传染源。染源。1医院环境中的各种水源。这些液体经常医院
17、环境中的各种水源。这些液体经常与住院病人的粘膜和其他身体部位发生与住院病人的粘膜和其他身体部位发生直接接触。直接接触。2各种仪器用具，如麻醉设备、镊子、体各种仪器用具，如麻醉设备、镊子、体温计、纱布、拖把、毛巾等。温计、纱布、拖把、毛巾等。3身体的某些潮湿部位，如腹股沟、腋窝、身体的某些潮湿部位，如腹股沟、腋窝、肘窝及甲沟等在夏天易受感染。肘窝及甲沟等在夏天易受感染。 4各种家畜、宠物可致其主人感染。各种家畜、宠物可致其主人感染。n3、某些非发酵菌可引起特定的感染，败、某些非发酵菌可引起特定的感染，败血症可由任何非发酵菌引起，而大局部血症可由任何非发酵菌引起，而大局部非发酵菌可致肺炎或支气管炎
18、、化脓性非发酵菌可致肺炎或支气管炎、化脓性关节炎、尿道炎、手术和外伤后伤口感关节炎、尿道炎、手术和外伤后伤口感染、结膜炎等。染、结膜炎等。n4、临床别离的革兰阴性杆菌，如血平板、临床别离的革兰阴性杆菌，如血平板上菌落小，上菌落小，KIA或或TSA培养基生长，氧化培养基生长，氧化酶阳性可疑心为非发酵菌。酶阳性可疑心为非发酵菌。5、很多非发酵菌对抗生素具有某种方式、很多非发酵菌对抗生素具有某种方式的多重耐药性，了解这些耐药方式有助的多重耐药性，了解这些耐药方式有助于提供此菌株属于某种非发酵菌的最初于提供此菌株属于某种非发酵菌的最初线索。线索。常见菌种的鉴定常见菌种的鉴定一排除法一排除法临床标本中最
19、常见的非发酵菌是铜绿假单胞菌、鲍临床标本中最常见的非发酵菌是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。大局部菌株只曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌。大局部菌株只需通过观察和少数生化实验便可很容易鉴定，这需通过观察和少数生化实验便可很容易鉴定，这种快速鉴定不仅可快速为临床医生提供信息，而种快速鉴定不仅可快速为临床医生提供信息，而且省时、省力、经济。且省时、省力、经济。1.铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌n95%以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特征而得到鉴定：征而得到鉴定：n氧化酶阳性氧化酶阳性10秒内。秒内。n菌落较大，生姜样气味。菌落较大，生姜样气味。n绿脓素
20、产生。绿脓素产生。n少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓素红色，黑脓素棕色到黑色，青脓素素红色，黑脓素棕色到黑色，青脓素黄色。黄色。铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌鉴定无色素鉴定无色素/只产生荧光素的铜绿假单胞菌：只产生荧光素的铜绿假单胞菌：42能够生长能够生长乙酰胺的碱化作用乙酰胺的碱化作用硝酸盐、亚硝酸盐的脱氮作用硝酸盐、亚硝酸盐的脱氮作用极性单鞭毛，有动力极性单鞭毛，有动力大多数铜绿假单胞菌可通过观察典型的大菌落，大多数铜绿假单胞菌可通过观察典型的大菌落，在首次别离的培养基上呈蓝绿色而很容易得到鉴在首次别离的培养基上呈蓝绿色而很容易得到鉴定，进一步
21、检查生姜样气味、产荧光素和氧化酶定，进一步检查生姜样气味、产荧光素和氧化酶试验，其他附加试验一般不需要。试验，其他附加试验一般不需要。2、鲍曼不动杆菌、鲍曼不动杆菌n鲍曼不动杆菌是临床实验室第二位最常见鲍曼不动杆菌是临床实验室第二位最常见的非发酵菌，以下特征可对其做预先鉴定：的非发酵菌，以下特征可对其做预先鉴定：1麦康凯平板上生长良好菌落可呈轻微麦康凯平板上生长良好菌落可呈轻微粉红色粉红色2氧化酶阴性氧化酶阴性3氧化分解葡萄糖，产酸氧化分解葡萄糖，产酸4氧化分解乳糖，产酸氧化分解乳糖，产酸5无动力无动力6对青霉素耐药性对青霉素耐药性 鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌n最初的线索是对临床标本直接革兰染色
22、，观察到最初的线索是对临床标本直接革兰染色，观察到微小微小1.00.7双球菌。双球菌。n取自琼脂或肉汤培养基的菌株革兰染色，那么菌取自琼脂或肉汤培养基的菌株革兰染色，那么菌体较大，更似杆菌。体较大，更似杆菌。n在血平板上鲍曼不动杆菌不产生色素在血平板上鲍曼不动杆菌不产生色素n菌落在麦康凯平板上那么呈微弱的粉红色，在伊菌落在麦康凯平板上那么呈微弱的粉红色，在伊红美蓝琼脂上呈蓝色。红美蓝琼脂上呈蓝色。n耐青霉素，可与对青霉素高度敏感的莫拉菌革耐青霉素，可与对青霉素高度敏感的莫拉菌革兰染色通常也为球杆状相区别兰染色通常也为球杆状相区别其他非发酵菌的鉴定方法其他非发酵菌的鉴定方法二分组法二分组法如果一
23、株非发酵革兰阴性杆菌不是铜绿如果一株非发酵革兰阴性杆菌不是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌，必须增加其他的试验来进食单胞菌，必须增加其他的试验来进行种的鉴定行种的鉴定根据动力和氧化酶将各种临床上重要的根据动力和氧化酶将各种临床上重要的非发酵菌分为四个功能局部非发酵菌分为四个功能局部n发现历史：发现历史：1976年年美国费城爆发军团病，美国费城爆发军团病，1977年别离出细菌，年别离出细菌，1978年命名为嗜肺年命名为嗜肺军团菌军团菌L. pneumophila) 军团菌属军团菌属 Legionellan本菌为革兰阴性杆菌，常规染色不易着色，姬本菌为革
24、兰阴性杆菌，常规染色不易着色，姬美耐染色菌体为红色，因培养条件不同有明显美耐染色菌体为红色，因培养条件不同有明显多形性，有长鞭毛，无芽孢荚膜多形性，有长鞭毛，无芽孢荚膜n需氧菌，首次别离需需氧菌，首次别离需5%CO2，营养要求严格，营养要求严格，一般营养琼脂和血琼脂上不生长，须含有半胱一般营养琼脂和血琼脂上不生长，须含有半胱氨酸和铁离子，常用培养基为缓冲活性炭酵母氨酸和铁离子，常用培养基为缓冲活性炭酵母琼脂培养基琼脂培养基BCYE,军团菌属军团菌属n在在BCYE培养基上培养基上3-5天可形成湿润、有光天可形成湿润、有光泽灰白色菌落，初期外观呈刻花玻璃样花泽灰白色菌落，初期外观呈刻花玻璃样花纹，
25、继续培养消失纹，继续培养消失n生化反响：在含糖培养基上不生长，氧化生化反响：在含糖培养基上不生长，氧化酶弱阳性，触酶阳性，酶弱阳性，触酶阳性，内酰胺酶阳性内酰胺酶阳性n抵抗力强，在水中存活力高抵抗力强，在水中存活力高所致疾病所致疾病n军团病军团病n 主要通过呼吸道吸入带菌飞沫。主要通过呼吸道吸入带菌飞沫。n 中央空调冷却塔用水污染军团菌而中央空调冷却塔用水污染军团菌而 导导致感染。致感染。n临床类型：临床类型：n 流感样型轻症型流感样型轻症型n 肺炎型重症型肺炎型重症型n 肺外感染肺外感染(庞堤阿克热庞堤阿克热)军团菌属的检验军团菌属的检验n标本：痰、血液、胸水、水和土壤，处理：标本：痰、血液、胸水、水和土壤，处理：加温或酸处理加温或酸处理n别离培养：血琼脂、巧合力琼脂和别离培养：血琼脂、巧合力琼脂和BCYE琼琼脂，脂，48小时内生长不是军团菌小时内生长不是军团菌n可疑菌落氧化酶，触酶和可疑菌落氧化酶，触酶和内酰胺酶试验内酰胺酶试验n直接荧光抗体染色镜检直接荧光抗体染色镜检n血清学试验和分子生物学试验血清学试验和分子生物学试验
