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1、Cha-3 Cha-3 方法的选择、建立和认证方法的选择、建立和认证方法的选择、建立和认证方法的选择、建立和认证2 |Analysis of Biopharmaceuticals3.1 分析质量控制分析质量控制3.1.1 标准物质和标准分析方法(1)标准分类1988年中华人民共和国标准化法 国家标准行业标准地方标准企业标准3 |Analysis of Biopharmaceuticalsl（2）标准物质 是一种或多种经确定了高稳定性的物理、化学和计量学特性，并经正式批准可作为标准使用，以便用来校准测量仪器、评价方法或给材料赋值的物质或材料。l标准物质的作用校准仪器 分析标准验证方法 分析质量控
2、制4 |Analysis of Biopharmaceuticalsl标准物质分类l基准标准物质 ultimate standardl标准参考物质standard reference materail5 |Analysis of Biopharmaceuticalsl(3)标准方法l权威机构审批和发布l我国的国标法6 |Analysis of Biopharmaceuticalsl分析质量控制l把分析误差控制在允许范围内，保证分析结果的准确性和精确性l实验室内部质量控制l（1）空白实验:纯水代替试液，其他步骤一样。l（2）标准曲线:计算标准曲线的直线回归方程和相关系数7 |Analysis o
3、f Biopharmaceuticals（3）质量控制图l精密度控制图上、下警告限 上、下控制限l准确度控制图 ：利用回收率及其标准偏差进行计算x2Sx3S8 |Analysis of Biopharmaceuticals3.2 计量认证（略）计量认证（略）l 为社会提供公正数据的产品检验机构，必须经省级为社会提供公正数据的产品检验机构，必须经省级以上人民政府计量行政部门对其计量检定、测试能力和以上人民政府计量行政部门对其计量检定、测试能力和可靠性考核合格。可靠性考核合格。9 |Analysis of Biopharmaceuticals3.3 药物分析方法的选择和建立药物分析方法的选择和建立
4、l了解被测组分的性质，了解被测组分的性质，l查阅文献、参考书查阅文献、参考书l现有的科研条件现有的科研条件l选择适当的方法选择适当的方法l试验方案的确定和试验准备试验方案的确定和试验准备l试验的开展和试验方案的修正试验的开展和试验方案的修正l试验数据的整理试验数据的整理l论文的形成论文的形成10 |Analysis of Biopharmaceuticals方法方法分析方法分析方法免疫学方法免疫学方法液液质联用用气相色气相色谱高效液相色高效液相色谱气气质联用用11 |Analysis of Biopharmaceuticals3.4 药物分析方法的验证和质量控制药物分析方法的验证和质量控制l确
5、定药物或其代谢产物的方法必 须具备以下特点:灵敏度精确性特异性准确性12 |Analysis of Biopharmaceuticals灵敏度灵敏度l检测方法能够定量的最小药物浓度必须大于药物在体内最大浓度的10%. 最小定量值(LOQ): 1/10 最大浓度(Cmax) 13 |Analysis of Biopharmaceuticals特异性特异性l检测方法必须能将检测物和同时服用的其他混合物区分开14 |Analysis of Biopharmaceuticals3.4.1 药物分析方法的验证与质量控制药物分析方法的验证与质量控制l特异性l检出限 (LOD)l定量限 (LOQ)l线性相关
6、l检测范围l精确性l准确性l稳定性15 |Analysis of Biopharmaceuticals1、验证、验证-特异性特异性l特异性研究应该在化验分析阶段展开l必须清楚的阐述特异性过程l特异性必须用结构近似的对照物加以验证 l结果的选择是基于科学的判断16 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证-特异性特异性17 |Analysis of Biopharmaceuticals2、验证、验证- 检出限检出限(LOD)l（三）检测限（三）检测限（limit of detection， LOD） l 检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测限系指试样在确
7、定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。检测出的最低浓度或含量。l 是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。于或低于该规定浓度即可。18 |Analysis of Biopharmaceuticals2、验证、验证- 检出限检出限(LOD)l各种可能的方法感官评价被测物可被可靠检测出的最低限度信噪比3:1 可以接受斜率和回应值标准偏差 LOD = 3.3 / S = 回应值标准偏差 S = 标定曲线斜率19 |Analysis of Biopharmaceuticals3、验证、验证- 最小定量值最小定量值(LO
8、Q)l根据信噪比可信的定量信噪比为 10:1l根据回应值和斜率 LOQ = 10 / S =回应值标准偏差 S =标定曲线斜率20 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证-LOD/LOQ 推荐数据:lLOD , LOQ 和确定LOQ的方法都应该被说明l各种限值的确定必须建立是在适当的受试样本数量的基础上得出21 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证-LOD22 |Analysis of BiopharmaceuticalsLOQ, LOD 和和 SNRl定量限 (LOQ)l检出限 (LOD)l信噪比 (SNR)干干扰线值峰 AL
9、OD峰 BLOQ基基线验证验证23 |Analysis of Biopharmaceuticals4、验证、验证- 线性线性l应该在研究阶段,通过所期望的浓度范围来评价l至少应该在浓度范围内选择5组浓度进行试验l相关系数, y- 回归斜率和偏差平方和必须准确得出l分析回归线偏差得到线性相关24 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证- 线性线性25 |Analysis of Biopharmaceuticals5、验证、验证- 范围范围l指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。l在线性研究中得到特异性范围,此范围应该含盖某些
10、研究中可能出现的特殊数值l范围应该在科学准确的信息指导下进行划分l范围的确定可因测定项目不同而有不同要求：l 含量测定范围为80%-120%；含量均匀度范围为70%-130%；杂质测定应为被测杂质限度的50%-120%；溶出度应为测定范围的20%。26 |Analysis of Biopharmaceuticals6、验证、验证- 精确性精确性（precision） 精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（用偏差（d d）、标准）、标准偏差偏差( (SDSD) )、相对标
11、准偏差、相对标准偏差( (RSDRSD) )（变异系数，（变异系数，CVCV）表示。）表示。 l通过定量受试物样品峰值来评价试验的精确度通过定量受试物样品峰值来评价试验的精确度l精确性必须在至少精确性必须在至少3 3组试验浓度下进行验证组试验浓度下进行验证( (高高/ /中中/ /低低) ) l根据试验样品数量和可信区间根据试验样品数量和可信区间, ,精确度应该以回收百分率精确度应该以回收百分率的形式报出的形式报出27 |Analysis of Biopharmaceuticals偏差（偏差（d d）：测量值与平均值之差）：测量值与平均值之差允许差：容量分析（中和法、非水滴定法、银量法、络合滴
12、允许差：容量分析（中和法、非水滴定法、银量法、络合滴允许差：容量分析（中和法、非水滴定法、银量法、络合滴允许差：容量分析（中和法、非水滴定法、银量法、络合滴定法、重氮化法、氧化还原法）定法、重氮化法、氧化还原法）定法、重氮化法、氧化还原法）定法、重氮化法、氧化还原法）0.3%0.3%0.3%0.3%；重量法；重量法；重量法；重量法 0.5% 0.5% 0.5% 0.5%；氧；氧；氧；氧瓶燃烧法瓶燃烧法瓶燃烧法瓶燃烧法 0.5% 0.5% 0.5% 0.5%；仪器分析；仪器分析；仪器分析；仪器分析 3% 3% 3% 3%、凯氏定氮法、凯氏定氮法、凯氏定氮法、凯氏定氮法 1% 1% 1% 1%（A
13、-平均平均值）/平均平均值 100%相相对偏差偏差28 |Analysis of Biopharmaceuticals标准（偏）差（标准（偏）差（SDSD或或S S）相相对标准（偏）差（准（偏）差（RSD），也称），也称变异系数（异系数（CV）29 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证- 精确性精确性LQCMQCHQC30 |Analysis of Biopharmaceuticals7、验证、验证- 准确性准确性l可重复性可重复性浓度含盖了特异性范围浓度含盖了特异性范围l试验中各参与要素的准确性试验中各参与要素的准确性如日期如日期,受试物受试物,设备设备l可
14、重现性可重现性判断其分析是否发生在特定的时期判断其分析是否发生在特定的时期l数据提供数据提供标准标准,偏差系数和可信区间等数据都应该和准确度附偏差系数和可信区间等数据都应该和准确度附在一起在一起31 |Analysis of Biopharmaceuticals准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M 32 |Analysis of Biopharmaceuticals 加加样样回回收收试
15、试验验 已已准准确确测测定定药药物物含含量量P P的的真真实实样样品品+ +已已知量知量A A的对照品（或标准品）测定，测定值为的对照品（或标准品）测定，测定值为M M33 |Analysis of Biopharmaceuticals 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。 原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。34 |Analysis of Biopharmaceuticals 制制剂可用含己知量被可用含己知量被测物的各物的各组分混合物分混合物进行行测定，定，即采用在空白即采
16、用在空白辅料中加入原料料中加入原料药对照品的方法。照品的方法。 如不能得到制如不能得到制剂的全部的全部组分，可向制分，可向制剂中加入已知量的中加入已知量的被被测物物进行行测定，或与另一个已建立准确度的方法比定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。果。中中药分析的准确度一般用加分析的准确度一般用加样回收回收试验衡量。中衡量。中药回收率一回收率一般要求在般要求在9595105%105%范范围内，有些方法操作步内，有些方法操作步骤繁多繁多时，可要，可要求在求在9090110%110%范范围内。内。RSDRSD一般在一般在2%2%以内。以内。35 |Analysis of Biopharmaceut
17、icals验证验证-精确性精确性/准确性准确性精确性精确性/准确性准确性:36 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证-精确性精确性/准确性准确性1天内天内:天天:37 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证-精确性精确性/准确性准确性精确性精确性/校准因素校准因素 准确性准确性:38 |Analysis of Biopharmaceuticals验证验证-精确性精确性/准确性准确性FDA精确性精确性同一同一试验不同不同试验间正常正常: 15%: 20%最低定量限最低定量限准确性准确性同一同一试验不同不同试验间正常正常: 15%:
18、 99.599.5) )或对照品考察方法的精密度，相对标准差一或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于般应不大于0.20.2；进行回收率试验。；进行回收率试验。回收率一回收率一般在般在99.799.7100.3100.3之间之间。 45 |Analysis of Biopharmaceuticals 2. 2. UVUV法法： 用适当浓度的精制品进行测定，其用适当浓度的精制品进行测定，其RSDRSD一般不大于一般不大于1 1。制剂的测定，回收率一般应在。制剂的测定，回收率一般应在9898102102之间。之间。 线性：吸光度性：吸光度A一般在一般在0.20.7，浓度点度点n5。用。用浓
19、度度c对A作作线性回性回归处理，得一直理，得一直线方程，方程，r应达到达到0.9999(n5)，方程的截距，方程的截距应近于零。近于零。46 |Analysis of Biopharmaceuticals 3. HPLC3. HPLC法：要求法：要求RSD2RSD2，回收率回收率9898102102之间。之间。 线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点度点n n应为应为5 57 7，用浓度，用浓度c c对峰高对峰高h h或被测物的响应值或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，之比进行回归处理，建立回归方程，r r应大于应大于0.9990.99
20、9，截距应趋于零。截距应趋于零。47 |Analysis of Biopharmaceuticals3.4.3 3.4.3 生物药物分析方法验证报告生物药物分析方法验证报告l必须以文字报告形式描述详细的生物学分析方法l所有用于产生结果的试验都必须在报告中阐述lGLP 符合/检查/审查48 |Analysis of Biopharmaceuticals报告报告以以下数据必下数据必须在在报告中提供告中提供:1) 作者及作者作者及作者间关系关系2) 研究研究过程程实施所在地施所在地3) 报告告发表日期表日期 4) 报告告识别码 报告告打打印印纸最最好好使使用用申申请者者或或分分析析实施施单位位专用用
21、纸张49 |Analysis of Biopharmaceuticals报告报告* 受受试样品品为混混合合物物(有有效效成成分分,有有效效代代谢产物物和和/或或数数量量较大大的的代代谢产物物) * 样品的品的预处理和理和预提取提取* 分析方法使用分析方法使用* 分析方法的来源分析方法的来源-相关文献相关文献-分析方法改分析方法改进* 分析方法分析方法验证- 检出限出限,稳定性定性,重重现性性- 线性性,准确性准确性,精确性精确性,选择性性,灵敏性灵敏性-当天差异性当天差异性每个每个单独的独的测量均需在量均需在报告中写出告中写出50 |Analysis of Biopharmaceuticals报告报告受受试样品品单独出具独出具报告告*验证报告参考文献告参考文献* 样品品处理理* 分析分析过程建立程建立* 验证结果研究果研究* 再分析再分析* 色色谱图/层析析图* 结果果鉴定定每个每个单独的独的测量均需在量均需在报告中写出告中写出!
