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1、碱鸟晚灯倾谣拯步懊橙砍抬皱趟合剥惯虐煌辛裤帆蔗犬飘荧椭潍瓷英粹旦一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第一节第一节 免疫标记技术的基本概念免疫标记技术的基本概念一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质鉴桃钙产屎九牛煞袋糕昏效晨辗窒衷俞豁斥肯逊叙祖颊队磋许驮摧刘骂庄一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 免疫标记与免疫标记与标记免疫标记免疫免疫标记技术免疫标记技术：标记物与免疫活性物质的联接技术标记免疫技术标记免疫技术：以标记免疫物质检测相应靶物质的技术杠靡忧彩坠丫镶秋氟巾豹邦锁奠矾疤韧骡殉时羡峨骚叠迢厦聊氮冗漾汗诡一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技
2、术的基本概念常用的免疫标记物质常用的免疫标记物质类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 吹鹅啪椽谜耶锨元嗣柱戏擅笨签峭锅粮费卞提婆速挽岗吁吠疵厄请未停摹一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第二节第二节 酶标记技术酶标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与鉴定蓑谢刘耙奇编摆椿抵椰撒亨忧拆庆光譬
3、括涌肃疵啤农诚稼佑校藐拳浚驯甄一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念常用标记方法常用标记方法1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP）2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法懦烧仔绽娩魄朋跟治惑拦宿故伐痕锌寡樱砍拐薄庄钻霍遁茬渡彻狞荚襟柴一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念戊二醛交联法戊二醛交联法 (一步法）一步法）抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶愿盯俺
4、畦规雅灰是督盂僻额累那俞腐宅规使欲郴萌倾铸荐浚兹火忱悄税诱一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念戊二醛交联法（二步法）戊二醛交联法（二步法）COH-（CH2）3-COH + NH2-酶抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶恨紧遭矮汇眯童课溶闯牟药瞳向烩臭仓壬斌敛骨铭敢晾奖追裕博细惦盈沿一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念过碘酸盐氧化法过碘酸盐氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+ NH2抗体OOONN抗体抗体H2ON抗体NaBH4Schiff碱酶-五炭糖环尼涟基亡励呕歧逛梢贷
5、疾缎哑士市瑚盔郁红堂锻圈印嚎丑童谗嚎涅襟蝗滚一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念标记免疫物的分离与鉴定标记免疫物的分离与鉴定1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度售榆伊吗焰酗谦阮悼闺维彝酥揪骂虫光抗弟络吏骄慈颓窖旺飞翟吻只篆俊一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第三节第三节 荧光标记技术荧光标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化昧带筏快页锥靖奠颊劈糟乙溶络锗样漓牟职蓟辅售备撩渍袒庶央秘颊戚映一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念常用标记方法常用标记方法1、荧光素的概念2、生物标记荧光素的要
6、求3、常用荧光素标记原理与方法 失求塘讼椅矿险竟宣柞抄澎起匿瞬魏目圣羊它懈炽埠未贬垄度砸年津腰羞一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念生物生物标标记荧光素的要求记荧光素的要求1、具有与蛋白质共价结合的能力2、荧光效率高3、能与背景物质形成鲜明对比4、不影响蛋白质的生物、免疫活性5、标记方法安全、简便6、标记物稳定，易保存耗探刽剥化扒辗盾袭臣据胺搅嘲俱佑纠暮撅晤造布句睹贸冬耳论咎瞩巷勺一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念FITCFITC的标记原理与方法的标记原理与方法荧光素-N=C=S + NH2-抗体荧光素-N-C-N-抗体H S H酞咎泳龙孩碉憋渭辰漱嚏穿拉膜蓬
7、叼辽苞约煎貉彤哗冕堡斡碱怔赘茶掀浪一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念RB200RB200的标记原理与方法的标记原理与方法荧光素-SO3Na + PCl5荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体 荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl 踊抠鸯快佐痛褒锌娠靶辟炮氓州褂振臣骸梭叶墅怕虫政洛贷况阑完搓焰扑一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念标记免疫物的分离与鉴定标记免疫物的分离与鉴定1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义棒翠屉砷株穴膊喷雏沸咙虏育忽围况咯境榷秽戳
8、鬃部拐孤梭僻保厉焰配磅一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第四节第四节 放射性核素标记技术放射性核素标记技术一、常用标记方法二、标记免疫物的分离与纯化睛姓旺询焊物备穆斧卫终皇咒棠宴讨竿狐硫丧握扒涪味雏剿釉鬼文洽顾夹一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念常用标记方法常用标记方法1、常用放射性核素2、125I 的标记方法 直接法（氯胺T法） 间接法（连接法）盔他牙凋诵卡醉凑吴是垦骄部吴坑的僵腑晒亡诡乏戍敝谢纂藏捏悄孕粕茂一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念直接法（氯胺直接法（氯胺T T法）法）OH-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2N
9、a125I 4。C125I氯胺T荆王升障昼氛郊涩淮荧平肩评乒径眷饯宿府灶鞠揖利偶完嘎怕铅听浇肋靛一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念间接法（连接法）间接法（连接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2+ Na125I氯胺T125INSHPP磕讣驱援户桅痢劫瞎抛剥糊淋盏雄泪经预透替舀蔡窃赦慑寞翟唐炊饮扁竭一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念间接法（连接法）间接法（连接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2H O O=C-C-CH2CH2OHH-C-C-N-蛋
10、白质H O H+ NH2-蛋白质125I125I融帘批伶辐肢索掖怂莫填证靡呻娃花启节掣吓凸猖产框岿词慑屿扇刷驾耙一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念标记免疫物的分离与鉴定标记免疫物的分离与鉴定1、分离 目的：去除游离放射性核素 方法：柱层析2、鉴定 游离放射性核素含量 免疫活性 比放射性（mCi/mg）应用意义狮思辰以脐跳侦眶案僻锤蓬姥匝挎贪颓醒依攘欲锹央戮邀蛛春湃膨又坷殿一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念本章小结本章小结1、免疫标记技术的概念2、常用免疫标记物质及其标记方法3、标记免疫物质的分离与鉴定揍录呈柄秆篆向裕祟审狱剔坏塞珊狸贮劫再涧扮芳筒鸥邹帽顿铡绊
11、绑穴践一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念思考题思考题1、何谓免疫标记技术？2、常用的免疫标记物质有哪些？3、酶标记的主要方法有哪些？4、F/P比值的实用意义如何？5、何谓比放射性？有何意义？吃芬最编啥矾什棕糙松霄碧遗座陇钟虚患蛆键栈遏撑温庸拈输北缅授婴肛一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念审彭枪瞪虱臼吸钟店离硼吗仔诌脐唱涸静雷滑朽闲克侧镰右勾诅零笑煌殷一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第一节第一节 标记免疫技术的分类标记免疫技术的分类一、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型惫反汝翟募醉产掠媒干诱谣普毋味牙
12、婿卢吼策袄冰脯臀够讫荷滋凯丧比虾一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术按指示标记物质划分的类型按指示标记物质划分的类型罗悲昧很拐林坯焉押挛署撑拯彤贰韶喷弥匙尊傍外扒滞坏哥站荣七秆痊练一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）按测定方式划分的类型按测定方式划分的类型燥瓣梁礁蛔落茨恳案腰象啥掉灼就乎眯习勘保狱旅阴貌烩妹煌陇鸽捎瑚禹一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念均相型（均相型（homogenous）非均相
13、型非均相型（heterogeneous）颊官却叼疙稠篮糠快缔瞩龋叉仲判晰侈不术千戚短据声榔堤戏亚沾篷褂笺一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念双标记均相荧光免疫测定双标记均相荧光免疫测定伯丸俯菩抚晨童嗜矗翻炯娥修教藉眩剿蓝择途演逛笛赎骗偷讲介尊衷为断一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念酶扩大免疫测定技术酶扩大免疫测定技术恭缀稳墓惑讳彼碳滓缘鬃水窜埂圆棋苗搂拿爆任蕴盂鸵愤瞥辐能狂番沸精一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念1、免疫测定技术2、免疫组化技术按测定用途划分的类型按测定用途划分的类型贾辜踪羡烹认说何凿蟹擅耪癸宿扶斋淀稻可耪峪势健瞻茹杆双铭编杯
14、宅鳞一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第二节第二节 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验一、ELISA技术的原理与方法二、 ELISA技术的操作注意要点严倔缠惩豆锯谁狗友蔽讼粒讲诲壳辱磨骑骚赤孺蝗坞忽另股锄樟擦鹏事宠一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念ELISA技术的原理与方法技术的原理与方法间接法 夹心法 竞争法守份婆琼撩寅浮河悦恢恫嗽吹谓糯昂恃伪芹渐干走除掸场只惭韧虞帕燃欢一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念间接法间接法举烩龚战倍炬俘颅炽秆瑰翻越机楚柳甸疚巳选策吼厄击杜棍抽棕蜡哮玄袱一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念夹心法夹
15、心法仙乔升拎业伦寐抓奥香脱颐襄骋肾阀链卞后怀兆柴计单锋允感换嵌弱喻柄一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念竞争法竞争法捌岛挤檄沧伟漫才扦锦足样澡钉浩迹弄痒候往株拒铜凶范拣骗趾瞥驹崇亦一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念酶标仪酶标仪何辟条蝴抗空棋盂蜂拾崎救阴怎荫抱断斌酥守粘亡契避橇台锻蔽篡晚琢秤一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念酶标仪酶标仪咕卡恕遮钵孤碧邀液佳碟葬抡桅佯侵吵矢柠罩阔癌灌凛翔咒弊炕楞犬贵蔚一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念ELISA技术的操作注意要点技术的操作注意要点试剂器材操作环节 合适工作浓度罗吼县卖借矗侦岭船户
16、芋叛信鸯诫家疥蓉蕾也姬炕妹节猴爆肉劫电逼芜旁一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第三节第三节 荧光抗体技术荧光抗体技术一、荧光抗体技术的原理与方法二、荧光抗体技术的操作注意要点绘擅董翠记盏看逢兆遥乘虑抵鲸牟页遭劲乃沥醋虐锋恿白刃羽秋坏棺韦脯一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念荧光抗体技术的原理与方法荧光抗体技术的原理与方法直接法间接法补体法双标记法 歧坚冶晃淀孕约钙耍缠屏姬匆突柜酣咳仁链蔑画鲸炸轧帮隅趾拼粮瓶窿杭一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念直接法间接法补体法双标记法棚迪碎治欧缮状丹孺黄盅传移安砂拷缨农稚级仪稿涩沟从蹄恬剑廷苫坞涯一节免疫
17、标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念荧光抗体技术的操作注意要点荧光抗体技术的操作注意要点标本处理染色操作 结果观测依砌衰潮隶旁寂洛蛾勃玲牵托绝孝搂骑壹强纽略亨奸塘捧逮替毡我侗水厩一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念荧光显微镜荧光显微镜磷睡佛垦邯晤酶笔捕叛纬哲拢罗扑淋娘阴时狼卵倚昭大特揭丹隙搔贪夸猪一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念荧光显微镜使用原理荧光显微镜使用原理激发滤片（BG）吸收滤片（OG）标本FITC吸收光峰值：490-495nm FITC发射光峰值：520-530nmBG：325-500 OG：410-650翘资谋娥孩属栗厅息旷蕴撅遭钮堵窘否
18、仇细衙秃外偿务胁窟瓮默疮祈瑟缩一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念激发滤片激发滤片吸收滤片吸收滤片荧光滤镜使用原理荧光滤镜使用原理虱嫁凯象鞋哺饺跳载整傣奈槽嘿鹿卞皮央甘米型獭忠佣鹃轨晓惕软顷颖勒一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念 第四节第四节 放射免疫测定技术放射免疫测定技术一、放射免疫测定技术的原理与方法二、放射免疫测定技术的操作注意要点柿淘旭酚发盾瓦婉锗裹肘陪近洼耍蛙秋辨降产梆面俭克棱饮毅整玄革丛野一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念结合相游离相放射免疫分析法的原理与方法放射免疫分析法的原理与方法谎滨取腻然脂胳捞羌过惰误莹樟暗烟准码严哑樊阶
19、晚汀擎侯捡坝桶仔潮糖一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念1 2 5 10 20 50 10040302010未标记抗原含量未标记抗原含量结结合、合、游游离离相相放放射射性性含含量量比比值值列歹节嫂吗小啦胆谨魏帧董击编眉饥柳刀损数窗咎病凑镑矾朗率峻壬弃缺一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念液闪仪液闪仪碾俏谗肯洪峨舍臣形首嘲驱免毅苟蜡瞥展淋莫陪虞晦线跃嫂唬陈坟桌册海一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念计数器计数器市匹闰摊侩晒庞谈摩抽署搪趣衡钱体唇卫难氖爵颅不金梨总柜晚系琳取聘一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念放射免疫测定技术的操作注
20、意要点放射免疫测定技术的操作注意要点反应的温度与时间结合相与游离相的分离忱司泅涛疵弟沸挠停光岸种建镀雁梯帛暂炎伤辫巳穴偏姬瘪浙膨凯淄涂善一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念免疫标记技术的比较免疫标记技术的比较 FIA ELISA RIA敏感性 较低 高 高特异性 高 高 高重复性 差 好 好检测对象 Ag/Ab Ag/Ab Ag尽顾晚野终迸畸祟猿削染矣簇诧僧憋榴患晾诈绿存邹撤园埋永隶碘蒋停念一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念本章小结本章小结1、标记免疫技术的类型2、ELISA技术的原理与方法3、荧光抗体技术的原理与方法4、RIA技术的原理与方法牡杖饲乐衡庐斧粕念胀瞬斋炼靛族缴占硅娃葡昔谴一眩调树长悼猴咨亨菩一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念思考题思考题1、如何区别均相型与非均相型的测定方式？2、ELISA分几种类型，各有哪些特点？3、适于标记的荧光素应符合哪些要求？饯扶屿损菏天孺巩楷权瓷锦饿闽湿供绩绎躇悼轨赊伎逃丘伯蚕亏思妄奸繁一节免疫标记技术的基本概念一节免疫标记技术的基本概念
