《《酶标仪、荧光光谱仪、红外光谱仪的使用》课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《酶标仪、荧光光谱仪、红外光谱仪的使用》课件（55页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、16.1光学仪器简介光学仪器简介16.2酶标仪酶标仪的原理应用及操作的原理应用及操作16.3荧光光谱仪荧光光谱仪原理应用及操作原理应用及操作16.4红外光谱仪原理应用及操作红外光谱仪原理应用及操作16酶标仪、荧光光谱仪、红外光谱仪的使用酶标仪、荧光光谱仪、红外光谱仪的使用16.1光学仪器简介光学仪器简介一、光学知识回顾一、光学知识回顾1可见光的颜色和互补色：可见光的颜色和互补色：在可见光范围内，不同波长的光的颜色是不同的。平常所见在可见光范围内，不同波长的光的颜色是不同的。平常所见的白光（日光、白炽灯光等）是一种的白光（日光、白炽灯光等）是一种复合光复合光，它是由各种颜色，它是由各种颜色的光按
2、一定比例混合而得的。利用棱镜等分光器可将它分解成的光按一定比例混合而得的。利用棱镜等分光器可将它分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等不同颜色的单色光。等不同颜色的单色光。白光白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还可由适当除了可由所有波长的可见光复合得到外，还可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。能的两种颜色的光按一定比例复合得到。能复合成白光的两复合成白光的两种颜色的光叫互补色光种颜色的光叫互补色光。 /nm颜色颜色互补光互补光400-450紫黄绿450-480蓝黄480-490绿蓝橙490-500蓝绿红500-560绿红紫560-580黄绿紫580-610黄蓝
3、610-650橙绿蓝650-760红蓝绿完全吸收完全吸收完全透完全透过过吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意复合光复合光2物质的颜色与吸收光的关系：物质的颜色与吸收光的关系：当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的显示的颜色是吸收光的互补色。颜色是吸收光的互补色。物质物质颜色颜色吸收光吸收光物质物质颜色颜色吸收光吸收光颜色颜色波长范围波长范围（nm）颜颜色色波长范围波长范围(nm)黄绿黄绿紫紫400
4、450紫紫绿绿560580黄黄蓝蓝450480蓝蓝黄黄580600橙橙绿蓝绿蓝480490绿蓝绿蓝橙橙600650红红蓝绿蓝绿490500蓝绿蓝绿红红650760紫红紫红绿绿500560三原色三原色RGB红绿蓝红绿蓝印刷的三原色是印刷的三原色是RGB的互补色的互补色yellow黄，黄，cyan青，青，magenta品红（或者叫洋红、红紫品红（或者叫洋红、红紫 光分析法：基于电磁辐射能量与待测物质相互作用后光分析法：基于电磁辐射能量与待测物质相互作用后所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分析方法；析方法； 电磁辐射范围：射线无线电波所
5、有范围；电磁辐射范围：射线无线电波所有范围； 相互作用方式：发射、吸收、反射、折射、散射、干相互作用方式：发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等；涉、衍射等； 光分析法在研究物质组成、结构表征、表面分析等方光分析法在研究物质组成、结构表征、表面分析等方面具有其他方法不可取代的地位；面具有其他方法不可取代的地位；二、光分析法及其特点二、光分析法及其特点三个基本过程：三个基本过程：（1）能源提供能量；）能源提供能量；（2）能量与被测物之间的相互作用；）能量与被测物之间的相互作用；（3）产生信号。）产生信号。基本特点：基本特点：（1）所有光分析法均包含三个基本过程；）所有光分析法均包含三个基本过
6、程；（2）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分析）；析）；（3）涉及大量光学元器件。）涉及大量光学元器件。三、电磁辐射的基本性质三、电磁辐射的基本性质1. 1.电磁辐射的波动性电磁辐射的波动性电磁辐射的波动性电磁辐射的波动性散射散射折射与反射折射与反射衍射衍射干涉干涉偏振偏振波波波波长长长长 cmcm、mm、nmnm、AA频频频频率率率率 HzsecHzsec-1-1波波波波数数数数 cmcm-1-1 传播速度传播速度传播速度传播速度 cm/seccm/sec2. 2.电磁辐射的粒子性电磁辐射的粒子性电磁辐射的粒子性电磁辐射的粒子性3. 3.普
7、朗克普朗克普朗克普朗克(Planch)(Planch)公式公式公式公式光电效应光电效应光电效应光电效应 康普敦效应康普敦效应康普敦效应康普敦效应 黑体辐射黑体辐射黑体辐射黑体辐射一一).电磁辐射的波粒二象电磁辐射的波粒二象性性E E - -光子的能量光子的能量光子的能量光子的能量J,J,焦耳焦耳焦耳焦耳 -光子的频率光子的频率光子的频率光子的频率Hz,Hz,赫兹赫兹赫兹赫兹 -光子的波长光子的波长光子的波长光子的波长cmcmC C -光速光速光速光速2.99792.9979 10101010cm.scm.s-1-1h h -PlanchPlanch常数常数常数常数6.62566.6256 10
8、10-34-34J.sJ.s焦耳焦耳焦耳焦耳. .秒秒秒秒E=h =h c /c = =/吸收吸收 发射发射C=299,792,458米米/秒秒波谱区波谱区波谱区波谱区 - -射线射线射线射线波长波长波长波长5140pm5140pm跃迁类型跃迁类型跃迁类型跃迁类型核能级核能级核能级核能级X-X-射线射线射线射线远紫外光远紫外光远紫外光远紫外光1010-3-310nm10nm10200nm10200nm原子内层电子原子内层电子原子内层电子原子内层电子莫斯鲍尔光谱法莫斯鲍尔光谱法莫斯鲍尔光谱法莫斯鲍尔光谱法: : - -射线射线射线射线原子核原子核原子核原子核 - -射线吸射线吸射线吸射线吸收收收
9、收X-X-射线吸收射线吸收射线吸收射线吸收光谱法光谱法光谱法光谱法: : X-X-射线射线射线射线/ /放射源放射源放射源放射源原子内层电子（原子内层电子（原子内层电子（原子内层电子（n10)n10)X-X-射线吸收射线吸收射线吸收射线吸收X-X-荧光荧光荧光荧光光谱法光谱法光谱法光谱法: :X-X-射线射线射线射线原子内层电子原子内层电子原子内层电子原子内层电子 特征特征特征特征X-X-射线发射射线发射射线发射射线发射远紫外光远紫外光远紫外光远紫外光-真空紫外区。此部分光谱会被空气吸真空紫外区。此部分光谱会被空气吸真空紫外区。此部分光谱会被空气吸真空紫外区。此部分光谱会被空气吸收收收收近紫外
10、光近紫外光近紫外光近紫外光可见光可见光可见光可见光200400nm200400nm400750nm400750nm原子外层电子原子外层电子原子外层电子原子外层电子/ /分子成键电子分子成键电子分子成键电子分子成键电子原子光谱：原子发射光谱、原子吸收光谱、原子荧光光谱原子光谱：原子发射光谱、原子吸收光谱、原子荧光光谱原子光谱：原子发射光谱、原子吸收光谱、原子荧光光谱原子光谱：原子发射光谱、原子吸收光谱、原子荧光光谱分子光谱：紫外分子光谱：紫外分子光谱：紫外分子光谱：紫外- -可见吸收光谱、分子荧光可见吸收光谱、分子荧光可见吸收光谱、分子荧光可见吸收光谱、分子荧光/ /磷光光谱、化学发光磷光光谱、
11、化学发光磷光光谱、化学发光磷光光谱、化学发光二二二二) )光学分析法波谱光学分析法波谱光学分析法波谱光学分析法波谱波谱区波谱区波谱区波谱区近红外光近红外光近红外光近红外光中红外光中红外光中红外光中红外光波长波长波长波长0.752.50.752.5 mm2.5502.550 mm跃迁类型跃迁类型分子振动分子振动远红外光远红外光远红外光远红外光微波微波微波微波射频射频射频射频501990501990 mm0.1100cm0.1100cm1100m1100m分子转动分子转动电子、核自旋电子、核自旋近红外光谱区近红外光谱区近红外光谱区近红外光谱区: :配位化学的研究对象配位化学的研究对象配位化学的研究
12、对象配位化学的研究对象红外吸收光谱法红外吸收光谱法红外吸收光谱法红外吸收光谱法: :红外光红外光红外光红外光分子分子分子分子吸收吸收吸收吸收远红外光谱区远红外光谱区远红外光谱区远红外光谱区电子自旋共振波谱法电子自旋共振波谱法电子自旋共振波谱法电子自旋共振波谱法: :微波微波微波微波分子未成对电子分子未成对电子分子未成对电子分子未成对电子吸收吸收吸收吸收核磁共振波谱法核磁共振波谱法核磁共振波谱法核磁共振波谱法: :射频射频射频射频原子核自旋原子核自旋原子核自旋原子核自旋吸收吸收吸收吸收三三)、本章仪器所用的光波、本章仪器所用的光波波谱区波谱区近紫外光近紫外光可见光可见光近红外光近红外光中红外光中
13、红外光远红外光远红外光波长波长200400nm400750nm0.752.5 m2.550 m501990 m跃迁跃迁类型类型原子外层电子原子外层电子分子成键电子分子成键电子分子振动分子振动分子转动分子转动酶标仪、荧光分光光度计酶标仪、荧光分光光度计红外分光光度计红外分光光度计 -射线射线5140pmX-射线射线10-310nm远紫外光远紫外光10200nm微波微波0.1100cm，射频，射频1100m（核磁共振）（核磁共振）2. 2.电磁辐射的吸收与发射电磁辐射的吸收与发射电磁辐射的吸收与发射电磁辐射的吸收与发射A.A.原子光谱原子光谱原子光谱原子光谱 线光谱线光谱线光谱线光谱 Line s
14、pectraLine spectrah i半宽度半宽度半宽度半宽度10101010-2-2-2-21010-5-5原子吸收光谱原子吸收光谱原子吸收光谱原子吸收光谱原子发射光谱原子发射光谱原子发射光谱原子发射光谱E E2 2E E0 0E E1 1E E3 3波长波长波长波长=hc/ E=hc/(E1-E0)=h1. 1.物质的能态物质的能态物质的能态物质的能态原子、离子原子、离子原子、离子原子、离子分子分子分子分子 E=E1-E0 =hc/B.B.分子光谱分子光谱分子光谱分子光谱带光谱带光谱带光谱带光谱 Band spectra有机、无机分子有机、无机分子有机、无机分子有机、无机分子半宽度半宽
15、度半宽度半宽度20202020 100nm100nm100nm100nm分子吸收光谱分子吸收光谱分子吸收光谱分子吸收光谱分子发射光谱分子发射光谱分子发射光谱分子发射光谱h i波长波长波长波长/nm/nm/nm/nmA(T)A(T)波长波长波长波长/nm/nm/nm/nmI I半宽度半宽度半宽度半宽度20202020 100nm100nm100nm100nmE E2 2E E1 1E E0 0E=E电子电子+E振动振动+E转动转动+E平动平动=h(电子电子+振动振动+转动转动+平动平动)=hc/(电子电子+振动振动+转动转动+平动平动)四、光分析法仪器的基本流程四、光分析法仪器的基本流程光光谱谱
16、仪仪器器通通常常包包括五个基本单元：括五个基本单元：光光源源；单单色色器器；样样品品；检检测测器器；显显示示与与数数据据处理；处理；五、光学分析仪器定量方法五、光学分析仪器定量方法LambertBeerLambertBeer定律定律定律定律A AlglgT T lglg（ I It t/I I0 0)=)= b c b c 式中：式中：A：吸光度；吸光度；T T:透射率；透射率；b：液层厚度：液层厚度(光程长度光程长度)，通常以，通常以cm为单位；为单位；c：溶液的摩尔浓度，单位：溶液的摩尔浓度，单位molL-1；：摩尔吸光系数，单位：摩尔吸光系数，单位Lmol-1cm-1；16.2 16.2
17、 酶标仪酶标仪的原理应用及操作的原理应用及操作的原理应用及操作的原理应用及操作变相的光电比色计或分光光度计变相的光电比色计或分光光度计 酶标仪（酶标仪（MicroplateReader）是对）是对酶联免疫检测酶联免疫检测（EIA）实验结果进行读取和分析的专业仪器。）实验结果进行读取和分析的专业仪器。酶联免疫反酶联免疫反应应通过偶联在通过偶联在抗原或抗体抗原或抗体上的上的酶催化显色底物酶催化显色底物进行的，反应进行的，反应结果以颜色显示，通过显色的深浅即吸光度值的大小就可以结果以颜色显示，通过显色的深浅即吸光度值的大小就可以判断标本中判断标本中待测抗体或抗原的浓度待测抗体或抗原的浓度。酶标法又称
18、酶标法又称固相酶免疫测定固相酶免疫测定，含，含3个必要的试剂：个必要的试剂：固相固相的抗原或抗体的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体酶标记的抗原或抗体和和酶反应的底物酶反应的底物。双抗。双抗体夹心法体夹心法(抗原）抗原）、间接法、间接法（抗体）、（抗体）、竞争法竞争法（抗原或抗体）（抗原或抗体）。1、酶标仪简介、酶标仪简介2 2、酶标仪能干什么？、酶标仪能干什么？酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中食品和环境科学中酶联免疫检测试剂盒酶联免疫检测试剂盒RCH（IgG和和IgM）检查通常也称为优生优育十项检查）检查通常也称
19、为优生优育十项检查；T3、T4、TSH、TORCH系列、不孕系列、各种癌症标志系列、不孕系列、各种癌症标志物、伤寒、副伤寒物、伤寒、副伤寒；另外通过母婴传播的性传播疾病（如淋；另外通过母婴传播的性传播疾病（如淋病、梅毒、病、梅毒、HIV）和肝炎（如）和肝炎（如HBV、HCV），以及胎儿的抗），以及胎儿的抗体，新生儿体，新生儿TSH的测定，疫苗反应等。的测定，疫苗反应等。免疫诊断方法：免疫诊断方法：放免（放免（RIA）、）、酶免（酶免（EIA）和和发光发光国内国内衰退期衰退期成长期成长期进入进入期期国外国外淘汰淘汰饱和期饱和期成熟成熟期期光源系统光源系统滤光系统滤光系统样品室样品室检测器检测器微
20、处理器控制系统微处理器控制系统3、酶标仪的结构、酶标仪的结构常用的三种检测方法常用的三种检测方法（一）抗体夹心法（一）抗体夹心法双抗体夹心法是检测双抗体夹心法是检测抗原抗原最常用的方法。具体操作步骤如下：最常用的方法。具体操作步骤如下：（1）特异性抗体与固相载体联结）特异性抗体与固相载体联结固相抗体固相抗体洗涤杂质。洗涤杂质。（2）受检标本与固相抗体接触反应）受检标本与固相抗体接触反应标本中的抗原与固相抗体标本中的抗原与固相抗体固相抗原抗体复合物固相抗原抗体复合物洗涤除去其他未结合的物质。洗涤除去其他未结合的物质。（3）加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合）加酶标抗体，使固相免疫
21、复合物上的抗原与酶标抗体结合彻底洗涤未结合的酶标抗体。固相载体上带有的彻底洗涤未结合的酶标抗体。固相载体上带有的酶量酶量就就代表标本中代表标本中受检抗原的量受检抗原的量。（4）加底物显色。夹心式复合物中的酶催化底物变为）加底物显色。夹心式复合物中的酶催化底物变为有色产物有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。二价及以上大分子抗原的检出和定量分析，二价及以上大分子抗原的检出和定量分析，不能用于半抗原等小分子的测定不能用于半抗原等小分子的测定（二）间接法（二）间接法其原理为利用酶标记的抗体来检测已与固其原理为利用酶标记的抗体来检测已与固相抗原结
22、合的受检相抗原结合的受检抗体抗体。操作步骤如下：。操作步骤如下：（1）特异体抗原固相载体联结）特异体抗原固相载体联结固相抗原固相抗原洗涤除去杂质。洗涤除去杂质。（2）稀释的受检血清中的）稀释的受检血清中的特异性抗体固相抗原结合特异性抗体固相抗原结合，形成，形成固相抗原抗体复合物。洗涤后固相载体上只留下特异性抗体。固相抗原抗体复合物。洗涤后固相载体上只留下特异性抗体。（3）酶标抗免疫球蛋白酶标抗免疫球蛋白（酶标抗体），与固相复合物中的抗（酶标抗体），与固相复合物中的抗体结合，该抗体间接地标记上酶。清洗后，体结合，该抗体间接地标记上酶。清洗后，固相载体上的酶固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量量就
23、代表特异性抗体的量。（4）加底物显色，颜色深度代表标本中受检抗体量。）加底物显色，颜色深度代表标本中受检抗体量。（三）竞争法（三）竞争法竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此，原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此，结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量成正比。结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量成正比。（1）特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。然后洗）特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。然后洗涤。涤。（2）待测管中加入）待测管中加入受检标本与一定量的酶标抗原的混合溶受
24、检标本与一定量的酶标抗原的混合溶液液，使之与固相抗体反应。若受检标本中无抗原，则酶标抗原，使之与固相抗体反应。若受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。若受检标本中含有抗原，则与酶标能顺利地与固相抗体结合。若受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合。这样，受检标本中抗原量抗原以同样的机会与固相抗体结合。这样，受检标本中抗原量越高，则由于这些抗原与固相抗体结合，越高，则由于这些抗原与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标竞争性地占去了酶标抗原与固相抗体结合抗原与固相抗体结合的机会，使酶标抗原与固相抗体的结合量的机会，使酶标抗原与固相抗体的结合量越少。越少。“参考管参考管”
25、中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。然后洗涤。抗体的结合可达最充分的量。然后洗涤。（3）加底物显色。参考管中由于结合的酶标抗原量最多，）加底物显色。参考管中由于结合的酶标抗原量最多，故颜色最深。参考管中颜色深度与待测管故颜色最深。参考管中颜色深度与待测管颜色深度之差颜色深度之差，代表，代表受检标本中抗原的量。待测管越淡，表示标本中抗原量越多。受检标本中抗原的量。待测管越淡，表示标本中抗原量越多。一、盛装比色液的容器不是使用比色皿，而是一、盛装比色液的容器不是使用比色皿，而是塑料微孔板塑料微孔板。塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作
26、，它对抗原或抗体塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作，它对抗原或抗体有较强的吸附；有较强的吸附；二、酶标仪的光束是垂直通过待测液的；二、酶标仪的光束是垂直通过待测液的；三、酶标仪通常不使用三、酶标仪通常不使用A而是使用光密度而是使用光密度OD来表示吸光度。来表示吸光度。酶标仪和普通光电比色计的不同酶标仪和普通光电比色计的不同1、仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置、低于、仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置、低于40分贝分贝的环境下。的环境下。2、为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。、为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。3、操作时环境温度应在、操作时环境温度应在1540之间，环境湿度在之间，环境
27、湿度在15%85%之间。之间。4、操作电压应保持稳定。、操作电压应保持稳定。5、操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。、操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。6、保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作、保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。空间。4 4、酶标仪工作环境、酶标仪工作环境5、酶标仪操作注意事项、酶标仪操作注意事项1、使用加液器加液，加液头不能混用。、使用加液器加液，加液头不能混用。2、洗板要干净。最好使用洗板机洗板，避免交叉污染。、洗板要干净。最好使用洗板机洗板，避免交叉污染。3、严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。、严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。4
28、、测量时勿碰酶标板，以防挤伤。、测量时勿碰酶标板，以防挤伤。5、勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完毕后要洗手。、勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完毕后要洗手。6、具有污染性、毒性和生物学危害的样品或试剂，严格按照、具有污染性、毒性和生物学危害的样品或试剂，严格按照操作说明，以防对操作人员造成损害。用后并及时清洗和操作说明，以防对操作人员造成损害。用后并及时清洗和消毒。消毒。7、不得在测量过程中关闭电源。、不得在测量过程中关闭电源。8、使用后盖好防尘罩。、使用后盖好防尘罩。9、切勿擅自拆卸酶标仪。、切勿擅自拆卸酶标仪。16.3荧光光谱仪荧光光谱仪荧光光谱仪荧光光谱仪原理应用及操作原理
29、应用及操作v西西班班牙牙的的内内科科医医生生和和植植物物学学家家N.MonardesN.Monardes，15751575年年他他提提到到在在含含有有一一种种称称为为“Lignum Lignum NephriticumNephriticum”的的木木头头切切片片的的水水溶溶液液中，呈现了极为可爱的天蓝色中，呈现了极为可爱的天蓝色( (第一次记录荧光现象第一次记录荧光现象) )。v直直到到1852年年，Stokes在在考考察察奎奎宁宁和和叶叶绿绿素素在在吸吸收收光光能能后后重重新新发发射射不不同同波波长长的的光光，而而不不是是由由光光的的漫漫射射作作用用所所引引起起的的，从从而而导导入入了了荧荧
30、光光是是光光发发射射的的概概念念，他他还还由由发发荧荧光光的的矿矿石石“萤萤石石”推演而提出推演而提出“荧光荧光”这一术语。这一术语。v18671867年年，GoppelsroderGoppelsroder进进行行了了历历史史上上首首次次的的荧荧光光分分析析工工作作，应用应用铝铝桑色素配合物桑色素配合物的荧光进行铝的测定。的荧光进行铝的测定。v1919世世纪纪以以前前，荧荧光光的的观观察察是是靠靠肉肉眼眼进进行行的的，直直到到19281928年年，才才由由JetteJette和和WestWest提出了提出了第一台荧光计。第一台荧光计。一、历史一、历史原原子子荧荧光光光光谱谱法法是是196419
31、64年年以以后后发发展展起起来来的的分分析析方方法法。原原子子荧荧光光光光谱谱法法是是以以原原子子在在辐辐射射能能激激发发下下发发射射的的荧荧光光强强度度进进行行定定量量分分析析的的发发射射光光谱谱分分析析法法。所所用用仪仪器器与与原原子子吸吸收收光光谱谱法法相近。相近。中国自主知识产权的光谱分析仪器，世界第一台原子中国自主知识产权的光谱分析仪器，世界第一台原子荧光光谱仪诞生在中国（北京海光仪器公司）荧光光谱仪诞生在中国（北京海光仪器公司）荧光光谱法分为原子荧光和分子荧光两种荧光光谱法分为原子荧光和分子荧光两种荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自荧光分光光度计的发展经历了手控式荧
32、光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，动记录式荧光分光光度计，计算机计算机控制式荧光分光光度计三个控制式荧光分光光度计三个阶段；荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双阶段；荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光Shpolskill荧光分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光荧光分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等度计等分子的活化与去活化分子的活化与去活化S S0 0S S1 1T T1 1S S2 2紫紫外外可可见见吸吸收收光光谱谱外转移外转移紫紫外外可可见见
33、共共振振荧荧光光光光谱谱内转移内转移荧光荧光系间系间窜跃窜跃磷磷光光反系间反系间窜跃窜跃迟迟滞滞荧荧光光振动弛豫振动弛豫. .无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型振动弛豫振动弛豫:Vr10-12sec外外转转移移:无辐射跃迁无辐射跃迁回到基态回到基态内内转转移移:S2S1能级能级之间有重叠之间有重叠系间窜跃系间窜跃:S2T1能级能级之间有重叠之间有重叠反系间窜跃反系间窜跃:由外部获由外部获取能量后取能量后T1S2.辐射跃迁的类型辐射跃迁的类型共振荧光：共振荧光：10-12sec荧荧光：光：10-8sec磷磷光：光：110-4sec迟滞荧光迟滞荧光:10210-4se
34、cE E0 0E E1 1E E2 2AAFF二二. . 荧光的发光类型荧光的发光类型起源于基态的起源于基态的共振荧光共振荧光热助热助共振荧光共振荧光1.共振荧光共振荧光发射与吸收线波发射与吸收线波长相同的荧光长相同的荧光E E0 0E E1 1E E2 2E E3 3AAFF起源于基态的起源于基态的直跃线荧光直跃线荧光起源于亚稳态的起源于亚稳态的直跃线荧光直跃线荧光E E0 0E E1 1E E2 2E E3 3AAFF正常的正常的阶跃线荧光阶跃线荧光热助热助阶跃线荧光阶跃线荧光E E0 0E E1 1E E2 2E E3 3AAFF起源于亚稳态起源于亚稳态阶跃激发荧光阶跃激发荧光起源基态起
35、源基态阶跃激发荧光阶跃激发荧光2.非共振荧光非共振荧光荧光的波长与激发光不同时荧光的波长与激发光不同时Stores荧光荧光:直跃线荧光、阶跃线荧光直跃线荧光、阶跃线荧光Anti-stores荧光：荧光：阶跃激发荧光阶跃激发荧光三、三、主要组成及部件的功能主要组成及部件的功能荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图荧光分光光度计工作原理基及仪器结构框图光源光源氙氙灯灯激发单色器激发单色器样品池样品池光电倍增管光电倍增管数据处理数据处理仪器控制仪器控制光源光源样品池样品池激发激发单色器单色器检测器检测器数据处理数据处理仪器控制仪器控制发射发射单色器单色器发射单色器发射单色器消除散射光消除散射光和入射
36、光的和入射光的干扰干扰荧光分光光度计的类型荧光分光光度计的类型1.历程：手控式荧光分光光度计、自动记录式荧光分光光度历程：手控式荧光分光光度计、自动记录式荧光分光光度计和计算机控制式荧光分光光度计。计和计算机控制式荧光分光光度计。2.类型：单光束、双光束荧光分光光度计、低温激光类型：单光束、双光束荧光分光光度计、低温激光Shpolskill荧光分光光度计荧光分光光度计、配有寿命和相分辩测定的荧、配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。光分光光度计等。3.主要产品：主要产品：天津天津港东生产的港东生产的F-380型、型、F-320型、型、F-280型；型；天津拓普生产的天津拓普生产的WFY-28
37、型荧光分光光度计；型荧光分光光度计；上海上海精密生产的精密生产的970CRT型荧光分光光度计；型荧光分光光度计；上海棱光生产的上海棱光生产的F96型荧光分光光度计型荧光分光光度计等等日本岛津日本岛津RF-531PC11万万日立日立F-450021.2万万原子荧光原子荧光PF6-39.9万万仪器光路图仪器光路图该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析；该型仪器可进行荧光、磷光和发光分析；在在紫紫外外光光照照射射下下会会发发生生荧荧光光的的无无机机化化合合物物很很少少，主主要要依依赖赖于于有机试剂形成的螯合物。有机试剂形成的螯合物。四四.荧光分析的应用荧光分析的应用1.无机化合物无机化合物v直接荧光测定
38、法直接荧光测定法其其中中，较较常常测测定定的的元元素素有有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到10-10;某某些些元元素素虽虽然然不不与与有有机机试试剂剂形形成成发发荧荧光光的的配配合合物物，但但是是它它会会与与发发荧荧光光的的配配合合物物争争夺夺配配位位体体，组组成成不不发发荧荧光光的的配配合合，使使其其产产生生荧荧光光熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。较常测定的元素有：较常测定的元素有：F、S、Fe、Ag、Co、Ni、Cu、Mo、Wv荧光熄灭测定法荧光熄灭测定
39、法铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定；铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定；铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定；铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定；铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定芳芳香香族族化化合合物物存存在在共共轭轭的的不不饱饱和和体体系系，是是有有机机化化合合物物荧荧光光测测定的主要类型。定的主要类型。. . 有机化合物有机化合物待测物待测物试剂试剂 exmaxemmax测定范围测定范围ppm丙三醇丙三醇苯胺苯胺紫外紫外蓝色蓝色0.12糠醛糠醛蒽酮蒽酮4655051.515氨基酸氨基酸氧化酶氧化酶3154250.0150维生素维生
40、素A无水乙醇无水乙醇345490020蛋白质蛋白质曙红丫曙红丫紫外紫外5400.066肾上腺素肾上腺素乙二胺乙二胺4205250.0010.02青霉素青霉素-甲氧基甲氧基-氯氯-(-氨乙基氨乙基)-氨基氮杂蒽氨基氮杂蒽4205000.06250.625玻璃酸梅玻璃酸梅3-乙酰氧基吲哚乙酰氧基吲哚3954700.0010.033胍基丁胺胍基丁胺邻苯二醛邻苯二醛3654700.055四氧嘧啶四氧嘧啶苯二胺苯二胺36548510-43.生物化学及生理医学方面的应用生物化学及生理医学方面的应用因荧光法有很高的灵敏度和较好的特效性，在生物化学及因荧光法有很高的灵敏度和较好的特效性，在生物化学及生理医学方
41、面有重要应用。生理医学方面有重要应用。例：例：用荧光法研究氨基酸和蛋白质。虽然游离氨基酸中能产用荧光法研究氨基酸和蛋白质。虽然游离氨基酸中能产生荧光的只有几个带苯环的氨基酸如色氨酸、酪氨酸和生荧光的只有几个带苯环的氨基酸如色氨酸、酪氨酸和苯基丙氨酸，然而，某些蛋白质含有荧光辅酶苯基丙氨酸，然而，某些蛋白质含有荧光辅酶(Fluorescentcoenzyme)，荧光辅酶生色剂可用于许多，荧光辅酶生色剂可用于许多蛋白质的荧分析中。蛋白质的荧分析中。例例：镇静剂利血平具有荧光，它还可氧化成具有更强烈荧光：镇静剂利血平具有荧光，它还可氧化成具有更强烈荧光的产物再进行分析。的产物再进行分析。紫外紫外-
42、-可见分光光度计可见分光光度计: :光源光源样品池样品池单色器单色器检测器检测器数据处理数据处理仪器控制仪器控制荧光分光光度计荧光分光光度计: :光源光源样品池样品池激发激发单色器单色器检测器检测器数据处理数据处理仪器控制仪器控制发射发射单色器单色器紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计测量池测量池(吸收池吸收池)荧光分光光度计荧光分光光度计荧光分光光度计荧光分光光度计样品池样品池样品池样品池I0ItI0ItIF,p16.3红外光谱仪原理应用及操作简介红外光谱仪原理应用及操作简介一、概述一、概述一、概述一、概述1 1、红外光谱起源、红外光谱起源、红外光谱起源、红外光谱起源1800年英国天文学家
43、年英国天文学家Hershl用温度计测量太阳光可见用温度计测量太阳光可见区内外的温度时，发现红色光以外的黑暗部分温度比可区内外的温度时，发现红色光以外的黑暗部分温度比可见光部分高，从而认识到在可见光光波长波方向末端还见光部分高，从而认识到在可见光光波长波方向末端还有一个红外光区。有一个红外光区。红外光发现以后，逐步应用到各个方面，例如红外光发现以后，逐步应用到各个方面，例如红外检红外检测器、红外瞄准镜、红外理疗仪、红外热像仪测器、红外瞄准镜、红外理疗仪、红外热像仪等。而许等。而许多化学家则致力于研究各种物质对各种不同波长红外光多化学家则致力于研究各种物质对各种不同波长红外光的吸收程度，用于推断物
44、质分子的组成和结构。的吸收程度，用于推断物质分子的组成和结构。1892年发现，凡是含有甲基的物质都会强烈地吸收波长年发现，凡是含有甲基的物质都会强烈地吸收波长3.4 m的红外光，从而推断凡是在该波长处产生强烈吸收的物的红外光，从而推断凡是在该波长处产生强烈吸收的物质都含有甲基。质都含有甲基。这种这种利用样品对不同波长红外光的吸收程度研究物质的分利用样品对不同波长红外光的吸收程度研究物质的分子组成和结构的方法子组成和结构的方法，称为，称为红外分子吸收光谱法红外分子吸收光谱法。到。到1905年前年前后，人们已系统研究了数百种化合物的红外吸收光谱，并总结后，人们已系统研究了数百种化合物的红外吸收光谱
45、，并总结了一些物质分子基团与其红外吸收带之间的关系。了一些物质分子基团与其红外吸收带之间的关系。1930年有人用群论和量子力学方法计算了许多简单分子的年有人用群论和量子力学方法计算了许多简单分子的基频和键力常数，发展了红外光谱的理论研究。基频和键力常数，发展了红外光谱的理论研究。2、红外光谱的定义：、红外光谱的定义：红红外外光光谱谱属属分分子子吸吸收收光光谱谱。样样品品受受到到频频率率连连续续变变化化的的红红外外光光照照射射时时，分分子子吸吸收收其其中中一一些些频频率率的的辐辐射射，分分子子振振动动或或转转动动引引起起偶偶极极矩矩的的净净变变化化，使使振振-转转能能级级从从基基态态跃跃迁迁到到
46、激激发发态态，相相应应于于这这些些区区域域的的透透射射光光强强减减弱弱，记记录录百百分透过率分透过率T%对对波数波数或或波长波长的曲线，即的曲线，即红外光谱红外光谱。主主要要用用于于化化合合物物鉴鉴定定及及分分子子结结构构表表征征，是是有有机机化化合合物物的的结结构构解解析析的的重重要要工工具具，根根据据有有机机化化合合物物红红外外特特征征吸吸收收频频率率，确确定定化化合合物物结结构构中中基基团团；亦亦可可用用于于定定量量分分析析：依依据据特特征征峰峰的的强度变化进行定量分析。强度变化进行定量分析。分子中基团的振动和转动能级跃迁产生的吸收光谱。分子中基团的振动和转动能级跃迁产生的吸收光谱。红外
47、光谱也称分子的振、转动光谱。红外光谱也称分子的振、转动光谱。波谱区波谱区近红外光近红外光中红外光中红外光远红外光远红外光波长波长/ m0.752.52.550501000波数波数/cm-1133334000400020020010跃迁类型跃迁类型分子振动分子振动分子转动分子转动近红外光谱区：近红外光谱区：1980Sv低能电子能级跃迁低能电子能级跃迁v含氢原子团：含氢原子团：-OH、-NH、-CH伸缩振动伸缩振动的倍频吸收峰的倍频吸收峰v稀土及过渡金属离子稀土及过渡金属离子配位化学的研究对象配位化学的研究对象v适用于水、醇、高分适用于水、醇、高分子化合物、含氢原子子化合物、含氢原子团化合物的定量
48、分析团化合物的定量分析红外吸收光谱法红外吸收光谱法：分子的振动、转动分子的振动、转动基频吸收光谱区基频吸收光谱区应用最为广泛的红应用最为广泛的红外光谱区外光谱区远红外光谱区远红外光谱区：v气体分子的转动能级跃迁气体分子的转动能级跃迁v液体与固体中重原子的伸液体与固体中重原子的伸缩振动缩振动v晶体的晶格振动晶体的晶格振动v某些变角振动、骨架振动某些变角振动、骨架振动-异构体的研究异构体的研究v金属有机化合物、氢键、金属有机化合物、氢键、吸附现象研究吸附现象研究该光区能量弱该光区能量弱,较少用于分较少用于分析析3.红外光谱区的划分红外光谱区的划分（0.751000 m）SW-NIR:750-110
49、0nm；LW-NIR:1100-2526nm光源光源光源光源单色器单色器单色器单色器吸收池吸收池吸收池吸收池样品样品样品样品检检检检测测测测器器器器数据处理和数据处理和数据处理和数据处理和仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制参比参比参比参比切光器（斩波器）切光器（斩波器）切光器（斩波器）切光器（斩波器）检测器检测器检测器检测器光源光源光源光源单色器单色器单色器单色器吸收池吸收池吸收池吸收池数据处理数据处理数据处理数据处理仪器控制仪器控制仪器控制仪器控制1 1组成结构框图组成结构框图组成结构框图组成结构框图 硅碳棒硅碳棒硅碳棒硅碳棒一）、色散型红外吸收光谱仪的基本组成一）、色散型红外吸收光谱仪的基本
50、组成一）、色散型红外吸收光谱仪的基本组成一）、色散型红外吸收光谱仪的基本组成二、二、二、二、 红外吸收光谱仪红外吸收光谱仪红外吸收光谱仪红外吸收光谱仪与双光束与双光束与双光束与双光束UV-VisUV-Vis仪器类仪器类仪器类仪器类似，但部件材料和顺序似，但部件材料和顺序似，但部件材料和顺序似，但部件材料和顺序不同。不同。不同。不同。前置放大前置放大前置放大前置放大滤光片型、分光型、傅立叶变换型等；滤光片型、分光型、傅立叶变换型等；测量光：漫反射型、测量光：漫反射型、透射测量型透射测量型、漫透射型、漫透射型TOCTOC5000A5000A总有机总有机总有机总有机碳分析碳分析碳分析碳分析仪仪仪仪二
51、）、非色散型红外吸收光谱仪二）、非色散型红外吸收光谱仪用滤光片代替单色器，用于快速、单组分的测定。用滤光片代替单色器，用于快速、单组分的测定。用滤光片代替单色器，用于快速、单组分的测定。用滤光片代替单色器，用于快速、单组分的测定。滤光型红外光度计：大气中有机物卤代烃、光气、氢氰酸、丙烯腈滤光型红外光度计：大气中有机物卤代烃、光气、氢氰酸、丙烯腈滤光型红外光度计：大气中有机物卤代烃、光气、氢氰酸、丙烯腈滤光型红外光度计：大气中有机物卤代烃、光气、氢氰酸、丙烯腈非滤光型红外光度计：单一组分如非滤光型红外光度计：单一组分如非滤光型红外光度计：单一组分如非滤光型红外光度计：单一组分如COCOCOCO、
52、COCOCOCO2 2 2 2三、三、三、三、 试样的制备试样的制备试样的制备试样的制备试样中的微量杂质试样中的微量杂质试样中的微量杂质试样中的微量杂质(0.11%)(0.11%)可以不需要进行处理，超过可以不需要进行处理，超过可以不需要进行处理，超过可以不需要进行处理，超过0.11%0.11%，就需分离出去微量杂质。，就需分离出去微量杂质。，就需分离出去微量杂质。，就需分离出去微量杂质。分离体提纯的方法：重结晶、精馏、萃取、柱层析、薄层层分离体提纯的方法：重结晶、精馏、萃取、柱层析、薄层层分离体提纯的方法：重结晶、精馏、萃取、柱层析、薄层层分离体提纯的方法：重结晶、精馏、萃取、柱层析、薄层层
53、析、气液制备色谱等。析、气液制备色谱等。析、气液制备色谱等。析、气液制备色谱等。一）、试样的前处理与提纯一）、试样的前处理与提纯一）、试样的前处理与提纯一）、试样的前处理与提纯窗片窗片试样气体试样气体试样气体试样气体气泵气泵气泵气泵对于一些难提纯的混合组分，也要尽可能地减少组分数。对于一些难提纯的混合组分，也要尽可能地减少组分数。对于一些难提纯的混合组分，也要尽可能地减少组分数。对于一些难提纯的混合组分，也要尽可能地减少组分数。二）、气体样品二）、气体样品二）、气体样品二）、气体样品气体、蒸气压高的液体、固体或液体分解所产生的气体，都气体、蒸气压高的液体、固体或液体分解所产生的气体，都气体、蒸
54、气压高的液体、固体或液体分解所产生的气体，都气体、蒸气压高的液体、固体或液体分解所产生的气体，都可以用气体池测定。可以用气体池测定。可以用气体池测定。可以用气体池测定。对于含量较低的气体还可以对于含量较低的气体还可以对于含量较低的气体还可以对于含量较低的气体还可以采用采用采用采用多重反射气体池多重反射气体池多重反射气体池多重反射气体池进行测定。进行测定。进行测定。进行测定。窗片窗片2.2.吸收池的形状吸收池的形状吸收池的形状吸收池的形状波长范围波长范围波长范围波长范围容易破碎容易破碎容易破碎容易破碎可拆卸圆形测量池可拆卸圆形测量池两面透光两面透光圆形测量池圆形测量池两面透光两面透光长方形测量池
55、长方形测量池两面透光两面透光气体测量池气体测量池两面透光两面透光微量测量池微量测量池两面透光两面透光流动测量池流动测量池两面透光两面透光3.3.使用注意事项使用注意事项使用注意事项使用注意事项三）、液体样品三）、液体样品三）、液体样品三）、液体样品用溶剂用溶剂用溶剂用溶剂CSCS2 2、CClCCl4 4、CHClCHCl3 3等溶解吸收很强的液体后，再液等溶解吸收很强的液体后，再液等溶解吸收很强的液体后，再液等溶解吸收很强的液体后，再液膜法进行测定。主要起稀释作用。膜法进行测定。主要起稀释作用。膜法进行测定。主要起稀释作用。膜法进行测定。主要起稀释作用。注意：注意：注意：注意：溶剂化效应、溶
56、剂自身的红外吸收峰。溶剂化效应、溶剂自身的红外吸收峰。溶剂化效应、溶剂自身的红外吸收峰。溶剂化效应、溶剂自身的红外吸收峰。液膜液膜液膜液膜0.015mm0.015mm以下时，可以借助以下时，可以借助以下时，可以借助以下时，可以借助窗片的附着力，使窗片的附着力，使窗片的附着力，使窗片的附着力，使其自然形成液膜。其自然形成液膜。其自然形成液膜。其自然形成液膜。1 1样品池的类型样品池的类型样品池的类型样品池的类型 固定池、可拆池、可变厚度池、微量池固定池、可拆池、可变厚度池、微量池固定池、可拆池、可变厚度池、微量池固定池、可拆池、可变厚度池、微量池2 2液体样品的制备液体样品的制备液体样品的制备液
57、体样品的制备(1)(1)液膜法液膜法液膜法液膜法固定池：用于易挥发性液体的测定。固定池：用于易挥发性液体的测定。固定池：用于易挥发性液体的测定。固定池：用于易挥发性液体的测定。可拆池：用于高沸点、粘稠型液体的测定可拆池：用于高沸点、粘稠型液体的测定可拆池：用于高沸点、粘稠型液体的测定可拆池：用于高沸点、粘稠型液体的测定液膜厚度的选择：液膜厚度的选择：液膜厚度的选择：液膜厚度的选择：脂肪族碳氢化合物脂肪族碳氢化合物脂肪族碳氢化合物脂肪族碳氢化合物0.02mm0.02mm卤化物、芳香族化合物卤化物、芳香族化合物卤化物、芳香族化合物卤化物、芳香族化合物0.01mm0.01mm含氧、氮的有机物含氧、氮
58、的有机物含氧、氮的有机物含氧、氮的有机物0.005mm0.005mm含硅、氟的有机物含硅、氟的有机物含硅、氟的有机物含硅、氟的有机物0.03mm0.03mm(2)(2)溶液法溶液法溶液法溶液法四）、固体样品四）、固体样品四）、固体样品四）、固体样品1 1 1 1压片法压片法压片法压片法KClKCl、KBrKBr在加压下呈现所谓冷胀现象并变为可塑物，在中红在加压下呈现所谓冷胀现象并变为可塑物，在中红在加压下呈现所谓冷胀现象并变为可塑物，在中红在加压下呈现所谓冷胀现象并变为可塑物，在中红外光区完全透明，因此常用作固体样品的稀释剂。外光区完全透明，因此常用作固体样品的稀释剂。外光区完全透明，因此常用
59、作固体样品的稀释剂。外光区完全透明，因此常用作固体样品的稀释剂。稀释剂的比例：稀释剂的比例：稀释剂的比例：稀释剂的比例：样品样品样品样品/ /稀释剂稀释剂稀释剂稀释剂1/1001/100稀释剂的要求：稀释剂的要求：稀释剂的要求：稀释剂的要求：纯度高、粒度小于纯度高、粒度小于纯度高、粒度小于纯度高、粒度小于2.5m2.5m、不含水分。、不含水分。、不含水分。、不含水分。油压机压力：油压机压力：油压机压力：油压机压力：51010510107 7Pa(510t/cmPa(510t/cm2 2) )；加压同时要抽去空气。；加压同时要抽去空气。；加压同时要抽去空气。；加压同时要抽去空气。光散射现象较严重
60、光散射现象较严重光散射现象较严重光散射现象较严重制得的晶片须无裂痕，局部无制得的晶片须无裂痕，局部无发白现象，如同玻璃般完全透发白现象，如同玻璃般完全透明，否则须重新制作。明，否则须重新制作。晶片局部发白，表示压制的晶晶片局部发白，表示压制的晶片厚薄不匀；晶片模糊，表示片厚薄不匀；晶片模糊，表示晶片吸潮，水在光谱图晶片吸潮，水在光谱图3450cm-1和和1640cm-1处有吸收峰。处有吸收峰。3 3薄膜法薄膜法薄膜法薄膜法(1050m)(1050m)熔熔熔熔 融融融融 法：法：法：法：对于熔点较低，而且热稳定性好的样品，可以对于熔点较低，而且热稳定性好的样品，可以对于熔点较低，而且热稳定性好的
61、样品，可以对于熔点较低，而且热稳定性好的样品，可以采用此法。采用此法。采用此法。采用此法。常用于高分子有机化合物的测定。常用于高分子有机化合物的测定。常用于高分子有机化合物的测定。常用于高分子有机化合物的测定。2 2糊状法糊状法糊状法糊状法 选取与试样的折射率相近的液体分散介质与固体粉末混合研选取与试样的折射率相近的液体分散介质与固体粉末混合研选取与试样的折射率相近的液体分散介质与固体粉末混合研选取与试样的折射率相近的液体分散介质与固体粉末混合研磨制成糊膏，然后用液体池进行测定。减少了光散射现象。磨制成糊膏，然后用液体池进行测定。减少了光散射现象。磨制成糊膏，然后用液体池进行测定。减少了光散射
62、现象。磨制成糊膏，然后用液体池进行测定。减少了光散射现象。 固体有机化合物的折射率一般在固体有机化合物的折射率一般在固体有机化合物的折射率一般在固体有机化合物的折射率一般在1.51.61.51.6。 常用的液体分散介质：常用的液体分散介质：常用的液体分散介质：常用的液体分散介质：液体石蜡油液体石蜡油液体石蜡油液体石蜡油(n(nd d=1.46)=1.46)、六氯丁二烯、六氯丁二烯、六氯丁二烯、六氯丁二烯(n(nd d=1.55)=1.55)、氟化煤油、氟化煤油、氟化煤油、氟化煤油这些液体分散介质自身也有各自的吸收峰。这些液体分散介质自身也有各自的吸收峰。这些液体分散介质自身也有各自的吸收峰。这
63、些液体分散介质自身也有各自的吸收峰。溶液成膜法：溶液成膜法：溶液成膜法：溶液成膜法：将试样溶解于沸点较低的溶剂中，然后将溶液分将试样溶解于沸点较低的溶剂中，然后将溶液分将试样溶解于沸点较低的溶剂中，然后将溶液分将试样溶解于沸点较低的溶剂中，然后将溶液分布在成膜介质（水银、玻璃、塑料、金属板布在成膜介质（水银、玻璃、塑料、金属板布在成膜介质（水银、玻璃、塑料、金属板布在成膜介质（水银、玻璃、塑料、金属板) )上，上，上，上，让溶剂蒸发后形成试样膜。让溶剂蒸发后形成试样膜。让溶剂蒸发后形成试样膜。让溶剂蒸发后形成试样膜。近红外光谱分析的应用近红外光谱分析的应用漫反射测量固体和粉末样品：漫反射测量固
64、体和粉末样品：部分光线直接经镜面反射离开外，部分光线直接经镜面反射离开外，有部分在样品内经反复的反射、吸收、衍射等过程重新从表有部分在样品内经反复的反射、吸收、衍射等过程重新从表面逸出，形成漫反射光。漫反射光包含样品物质结构、形态面逸出，形成漫反射光。漫反射光包含样品物质结构、形态等信息。等信息。无损检测、快速、样品制备简单无损检测、快速、样品制备简单。球积分仪或特定球积分仪或特定的漫反射载样装置。的漫反射载样装置。使用化学计量学、数学方法建立模型。使用化学计量学、数学方法建立模型。应用：应用：食品、农产品、高分子材料、化工制药、石油化工等的食品、农产品、高分子材料、化工制药、石油化工等的测定（相对稳定组成、具体测量目标已知的样品，且样品数测定（相对稳定组成、具体测量目标已知的样品，且样品数量较大）。量较大）。如食品中蛋白质、脂肪水分的测量、化工原料的纯度测量等如食品中蛋白质、脂肪水分的测量、化工原料的纯度测量等
