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1、实验一实验一 显微镜的基本知识及使用方法显微镜的基本知识及使用方法一、目的要求一、目的要求l学习显微镜的原理、使用方法和保养。学习显微镜的原理、使用方法和保养。l利用显微镜观察微生物标本利用显微镜观察微生物标本l学习显微数码系统的使用方法。学习显微数码系统的使用方法。l学习生物绘图。学习生物绘图。二、实验程序二、实验程序了解显微镜的构造、原理了解显微镜的构造、原理利用显微镜观察微生物标本利用显微镜观察微生物标本了解显微数码系统的使用方法了解显微数码系统的使用方法生物绘图与拍照生物绘图与拍照三、实验材料三、实验材料l微生物染色装片标本。微生物染色装片标本。l显微镜、计算机、香柏油、二甲苯或乙醇显
2、微镜、计算机、香柏油、二甲苯或乙醇乙醚混合液、擦镜纸等。乙醚混合液、擦镜纸等。四、实验步骤四、实验步骤（一）了解显微镜的构造、原理（一）了解显微镜的构造、原理l链接实验录相链接实验录相1、光学部分光学部分： 接目镜、接物镜、照明装置接目镜、接物镜、照明装置(聚光聚光镜、虹彩光圈、反光镜等镜、虹彩光圈、反光镜等)。 它使检视物放大，造成物象。它使检视物放大，造成物象。2、机械部分机械部分： 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。器、细调节器等部件。 它起着支持、调节、固定等作用。它起着支持、调节、固
3、定等作用。 显微镜的构造显微镜的构造图图1-2光学显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理倒立的虚像倒立的虚像工作原理工作原理1、放大倍数放大倍数=接物镜放大倍数接物镜放大倍数接目镜放大倍数接目镜放大倍数 2、显微镜的分辨率、显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=/2n sin(/2) 式中式中D D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.55 m) m) n: n: 物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检
4、标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。3、数值孔径、数值孔径N.A=n.sin（/2）l干燥系物镜干燥系物镜以空气为介质，如常用的以空气为介质，如常用的40以下的以下的物镜，数值孔径均小于物镜，数值孔径均小于1。l油浸系物镜油浸系物镜常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为头，其放大率为90100，数值孔值大于，数值孔值大于1。l根据物镜放大率的高低，可分为：根据物镜放大率的高低，可分为：l低倍物镜低倍物镜指指16，NA值为值为0.040.15；l中倍物镜中倍物镜指指625，NA值为值为0.150.40；l高倍物镜高倍物镜指指2
5、563，NA值为值为0.350.95；l油浸物镜油浸物镜指指90100，NA值为值为1.251.40。油镜使用的原理油镜使用的原理增加照明亮度：油镜，即油浸接物增加照明亮度：油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象增加了视野的进光
6、量，从而使物象更加清晰。更加清晰。提高分辨率：香柏油（提高分辨率：香柏油（n=1.515）为）为介质时，其折射率与玻璃相近，光介质时，其折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，从而增加进入物镜而不发生折射，从而增加数值孔径达到提高分辨率的目的。数值孔径达到提高分辨率的目的。（二）了解显微数码系统的使用方法（二）了解显微数码系统的使用方法l链接演示显微数链接演示显微数码系统软件的使码系统软件的使用方法用方法l演示拍照的方法演示拍照的方法l图片保存要求图片保存要求l建文件夹：建文件夹：D:环境环境0511班班200522200*l图片：
7、图片：格式：格式：JPG文件名：环境文件名：环境200522200*大肠杆菌（大肠杆菌（10100）（三）利用显微镜观察微生物标本利用显微镜观察微生物标本l1、观察前的准备、观察前的准备l2、低倍镜观察、低倍镜观察l3、高倍镜观察、高倍镜观察l4、油镜观察、油镜观察l5、镜检完毕后的处理、镜检完毕后的处理1、观察前的准备、观察前的准备（1 1）将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿）将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为约为3 34cm4cm。检查零件是否齐全，镜头是否清洁。检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2 2）调节光亮度）调节光亮度 （3 3）调节目镜及数值孔径大小）调
8、节目镜及数值孔径大小链接实验录相链接实验录相2、低倍镜观察、低倍镜观察将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方。使被观察的标本处在物镜正下方。转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。视野中央
9、进行观察。链接实验录相链接实验录相3、高倍镜观察、高倍镜观察l在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在正常的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在正常情况下，高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其情况下，高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其上的盖玻片。上的盖玻片。l若使用不同型号的物镜，在转换物镜时要从侧若使用不同型号的物镜，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，使载物台下降，直至物像出现
10、，再用细旋钮，使载物台下降，直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察。位，并移至视野中央进行观察。链接实验录相链接实验录相（1 1）升高镜筒，将油镜转至工作位置。在玻片标）升高镜筒，将油镜转至工作位置。在玻片标本区域滴加香柏油。本区域滴加香柏油。（2 2）从侧面注视，用粗调节器慢慢降下镜筒，使）从侧面注视，用粗调节器慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中几乎与装片接触，但不可压及装片，油镜浸在油中几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。以免压碎玻片，损坏镜头。（3 3）将光线调亮，目镜观察，用细调节器校
11、正焦）将光线调亮，目镜观察，用细调节器校正焦距，直至物像看清为止。仔细观察并绘图。距，直至物像看清为止。仔细观察并绘图。链接实验录相链接实验录相4、油镜观察、油镜观察5、镜检完毕后的处理、镜检完毕后的处理（1）观察完毕，下降载物台，取下载玻片。观察完毕，下降载物台，取下载玻片。（2）将油镜头转出，先用将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚酒精混合液）乙醚酒精混合液）擦掉残留的香擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜纸擦干残留的二甲苯柏油，最后再用干净的擦镜纸擦干残留的二甲苯（注意向（注意向一个方向擦拭）。一个
12、方向擦拭）。（3）将各部分还原。）将各部分还原。转动物镜转换器，使物镜头不与载物台转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将镜筒下降至最低，通光孔相对，而是成八字形位置，再将镜筒下降至最低，同时降下聚光器。同时降下聚光器。用柔软纱布清洁载物台等机械部分，用柔软纱布清洁载物台等机械部分，最最后套上镜罩，置阴凉干燥处存放。后套上镜罩，置阴凉干燥处存放。链接实验录相链接实验录相6、结果报告、结果报告l拍照与提交图片拍照与提交图片提交在高倍镜和油镜下观察到的微生物提交在高倍镜和油镜下观察到的微生物（*菌）形态图片，注明总放大倍数。菌）形态图片，注明总放大倍数。l生物绘图生物绘
13、图五、注意事项五、注意事项1、不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件, ,以免损坏。以免损坏。 2、镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。度。 3、观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4、观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5、拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。手拿，更不可倾斜拿。 6、显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。镜片。六、六、 思考题思考题1、使用油镜时，为什么必须用镜头油？使用油镜时，为什么必须用镜头油？2、使用油镜应特别注意哪些问题？使用油镜应特别注意哪些问题？实验结束后实验结束后请确保油镜头擦拭干净！请确保油镜头擦拭干净！请值日同学留下请值日同学留下
