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1、实验实验17 17 动物组织核酸提取动物组织核酸提取与鉴定与鉴定实验目的实验目的1. 掌握动物组织中掌握动物组织中DNA提取的原理和操作过程提取的原理和操作过程2. 了解了解DNA的组分，掌握的组分，掌握DNA的定性检测的具体的定性检测的具体方法方法3. 掌握掌握DNA纯度检测和浓度测定方法纯度检测和浓度测定方法（一）（一）DNA的提取的提取1. 取新鲜猪肝组织3 g，加入0.14 mol/L NaCl，0.015 mol/L柠檬酸纳溶液6 mL，在乳钵中加入少量石英砂仔细研磨成匀浆，或用组织匀浆器匀浆30 s；2. 将匀浆倒入离心管，4000 rpm，15 min，弃上清；3. 沉淀中加入1
2、5 mL 1mol/L NaCl，混匀，搅拌数分钟， 4000 rpm，15 min，弃沉淀；4. 上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V），剧烈振摇10 min， 4000 rpm，10 min；5. 取上层，转移至另一离心管，加入等体积95%乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕取出沉淀，或4000 rpm，10 min，离心取沉淀（DNA粗品），用1 mL蒸馏水稀释溶解DNA。实验步骤实验步骤（二）（二）DNA的鉴定的鉴定1. 取部分DNA溶液加入试管，加4 mL5%（m/V）H2SO4，再用带有长玻璃管的软木塞塞紧管口，在沸水浴中加入15 min，静置
3、数分钟水解DNA，取上清进行鉴定分析；2. 取DNA水解液1 mL，加二苯胺试剂2 mL，摇匀于沸水浴中加热10 min，观察颜色变化；3. 取0.5 mL5% AgNO3溶液，逐滴加入10% 氨水，并使沉淀刚好溶解为宜，然后逐滴加入DNA水解液观察并记录现象；4. 取0.5 mL DNA水解液，加入Vc-钼酸铵溶液1 mL，摇匀，放置10 min，有何现象？再将溶液加热，又发生什么变化，请解释之。实验步骤实验步骤（三）（三）DNA的纯度测定与定量的纯度测定与定量1. 取DNA提取液0.1 mL，用水或缓冲液稀释一定浓度，用紫外分光光度计分别测定同一样品的260 nm和280 nm的吸光值（OD），检测DNA的纯度及浓度。a) 若A260 nm / A280 nm 接近于1.8，则说明DNA样品的纯度高；b) DNA浓度（g/mL） = A260 nm 50 稀释倍数 （1/光经）c) DNA得率（mg）= DNA浓度 最终DNA原液（mL）实验步骤实验步骤1. 记录DNA提取和鉴定过程中的试验现象，结合实验原理进行分析；2. 分析DNA样品的纯度，计算DNA的浓度和得率。思考题思考题谢谢！谢谢！结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！14
