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1、A的测定的测定1目录目录叶绿素叶绿素A的测定原理的测定原理1叶绿素叶绿素A的测定方法的测定方法2叶绿素叶绿素A的测定步骤的测定步骤3叶绿素A的测定影响42叶绿素A的测定原理v有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中有机溶剂直接提取浮游生物浓缩样中的叶绿素，用分光光度计测定其吸光的叶绿素，用分光光度计测定其吸光度，根据叶绿素的特定波长度，根据叶绿素的特定波长.吸收，用吸收，用相关公式计算其含量。相关公式计算其含量。v叶绿素主要有叶绿素叶绿素主要有叶绿素A和叶绿素和叶绿素B,前前者分子式为者分子式为C55H72O5N4Mg,叶绿素叶绿素B分子式为分子式为C55H70O6N4Mg。3v 叶绿素不属于芳香族化
2、合物，不溶于叶绿素不属于芳香族化合物，不溶于水，但溶于有机溶剂（通常采用丙酮）水，但溶于有机溶剂（通常采用丙酮），叶绿素，叶绿素A呈蓝绿色，叶绿素呈蓝绿色，叶绿素B呈黄绿呈黄绿色，二者同时被提取出来。在可见光色，二者同时被提取出来。在可见光的范围，两者分别在的范围，两者分别在663nm和和645nm处波长有最大吸收。处波长有最大吸收。4叶绿素叶绿素A的测定方法的测定方法v利用分光光度法，将所得的上清液在利用分光光度法，将所得的上清液在分光光度计上，用分光光度计上，用1cm光程的比色皿，光程的比色皿，分别读取在分别读取在750nm,663nm,645nm,630nm波长处的吸光度，并以波长处的吸
3、光度，并以90%的丙的丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。进行校正。5v将所测的对应波长的吸光度，代入如将所测的对应波长的吸光度，代入如下公式计算：下公式计算：v 叶绿素叶绿素A=（1/V*L）*(11.64*（D663-D750)-2.16*(D645-D750）+0.10*（D630-D750)*V1v式中式中:D为所测的吸光度为所测的吸光度v V为水样体积为水样体积v V1为提取液定容后的体积为提取液定容后的体积v L为比色皿光程为比色皿光程6叶绿素叶绿素A的测定步骤的测定步骤v1.采集水样；必须要具有代表性。采集水样；必须要具有代表性。v2.水样
4、处理；往水样中加入水样处理；往水样中加入1%碳酸镁碳酸镁悬浊液悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。，以防止酸化引起色素溶解。水样应在低温弱光的环境下保存。水样应在低温弱光的环境下保存。v3样品浓缩；采用抽滤方式对水样进行样品浓缩；采用抽滤方式对水样进行抽滤，在抽滤器中装好乙酸纤维滤膜，抽滤，在抽滤器中装好乙酸纤维滤膜，抽完水样再抽抽完水样再抽1-2min以减少滤膜上的以减少滤膜上的水分水分, 但抽滤时绝不能抽至真空。但抽滤时绝不能抽至真空。7v4.滤膜干燥；将滤膜放置于冰箱中干滤膜干燥；将滤膜放置于冰箱中干燥燥3-4h,为样品提取做准备。为样品提取做准备。v5.滤膜研磨；将干燥好的滤膜置于组
5、滤膜研磨；将干燥好的滤膜置于组织研磨器皿中，加入少量碳酸镁粉末织研磨器皿中，加入少量碳酸镁粉末以及以及2-3ml的丙酮溶液，充分研磨，的丙酮溶液，充分研磨，提取叶绿素提取叶绿素A.v6.离心；将研磨液倒入离心试管中进离心；将研磨液倒入离心试管中进行离心，所得上清液倒入行离心，所得上清液倒入10ml的容的容量瓶中，再往下层加入量瓶中，再往下层加入2-3ml丙酮，丙酮，再离心，将上清液再转入容量瓶中，再离心，将上清液再转入容量瓶中，接着用丙酮溶液定容至接着用丙酮溶液定容至10ml,摇匀。摇匀。8v 7.测定；对提取的上清液用紫外分光测定；对提取的上清液用紫外分光光度计测量，设定好测量的对应波长，光
6、度计测量，设定好测量的对应波长，依次测定对应的吸光度，即可。依次测定对应的吸光度，即可。v8.计算；通过上述公式计算，将已知计算；通过上述公式计算，将已知和所测值代入公式中，即得到叶绿素和所测值代入公式中，即得到叶绿素A的含量。的含量。9叶绿素叶绿素A的测定影响的测定影响v叶绿素叶绿素A的测定影响主要有：的测定影响主要有：v1.叶绿素叶绿素A的降解；光强和温度对其的降解；光强和温度对其含量有较大的影响，样品最好在低温含量有较大的影响，样品最好在低温和弱光条件进行操作。和弱光条件进行操作。v2.研磨的损耗；研磨过程中会破坏藻研磨的损耗；研磨过程中会破坏藻类细胞的细胞壁，其程度由研磨和转类细胞的细
7、胞壁，其程度由研磨和转移而引起的损耗量来决定。人为误差移而引起的损耗量来决定。人为误差太大，那么重复操作的精密度就会降太大，那么重复操作的精密度就会降低。低。10v3.酸化的影响；在抽滤浓缩过程中，酸化的影响；在抽滤浓缩过程中，叶绿素叶绿素A分子的酸化造成的叶绿素分子的酸化造成的叶绿素A的的降解，所以之前在水样中就要加入碳降解，所以之前在水样中就要加入碳酸镁浊液（防止酸化）。酸镁浊液（防止酸化）。v4.离心管材料的影响；采用玻璃离心离心管材料的影响；采用玻璃离心管，因为丙酮会腐蚀塑料离心管，造管，因为丙酮会腐蚀塑料离心管，造成测定结果偏高，所以采用玻璃离心成测定结果偏高，所以采用玻璃离心管。管
8、。11叶绿素A测定的改良v测定过程中需加强质控。并要平行取样，测定过程中需加强质控。并要平行取样，平行分析平行分析 。 v测定叶绿素测定叶绿素A时，样品应该尽快测定，时，样品应该尽快测定，防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温防止过长，叶绿素降解，尽可能在低温弱光条件下进行。弱光条件下进行。v 控制好提取时间，使得提取更充分，保控制好提取时间，使得提取更充分，保证较高的提取效率。证较高的提取效率。12v这个实验叫做叶绿素这个实验叫做叶绿素A的测定方法探的测定方法探讨，实验误差较大，最佳的方法还在讨，实验误差较大，最佳的方法还在不断地深入研究中，有兴趣的同学可不断地深入研究中，有兴趣的同学可以查阅相关资料，开动大脑马达，提以查阅相关资料，开动大脑马达，提出自己的见解。出自己的见解。13感谢您的观看感谢您的观看祝你暑假愉快祝你暑假愉快14
