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1、个人资料整理仅限学习使用毕业论文 设计）学生姓名：指导教师：专业名称：园林技术所在系部：园林系2018年 3 月 9 日精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 11 页个人资料整理仅限学习使用辽宁林业职业技术学院毕业论文评审书论文摘要 由论文作者填写）摘要 ：被誉为“洋兰王后”的蝴蝶兰，几年来一直都处于花卉销售的首位，一直受到花迷们的青睐。近年来除了盆花，还大量被用作切花材料，切花中除我们常见的插花用途之外，还是制作胸花的好材料，在开会庆典场合备受瞩目，至于用来制作新娘捧花，也是目前国内流行的新风潮，深受广大消费者的好评，这就使
2、得高品质的蝴蝶兰需求量逐年增加。但目前由于专业性培育蝴蝶兰的整体水品不是很高，关键的生产环节技术薄弱，造成蝴蝶兰生产成本较高繁殖系数偏低，工业化生产效率不高，许多名贵品种短缺，品质较低，且市场售价较高。因此建立和完善蝴蝶兰组培快繁技术是解决这一问题的关键环节.本文针对植物组织培养中常见的褐变现象,详细地分析了其产生的机理及影响因素,并提出了相应的对策,为科研和生产提供了一定的理论和实践依据。指导教师评语 9蝴蝶兰没有粗大的假球茎储存养分，如果空气中温度不足，则叶面发皱且软弱无力。因此，蝴蝶兰宜在通风、湿度高的环境中栽培养护。蝴蝶兰适宜生长空气湿度为50至 80。3.4 光照尽管蝴蝶兰较喜阴，但
3、仍需要使兰株能接受部分光照，尤其花期前后，适当的光可促使蝴蝶兰开花，使开出的花艳丽持久，一般应放在室内有散射光处，勿让阳光直射。3.5 通风蝴蝶兰的正常生长需要流动的新鲜空气，尤其是在夏季高湿期，一定要以良好的通风来防暑，同时也能避免病虫害的感染。3.6 营养蝴蝶兰要全年施肥，除非低温持续很久，否则不应停肥。冬天为蝴蝶兰的花芽分化期，停肥很容易导致无花或花少。春夏期间为生长期，可每隔7 天至 10 天施用一次稀薄液肥，宜用有机肥，也可施用蝴蝶兰专用营养液，但有花蕾时勿施，否则容易提早落蕾。夏天长叶 活性的差异有关。4.2外植体部位及生理状态外植体的部位及生理状态不同外植体部位及生理状态外植体的
4、部位及生理状态不同其褐化程度不同，同时，不同时期和不同年龄的外植体在培养中褐变的程度也不同。4.3培养基成分培养基成分中的无机盐、蔗糖浓度、激素水平等对褐变的程度的影响尤为重要。另外，其pH值也与褐变程度有较大关系。4.4培养条件精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 11 页个人资料整理仅限学习使用温度过高或光照过强，均可加速被培养组织的褐变。不利环境条件都能造成细胞的程序化死亡，温度是诱导程序化死亡的主要因素1 。5 防止外植体产生褐变的对策从理论上讲 ,酶促褐变可以通过以下三种方法加以抑制:一是除去引起氧化的物质 氧；二是
5、捕捉或减少聚合反应的中间产物；三是抑制有关的酶。实际操作上，下列措施是被认为行之有效的。5.1 适当外植体的选择取材时应注意选择褐变程度较小的品种和部位作外植体。成年植株比幼苗褐变程度厉害，夏季材料比冬季及早春和秋季材料的褐变要严重。冬季的芽不易生长，宜选用早春和秋季的材料作为外植体。用无菌苗不同组织的诱导实验表明，茎最容易诱导出愈伤组织，培养2 周后长出浅黄色的愈伤组织；叶大部分不能产生愈伤组织或诱导出的愈伤组织中度褐变；而根极大部分不产生愈伤组织，诱导出的愈伤组织全部褐变。5.2 对外植体的处理通过对较易褐变的外植体材料的预处理能减轻醌类物质的毒害作用。处理方法如下：外植体经流水冲洗后，在
6、2-5 的低温下处理12-24 小时，再用升汞或70 酒精消毒，然后接种于只含有蔗糖的琼脂培养基中培养5-7 天，使组织中的酚类物质部分渗入培养基中。取出外植体用0.1 漂白粉溶液浸泡10 分钟，再接种到合适的培养基中。若仍有酚类物质渗出，3-5 天后再转移培养基2-3次，当外植体的切口愈合后，酚类物质减少，这样可使外植体褐变减轻或完全被抑制。用抗坏血酸预处理吸芽外植体，能减轻外植体褐变，从而提高芽丛诱导率。5.3 适宜的培养基培养基的成分与褐变程度有关，要考虑所选培养基的状态和类型。5.3.1适当的无机盐浓度在组织培养防止褐变所进行的实验中，4 种培养基的无机盐以改良MS( 大量元素减半 和
7、 1/2MS 的效果最好， MS 的效果较差，结果证明低浓度的无机盐可促进外植体的生长与分化，减轻外植体褐变的程度。5.3.2适当和适量的激素在组织培养过程中，培养基中添加1mg/LBA 0.5mg/L2,4-D时，愈伤组织较坚硬，增殖缓慢，易产生褐变。培养基中添加1mg/LBA 1mg/L2,4-D时，愈伤组织浅黄疏松，增殖也快。5.3.3培养基的硬度在一定范围内，琼脂用量大，培养基硬度大，褐变率低，这可能是培养基的硬度影响了酚类物质的扩散速度的缘故。5.3.4培养基中水的硬度硬度低的蒸馏水褐变率低,而使用硬度较高的自来水,褐变严重 ,甚至会出现褐变死亡。这可能是配制培养基的水改变了培养基中
8、无机盐的浓度,间接地影响了植物外植体的褐变。5.3.5培养基的pH 值在细胞培养中，pH 值为 4.5-5.0 时 MS 液体培养基可保持愈伤组织处于良好的生长状态，其表面呈黄白色，而pH 值为 5.5-6.0 时，愈伤组织严重褐变。一般来说，酸性环境(pH 值为 4.5-5.0 不利于褐变过程的发生。5.3.6培养条件如温度过高或光照过强，光照会提高PPO 的活性，促进多酚类物质的氧化，从而加速被培养的组织褐变。高浓度CO2 也会促进褐变，其原因是环境中的CO2 向细胞内扩散，细胞内 CO32- 增多， CO32- 与细胞膜上的CO32- 结合，使有效CO32- 减少，导致内膜系统瓦解，酚类
9、物质与 PPO 相互接触，产生褐变。因此，初期培养要在黑暗或弱光下进行。5.4 添加褐变抑制剂和吸附剂褐变抑制剂主要包括抗氧化剂和PPO 抑制剂。在培养基中加入偏二亚硫酸钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸、柠檬酸、二硫苏糖醇等抗氧化剂都可以与氧化产物醌发生作用，使其重新还原为酚12。由于其作用过程均为消耗性的，在实际应用中应注意添加量，其中L-半胱氨酸和抗坏血酸均对外植体无毒副作用，在生产应用中可不受限制。在细胞的培养基中，添加植酸(PA ，可防止褐变， PA 分子中众多的羟基产生抗氧化作用，使生色物质的含量下降或PA 与 PPO 分子中的 Cu2 结合，从而降低了其活力。常用的吸附剂有活性炭和聚乙烯
10、吡咯烷酮(PVP 。活性炭是一种吸附性较强的无机吸附剂，能吸附培养基中的有害物质，包括琼脂中的杂质、培养物在培养过程中分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5-羟甲基糠醛等,从而有利于培养物的生长。粉末状的活性炭与颗粒状的活性炭相比吸附性更强，一般在培养基中加入1-4g/L 的活性炭。在使用过程中应注意，尽量用最低浓度的活性炭来对抗褐变的产生，因为活性炭的吸附作用是没有选择性的，在吸附物质的同时，也会精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 11 页个人资料整理仅限学习使用吸附培养基中的其他成分，对外植体的诱导分化会产生一定
11、的负面影响。而聚乙烯吡咯烷酮(PVP是酚类物质的专一性吸附剂，在生化制备中常用作酚类物质和细胞器的保护剂，可用于防止褐变。5.5 进行细胞筛选和多次转移在组织培养过程中，经常进行细胞筛选，可以剔除易褐变的细胞。在外植体接种1-2 天后应立即转移到新鲜培养基中，能减轻酚类物质对培养物的毒害作用，降低抑制作用，使外植体尽快分生，连续转移5-6 次，可基本解决外植体的褐变问题。5 总结植物组织培养既是植物遗传工程的基础和关键环节之一，也是一种实用性极强的高新技术。通过学习植物组织培养技术我了解了了蝴蝶兰组织的常规问题和培养基成分，繁殖方法。在许多植物组织培养过程中，常遇到褐变问题。褐变主要发生在外植
12、体，在植物愈伤组织的继代、悬浮细胞培养以及原生质体的分离与培养中也经常发生。褐变产物不仅使外植体、细胞、培养基等变褐，而且对许多酶有抑制作用，从而影响培养材料的生长与分化，严重时甚至导致死亡。本文探讨植物组织培养中褐变现象的影响因素、机理及防范措施，对我们进行科学研究或工厂生产，包括植物组织的培养 ,原生质体、悬浮细胞和植物器官的培养都有着十分重要的现实意义。学习了这门课程是我受益匪浅，对我以后进一步的学习以及以后的工作都有很大的帮助。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页，共 11 页个人资料整理仅限学习使用致谢感谢刘老师对我的教
13、育培养。她细心指导我的学习与研究，在此，我要向老师深深地鞠上一躬。老师为我提供了良好的研究条件，谨向各位同仁表示诚挚的敬意和谢忱。生活的关心和帮助。感谢他对我的理解与支持。他严谨细致、一丝不苟的作风一直是我工作、学习中的榜样；他们循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪。感谢我的刘老师，这片论文的每个实验细节和每个数据，都离不开你的精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页，共 11 页个人资料整理仅限学习使用参考文献1陈超；王桂兰；乔永旭；孙晓燕；蝴蝶兰无菌播种方法的比较研究北方园艺； 2006年 01期2杨美纯；周歧伟；许鸿源；蝴蝶兰的种子培养广西农业生物科学； 2002年 04 期3范成五；黄燕芬；久兰；刘建英；蝴蝶兰无菌播种繁殖实验贵州农业科学； 2006年04期4胡海英；王建宇；陈卫民；北方地区蝴蝶兰瓶苗出瓶后的栽培与管理北方园艺；2004年 06 期5丁峰；徐建新；孙莉；朱秀琴；蝴蝶兰无菌播种快繁技术江苏农业科学； 2005 年04期6廖福琴；黄萍萍；张永柏；张添峰；蝴蝶兰无菌播种快繁技术闽西职业大学学报；2004年 01 期7洪玉；蝴蝶兰无菌播种繁殖技术中国花卉园艺； 2005年 06期精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页，共 11 页
