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1、宋内志贺菌食物中毒别离株型别调查【关键词】贺菌食物中毒别离株型别志贺菌传统分型方法主要是生化鉴定、血清学和噬菌体分型等，由于志贺菌的血清型别与局部大肠埃希菌存在穿插凝集，因此,无法表达爆发菌株间的遗传信息。为了讨论用于细菌性传染病监测、传染源追踪、传播途径调查和识别等爆发调查的适宜技术，本研究采用脉冲场凝胶电泳(pfge)方法1，对1起由宋内志贺菌引起幼儿园食物中毒中的菌株进展了分子流行病学分析。现将结果报告如下。1对象与方法1.1对象甘肃省武威市实验幼儿园食物中毒发病并住院治疗儿童307例，采集患儿粪便标本158份；采集幼儿园和患儿所住医院环境标本和幼儿园食堂剩余原料生猪肉标本39份；未采集
2、到烹调加工后的食物标本未留样。1.2方法1.2.1菌株来源1散发病例别离株:2株菌株号gs0768、gs0787别离自武威市凉州区国家监测点2022年8月散发病例；2食物中毒别离株：62株均为本次食物中毒别离株，其中患儿粪便标本别离株61株，食物原料标本别离株1株。所有菌株经鉴定均为宋内志贺菌。3参考菌株：沙门菌h9812中国疾病预防控制中心传染病所，为全国病原细菌实验室监测网络pulsenethina中的标准菌株。1.2.2主要仪器与试剂hefdriii型脉冲场电泳仪、quantityne(4.4.0)凝胶成像系统(美国bi-rad公司)；细菌浊度仪bierieuxviteklrieter、
3、seakegld胶(美国abrex公司)；蛋白酶kerk、限制性内切酶xbai(大连宝生物工程)。1.2.3pfge分型根据文献2方法进展pfge分型，略有改动：取新颖琼脂培养物到1l细胞悬液a550比浊，吸光度为1.01.2。于400l菌悬液参加20l蛋白酶k20g/l,再与等体积低溶点琼脂混合，灌制胶块。用50g/l蛋白酶k液消化2h。分别用15l纯水和三羟甲基氨基甲烷-乙二胺乙酸二钠(te；10l/ltris:1l/l乙二胺四乙酸,ph8.0)洗胶块2和4次，消化和洗涤均在54摇床130r/in中进展。然后切2胶块参加195l酶切缓冲液中,再参加5l限制性内切酶xba，37酶切2h。将胶
4、条包埋于1%seakegld琼脂糖。hefdriii电泳仪电泳。电泳温度为14,电压6v，夹角120，脉冲时间218s，电泳18h。溴化乙锭染色，凝胶图像分析系统记录和肉眼观察分析pfge图谱。1.3统计分析采用binueris4.6软件进展处理，聚类图类型运用非加权配对数学平均法(upga)构建，采用die系数衡量pfge带型之间的相似度。2结果2.1根本情况调查结果显示，所有患儿发病集中在3d内，以发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等消化道病症为主；发病儿童有2次共同食用宋内志贺菌污染的食物原料生猪肉烹制的菜肴，导致439名就餐儿童中有307名儿童发玻采集患儿粪便标本158份，检出宋内志贺菌61
5、株，检出率达27.85%；采集患儿所住医院环境标本38份，未检出致病菌；采集幼儿园食堂剩余原料猪肉标本39份，检出宋内志贺菌1株。2.2聚类分析用xbai酶切后,64株别离菌株可分为7个pfge带型，分别是xbai001xbai007。其中xbai001型46株，占测试菌株71.88%，均为本次食物中毒别离株，其中包括食物原料生猪肉别离株1株；xbai004型11株，占测试菌株的17.19%；xbai003型3株，其中1株为散发病例别离株gs0787，带型与其他2株一样，占测试菌株的4.68%；另有4种带型各1株，分别为xbai002型、xbai005型、xbai006型和xbai007型，互
6、相之间的相似性差异较大。2.3局部pfge电泳图谱(图1)图1可见，此次食物中毒患儿粪便别离株大局部与可疑食物生猪肉别离株同属于xbai001型，为本次测试菌株的主要型别；另有局部患儿别离株同为xbai004型；少局部患儿粪便别离株与散发病例别离株同属于xbai003型；患儿粪便别离株还检出xbai002型、xbai007型和xbai006型。注：参考菌株；爆发别离株中：1，10，20分别为xbai002型、xbai007型和xbai006型；3，4为xbai003型；59、1214、1619均为xbai001型；11，15，22均为xbai004型；2：散发别离株，xbai003型；21：生
7、猪肉别离株，xbai001型。3讨论脉冲场凝胶电泳(pfge)分型技术因其结果能反映菌株全基因组遗传学特征,是目前分子生物学技术除基因测序外在重复性、特异性、分辨力、准确度上非常理想的方法之一，尤其对于分析亲缘关系、追踪传染来源具有独特的优势,pfge分型已经广泛应用于分析不同来源菌株是相关的爆发还是无关联的散发3,4。但对pfge结果的分析存在人为因素，可因不同研究者而出现一定差异，目前主要以tenver等5提出的菌株同源性判别为标准，按其pfge电泳条带分为：无差异，说明为一样菌株；有13条带有差异说明菌株间有相近关系，且只有单基因的改变；46条带有差异说明菌株间可能有相近关系，表示有2个
8、独立基因的差异。本文结果显示，此次食物中毒患儿粪便别离株以xbai001型和xbai004型为pfge分型的优势型别，前者与可疑食物的原料生猪肉别离株属同一型别，并且占分析菌株的71%。结合流行病学调查结果，推断此次食物中毒主要由食物原料之一生猪肉受到宋内志贺菌污染，制作菜肴时未熟透所致。另有11株患儿别离株同为xbai004型，推测幼儿园儿童中可能存在宋内志贺菌感染病例，经亲密接触或污染食物或玩具而引起爆发。xbai003型有3株别离株，其中1株为散发病例别离株gs0787，此次感染病例是否与相隔近1个月的散发病例有关，需要进一步观察。其他4个pfge带型病例是否与此次食用带菌猪肉加工的饭菜
9、有直接关系，还是感染后因个体免疫状态、使用抗生素等作用产生菌株变异，有待于进一步证实。【参考文献】1sainathanb,barretttj,huntersb,etal.pulsenet:theleularsubtypingnetrkfrfdbrnebaterialdiseasesurveillane,unitedstatesj.eerginfetdis,2001,7:382-389.2perkl,lueyk,bird,etal.develpentandvalidatinfapulsenetstandardizedpulsed-fieldgeleletrphresisprtlfrsubtypingfvibrihleraej.fdbrnepathgdis,2022,3:51-58.3汪皓秋,潘劲草,孟冬梅,等.杭州甲型副伤寒别离菌株脉冲场凝胶电泳分型j.中国公共卫生,2022,23(3):369-370.4刘红露，张京云，冯泽惠，等.脉冲场凝胶电泳分型技术在追溯139霍乱传染来源中的应用j.中华流行病学杂志，2022，27：104-105.
