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1、原种和栽培种的接种和培养培养基经配制和灭菌后，便可进行接种。为避免接种过程中污染杂菌，接种工作要在无菌室 或接种箱中进行。无菌室的体积要求不宜过大，一般68立方米，能供一、二人操作即可。室 内装有紫外线杀菌灯，门窗关闭后里面的空气能与外界隔绝，经消毒就能造成无菌条件。若没有 无菌室也可用洁净的小房间代替，但必须进行严格的消毒灭菌。接种箱是代替无菌室的密闭透明 小箱。具有体积小，简单轻便，消毒彻底等优点。一般长 100 厘米，宽60 厘米，高5060 厘米， 顶部向两边倾斜，安装透明玻璃。箱里装有紫外线杀菌灯，或用福尔马林和高锰酸钾混合熏蒸灭 菌，人在箱外，只用两只手伸入箱内进行接种操作，效果好
2、，成功率高。无菌室和接种箱的灭菌方法，常用的有下列几种：1. 紫外灯灭菌 用于空气中灭菌， 30瓦紫外灯距桌面1米照射15分钟或30分钟。2. 化学药品灭菌 所用化学药品的种类甚多，主要的是：（1）70酒精 用于接种针以及接种人员的手和玻璃器具的表面杀菌。（2）5石碳酸 用于空间喷雾灭菌。（3）0.1升汞水 用于分离材料的表面消毒。（4）甲醛溶液 用于空间熏蒸灭菌，可将福尔马林放在瓷器中，直接加热使其蒸发，或于容 器中先加入高锰酸钾，其用量为福尔马林重量的 10以上，然后倒入福尔马林，使其蒸发，一 般每一立方米体积用 10毫升福尔马林即可。3. 火焰灭菌 用于接种针或其他金属用具的灭菌，可直接
3、在酒精灯火焰上烧红。此外，在接 种过程中，将试管口，菌种瓶口等采用通过火焰的方式也可达到灭菌的目的。培养基经灭菌之后，在无菌室或接种箱中，用接种针在酒精灯火焰上，迅速从试管母种中挑 一小块带有培养基的菌丝体，放在瓶内的培养基上即成原种。接种后的原种应放在培养室中培养， 培养室的大小要适当，过大保温比较困难。四周墙壁用砖砌，石灰粉刷，地面铺水泥，设有通气 窗，最好有调温调湿装置，并严格做好消毒灭菌。温度保持在2326C之间，培养一个月左右， 待菌丝长满全瓶后，即可用来接栽培种。栽培种的培养基其配制方法和灭菌等大致与原种相同，但装瓶应满些，至瓶肩处为宜。一般 每瓶原种可转接栽培种 6080 瓶。4
4、6f2UK1 原种2t原种置于木架上 3栽培种培养基4取出少量 原种5接入栽培种培养基內 6塞好棉塞?接种后保温培养 扩种的操作过程扩种的操作过程母种分离材料的选择1.子实体的选择无论是用作孢子分离或组织分离的子实体，都要从产量高，长势好，适应性强，无杂菌虫害 的群体中，选择朵大，生长健壮的单生子实体作为分离的材料。选作分离的子实体，成熟度要适当，如蘑菇、草菇具有菌膜，最好选菌膜将破而未破的成熟 度，这种子实体发育已成熟，子实层又未受污染，因此能很快散出大量的无菌孢子。对没有菌膜 或菌膜自幼已破的食用菌，如香菇、平菇等，则以选取八分熟，正在释放孢子的个体为最好；因为刚从担子弹射出来的孢子基本上也是无菌的。2.菇木和耳本的选择木生食用菌如香菇、银耳、黑木耳等，可以从它们生长的基质，即菇木和耳木作为分离的材 料。选择时，应从野生或人工栽培场所挑选子实体生长健壮，朵大，长势好，菌丝在段木中发育 旺盛，材质较为结实，尚未腐烂，一般是接种后一年内已出菇、出耳而无杂菌害虫感染的幼龄菇 木或耳木为最好。采去子实体后，截取适当部位，挂于通风处风干后，供分离时用。
