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1、、目的与要求1、学习并掌握临时装片的制作方法和步骤。2、学习徒手切片技术。3、了解细胞基本结构和厚角组织的特点。二、材料和用品1、自备材料：解剖器（镊子 、解剖针、单面刀片或双面刀片）；洋葱鳞茎、青红椒、 芹菜叶柄、女贞叶片或其它植物的叶片、胡萝卜块等。2、其它材料和用品：显微镜、盖玻片、载玻片、纱布、蒸馏水、吸水纸、 10%甘油水 溶液、50%甘油水溶液、纯甘油、碘碘化钾稀溶液、培养皿、吸管。三、实验内容1、临时装片的制作方法2、徒手切片方法四、实验方法 要观察、研究植物细胞、组织和器官的微细结构，以及一些很微小的藻、菌植物等，这 些用肉眼是无法看到的，必须借助于显微镜来观察，要用显微镜观察
2、，首先必须制成各 种制片，放在显微镜下才能观察。制片的方法很多，这里着重介绍临时装片法和徒手切 片的方法技术。1、临时装片的制作方法 临时装片法是用少量的新鲜植物材料，如单个细胞、薄的表皮或切成的薄片以及其它小 的或扁平的材料（如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体和孢子囊、纤细的苔藓植 物等等），把这些材料放在载玻片的水滴中，再盖上盖玻片做成玻片标本的方法。这种 方法制成的标本，可以保持材料的生活状态和天然的色彩。此法一般多做为临时观察使 用，也可根据需要选择适宜的染料染色，制成永久制片或用某些化学试剂作组织化学反 应。临时装片的制作方法和步骤如下：（1）清洁玻片：将盖玻片和载玻片用清水洗净
3、，再用纱布擦干，擦玻片时用左手食指 和拇指夹住玻片的两边，右手食指和拇指包住纱布，同时擦到的玻片的两面，用力要均 匀。 注意：由于盖玻片很薄，所以擦盖玻片时要特别小心，用力要轻，右手食指和拇指要轻 轻捻动，以免把盖玻片捏破。（2）放置材料：先将载玻片平放在桌面上，于载玻片中央滴一滴蒸馏水或稀甘油，然 后用镊子镊取或吸管吸取少量要观察的材料（如洋葱鳞叶表皮或水绵）,放在载玻 片中央的水滴或甘油中，再用镊子和解剖针将材料展平或分散开，勿使材料折叠或干燥。（ 3）加盖玻片及其它处理：为了避免产生气泡 ，盖盖玻片时，应该以大拇指和食指拿 着盖玻片的两个角或用镊子夹住其一端，使盖玻片的一边先与载玻片上的
4、水滴边缘接 触 ，而后徐徐放下另一边，当盖玻片被夹持的一边将贴近载玻片时，则可放手或抽出 镊子，使其自然轻轻复盖，这样可以使盖玻片下的空气挤出，免生气泡。注意载玻片中 央的液滴要适中，既要使其充满盖玻片，又要不会使盖玻片浮动或使液滴从盖片下外溢， 假如水不够，可用吸管小心地从盖玻片的边上再滴入一小滴水，使它和盖玻片下面的水 相接触；如果水太多，溢出盖玻片，则可用吸水纸吸去，盖玻片的上面，一定不能被水 浸湿，如果发生这种情况，应该小心地取下盖 玻片，擦干以后，再按上述方法重新盖 上。这样做好的装片，便可在显微镜下进行观察。根据需要，临时水装片做好后还可以 进行简单的染色（例如用碘碘化钾或番红等来
5、染色），其方法是直接在盖玻片的一侧 加一滴染液，用吸水纸条在盖玻片的另一侧吸水，引入染液，以使盖片下的材料染上色。 注意：临时装片根据需要可以水封片或以甘油封片，凡用以临时观察，不欲久留的装片 均可用水封片，制成水装片；需要提前半天或一天就备出的装片或者观察后须保留一定 时间的装片，为防止水分蒸发，出现材料收缩现象，则适宜用甘油封片，制成甘油封片， 用甘油封片时，保留时间短者，可用 10%甘油水溶液，保留时间长者则须从10%甘油中 再转入 50%甘油水溶液中或在此液中浸一小时后再转入纯甘油中封片。用甘油做临时装 片的优点是不仅封片保留时间长，且有加强材料透明的作用。本实验以洋葱（或大葱）鳞茎内
6、表皮为材料，通过撕皮法做临时装片，用碘碘化钾做 染色剂，在观察做片效果时同时了解细胞的基本结构，如细胞壁、细胞质、液泡、细胞 核等。2、徒手切片法 徒手切片法简称手切片法，即手拿刀片将材料切成能在显微镜下观察其内部结构的薄片 的方法。是植物形态解剖学实验及研究中最简单和最常用的方法，也是最重要的基本技 能之一。徒手切片的材料一般是新鲜的，有时也可用预先固定好的。这种切片方法虽然 有其缺点，如：不易做到将整个切面切得薄而完整，往往切出的片子厚薄不一；过软过 硬的材料比较难切。但其优点很多，如：工具简单，只要有一把锋利的剃刀或双面刀片 就够了；方法简便，容易学会；节省时间，只要有现成材料，可以立刻
7、用刀片切成薄片， 当即观察，即便要染色，时间也不长；还有一个独特的优点就是可以看到组织细胞内的 自然结构和天然颜色。 徒手切片的方法见图 22。一般材料的徒手切片方法（1）将材料切成长约23厘米的小段，削平切面。（ 2 ）左手大拇指和食指的第一关节指弯夹住材料，使之固定不动摇。为防止刀伤，拇 指应略低于食指，并使材料上端超出手指 23 毫米，不可高出过多，否则切片时材料 容易动摇，也不容易切薄。（3）右手大拇指和食指捏住刀片的右下角（刀片要非常锋利，双面刀片必须是新用的）， 刀口向内，并与材料切面平行，切片前先将材料和刀口上蘸些水，使之切时滑润。（4）切的方法，以刀口自外侧左前方向内侧右后方拉
8、切，这样可以边切边看清切片的 进展情况，同时切起来也比较顺手。切片时只用臂力而不要用腕力及握刀指关节的力量， 左手保持不动，不要两手同时拉动，两手不要紧靠身体或压在桌子上，并且动作要敏捷， 材料要一次切下，切忌中途停顿或推前拖后作“拉锯”式切割。关键是要切得薄而平。 如此连续切片，切下数片后，用湿毛笔将切片轻轻移入培养皿的清水中备用。（ 5）在切片过程中刀口和材料要不断蘸水，以保持刀口锋利和避免材料失水变形。所 切的材料和刀片一定要保持水平方向，不要切斜，如果切斜，即使很薄，但由于细胞切 面偏斜，同样影响观察。（ 6 ）切下足够多的切片后，挑选薄而平的切片做成临时装片供镜检，必要时也可以制 成
9、永久装片。挑选切片时，不一定要材料切得很完整，只要切得很薄就行，有时只要有 一小部分就可以看清其结构了，如玉米茎横切片，只要有四分之一或者更少的小片，就 可以看出内外维管束的大小、多少及每个维管束的构造。因此切下的切片不是每一片都 适用，也不是只有全面切得薄的才能用，要根据需要进行选择，一次可多选几片置于载 玻片上，制成临时装片，通过镜检再进一步选择理想的材料用以观察。柔软和坚硬材料的徒手切片方法 过于柔软的材料，如植物的叶片或其他薄而微小的材料，难以直接执握手切，则须夹入 坚固而易切的夹持物中切。常用的夹持物有胡萝卜根（用胡萝卜时可将中间硬心即木质 部切去用其余部分）、土豆块茎、接骨木的髓部
10、及通草髓等。但须要注意的是通草髓遇 水既变软，可将其保存在酒精中备用。切前先将夹持物切成长方小体，上端与纵轴垂直面削平，若被切材料属叶状体一类的薄片，将夹持物从上至下纵切一缝，材料夹于其中 即可，如不是叶状体，即将材料夹于其中，或根据材料不同在缝里挖一个和材料形状相 似、大小相同的凹陷，把材料夹在凹陷里。然后用手握住夹持物，采用上述方法将夹持 物和其中的材料一齐切成薄片，除去夹持物的薄片，便得到材料的薄片。坚硬的材料要经软化处理后再切。软化的方法：一种是对于比较硬的材料，先把材料切 成小块，后进行煮沸，经34小时煮沸后，再浸入软化剂（50%酒精：甘油=1 ： 1） 中数天至更长些时间，而后再切
11、。另一种，对于已干或含有矿物质，比较更硬的材料， 要先在 15%氢氟酸的水溶液中浸渍数周，充分浸洗后，再置入甘油里软化后再切。 本实验主要以青红椒、芹菜叶柄为材料做徒手切片练习。并通过青红椒切片结果装镜观 察来了解细胞基本结构中叶绿体和有色体；（提示：青椒切片细胞内绿色的小颗粒为叶 绿体，红椒切片细胞内红色的小颗粒为有色体。）通过芹菜叶柄切片结果装镜观察来了 解厚角组织的结构特点。（提示：芹菜切片在显微镜下观察，在棱角处稍靠内方有一团 具有珠光色彩的组织即为厚角组织。在高倍镜下观察，可见其细胞壁厚为角隅处，其细 胞壁的性质是初生壁性质，主要成分为纤维素，有强烈的吸水性，故显微镜下有珠光色 彩。
12、）五、综合分析1、临时装片和徒手切片的特点和适用范围各是什么？2、做临时装片盖盖玻片时应注意什么？3、徒手切片法切取柔软和坚硬材料时应怎样进行？六、实验报告 自选材料制做几种不同材料的临时装片和徒手切片，写出你所做装片的步骤和要点。学案六实验一可溶性还原糖脂肪蛋白质的鉴定一、解读两纲1. 识记鉴定实验所用的材料，懂得选材的要求。2. 掌握实验原理、步骤，理解实验目的、方法。3. 学会制备生物组织样液，正确选用鉴定试剂，并能按规范的要求操作，独立完成鉴定 工作。4. 明确观察对象，正确说出鉴定过程中样液的颜色变化，并能用准确的语言解释实验现 象，作出实验结论。5. 能熟练制作徒手切片，临时装片和
13、使用低倍显微镜，了解高倍显微镜的使用方法。6. 具备验证相关生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理；能 对一些生物学问题进行初步的探究性研究。二、高考热线1. 题型以选择题为主，也可能以简答题出现，重点是以对比的方式考查相关实验的异同 点。2. 以教材实验为依据，设置实验设计题是今后考查的重点，如“设计实验证明淀粉酶是 蛋白质”，就是依据教材中的实验3 的原理和步骤。三、学法指点1. 运用对比的方法认识三种物质的鉴定原理、过程及注意事项。2. 对比三种物质鉴定过程中的相同点和不同点，重点掌握试剂使用上的区别。3. 根据所学的原理鉴定类似物质，设计相应的实验程序。四、教材梳理
14、(一) 实验原理 生物组织中含有可溶性还原糖(如、)、脂肪、蛋白质等化学成分，可分别与某些化学试剂作用产生特定的。(1) 可溶性还原糖+试剂一-砖红色沉淀可溶性还原糖+班氏糖定性试剂一-(2) 脂肪+染液染成橘黄色脂肪+苏丹W染液染成(3) 蛋白质+试剂一-溶液呈紫色(二) 实验目的1. 初步掌握鉴定可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。(三) 实验材料(四) 方法步骤1. 可溶性还原糖的鉴定(1) 制备组织样液：苹果切块、研磨、。(2) 鉴定组织样液：1支试管+2mL+2mL,振荡试管，(溶液色？)，2min左右，观察溶液颜色变化。色_棕色 色)。2. 脂肪的鉴定(1) 切片制作：用花生子叶
15、作徒手切片。(2) 染色：1块载玻片+切片+ 3滴染液，3min后吸去染液+ 2滴50%溶液去浮色，吸去后+ 2滴 ，盖盖玻片。(3) 镜检鉴定：先用低倍镜观察，找到子叶最薄处，再用高倍镜观察。(圆形的脂肪颗粒为色，。3. 蛋白质的鉴定(1) 制备样液：大豆切片、。(2) 鉴定：1支试管+2mL黄豆组织样液+2mL，振荡试管(溶V 色)，+4滴，试管，观察溶液颜色变化。(色f色f色，。(五，结论与讨论1.结论：从斐林试剂与苹果样液作用、苏丹III染液与花生种子作用、双缩脲试剂与大 豆样液作用的颜色变化可以得出：2. 讨论鉴定依据。因为某些化学试剂与生物组织中的有关发生一定的化学反 应，产生有固定颜色的新化合物。故可根据待检物与某些化学试剂反应的,如 橘黄色、色、色等，鉴定生物组织中含有、可溶还原糖和自我校对原理：葡萄糖果糖麦芽糖颜色反应斐林砖红色沉淀苏丹III红色 双缩脲 步骤:过滤苹果组织样液 刚配制的斐林试剂淡蓝 水浴加热 淡蓝砖红苏丹III酒精 蒸馏水橘黄过滤双缩脲试剂A乳白双缩脲试剂B 乳白紫色结论与讨论：苹果、花生种子和大豆中分别含有可溶还原糖、 脂肪和蛋白质化合物固有颜色 砖红紫色脂肪蛋白质五、疑难精析1生物组织中的还原糖是指分子结构中含有还原性基团（如游离醛基或酮基）的糖，如 葡萄糖、麦芽糖、果糖，淀粉、蔗
