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1、新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果处置流程1. 目的 规范辖区内各医疗卫生机构和第三方检测机构新型冠状病毒核酸检测实验室对新冠核酸可疑或阳性结果复检及报告处置流程，确保检测结果的准确、及时。2. 适用范围 适用于辖区内医疗卫生机构或第三方检测机构新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果的复测或复核处置。3. 职责3.1 检测人员：熟悉本实验室开展的新型冠状病毒检测项目的样本采集、保存、运输、检测、结果报告、上送等技术要求，并按操作规程做好样本的接收、登记、处理、检测、保存和运送工作。3.2复核人员：负责检测结果的分析、核实，加强检测过程中的质量监督、监控。3.3签发人员或实验室负责人：加强实验室检测
2、质量控制和生物安全管理，确保实验室检测人员按照规范进行工作，组织开展结果分析和样本复采、复检、上送，及时报告结果。4.操作程序4.1 处置流程启动条件当实验室检测人员在检测过程中发现有样本新冠病毒核酸orf1ab/N双靶标基因强阳性、弱阳性、灰区或单靶基因阳性，立即启动该处置流程。4.2 处置步骤4.2.1 首先应立即分析本次实验结果成立与否当以下条件均符合时，本次实验室结果成立：试剂盒本身的阴性对照和阳性对照扩增结果图与Ct值均应符合试剂盒说明书的要求；批次同步检测的弱阳性质控有典型S扩增并且Ct值在控，阴性质控对照无扩增；样本的人源内参靶标有正常扩增（如样本新冠双靶基因强阳性扩增，部分试剂
3、盒的人源内参可能存在弱扩增或无扩增的现象）。当以上对照或质控异常时，本次实验结果不可信。4.2.2 正确判读Ct值 应根据扩增曲线与读数Ct值相结合进行判读，扩增曲线应为明显S型曲线，当扩增曲线起峰的位点的Ct值与仪器生成读数的Ct值基本一致时，可按照该Ct值读取结果；当扩增曲线起峰的位点的Ct值与仪器生成读数的CT值偏差较大时，需将该靶标基线位置整至至阴性对照之上或持平，在扩增曲线刚起峰的拐点位置读取Ct值。4.2.3 排查是否污染当发现样本的新冠病毒核酸检测结果阳性或疑似阳性时，首先要分析排查是否污染，考量样本人群来源、标本类型、扩增曲线、Ct值，加样和加模板过程中与阳性对照的相对位置，当
4、批次、当天或近期有没操作强阳性样本或强阳对照情况，扩增过程中及实验结束后有没发生PCR反应产物管裂开、爆管溢出等因素，经实验室经验丰富的检测人员或主管或负责人综合分析判断。无污染：当样本新冠orf1ab/N双靶基因结果呈典型的S型扩增曲线，Ct值低于阳性对照（扩增曲线在阳性对照之前）时，如近期无操作过强阳性标本或对照、无PCR反应产物溢出等异常情况，且样本加样及加模板位置均离阳性对照较远，操作过程符合规范要求，交叉污染的可能性较低，同时如标本来源于高风险人群或密接者，标本为鼻咽拭子，此类阳性结果发生污染的几率很小，基本可排除污染的可能性。可能污染：当样本新冠orf1ab/N双靶基因结果呈弱阳性
5、扩增曲线或单靶基因阳性或处于灰区，Ct值等于或大于阳性对照（扩增曲线在阳性对照之后），且样本加样及加模板位置均离阳性对照较近，加上检测人员熟练程度不高，操作不够规范，存在交叉污染的可能，如近期实验室人员曾操作过强阳性标本或对照、PCR反应管产物溢出等异常情况，存在环节气溶胶污染的可能，而标本来源于低风险人群，此类样本的阳性结果发生污染的可能性较高。4.2.4 样本复采对于可疑阳性或阳性结果，均需高度重视，立即由经验丰富、技术熟练的采样人员重新采集符合要求的样本，旋紧管盖，三层包装好，用生物安全转运箱立即送回实验室：需同时采集鼻咽拭子、咽拭子、粪便或肛拭子等三类样本一式两份，使用植绒拭子采集、非
6、灭活型病毒保存管保存，用于核酸复查及备用于上送省进行病毒分离与测序溯源工作；使用不含抗凝剂的真空采血管采集3-5ml血液标本，析出血清后用于新冠抗体检测。必须首要采集鼻咽拭子，使用专用的、细软杆的植绒拭子，确保拭子到达鼻咽部位，旋转拭子并停留一定的时间，把拭子放入病毒保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部位避免污染，旋紧管盖。采集咽拭子时，可分别用两根拭子擦拭咽后壁、两腭弓及扁桃体，来回涂抹次数及停留的时间可适当增加，把拭子放入病毒保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部位避免污染，旋紧管盖。采集粪便时，用植绒拭子挑取黄豆大小粪便标本放入病毒保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触
7、部位避免污染，旋紧管盖。采集肛拭子时，拭子插入肛门3-5cm（婴幼儿童2-3cm），旋转停留一定时间，再把拭子放入保存管，在拭子折点处折断，弃去尾部，手接触部位避免污染，旋紧管盖。如隔离人员或疑似阳性人员有痰液，可留取痰液标本，保存在非灭活型的病毒保存管中送检。对于重症住院患者，如必要则采集肺泡或支气管灌洗液标本，保存在非灭活型的病毒保存管中送检。4.2.4 样本复测和报告对于可疑或阳性结果的标本，实验室需安排技术和意识过硬的检测人员重新提取原样和新样本的核酸，用1-2种质量可靠的核酸检测试剂进行复测，尽可能使用二步法、且灵敏度小于500拷贝/ml新冠荧光PCR检测试剂，通过人员比对、试剂比对
8、、仪器比对等形式加强质量控制。检测前处理时，检测人员需对严格核对复采样本信息，做好三级防护、在二级生物安全柜中充分振荡病毒保存管，然后3000rpm离心5min把管盖及管壁的液体离心下来，再双人在生物安全柜中开盖、取样、加样，规范和小心操作，尽最大可能避免样本交叉污染。提取时，使用提取回收率高的核酸提取试剂进行平行样测试，保证样本核酸提取纯化的质量。扩增检测时，至少使用双试剂、平行样测试。当重新采集的样本和原样复测结果依然新冠双靶标基因阳性、弱阳性、灰区、或单靶基因阳性，经实验室项目负责人或主管或实验室科主任分析审核无误后，向单位相关科室报告。并立即把原样本、重新采集的（鼻咽、口咽、肛拭子）标
9、本上送。4.2.5 样本上送市CDC各医疗卫生机构应立即通过院感或医务科与肇庆市CDC传染病防治科联系、报告个案情况，并立即把重新采集的（鼻咽、口咽、肛拭子）标本和原样本上送肇庆市CDC实验室，每份样本需用独立包装袋封装，按A类感染物质三层包装安全运输。出发前，送检单位需和市CDC微生物检验科取得联系，告知运送人员联系方式、运送样本的数量和类型、出发时间和估计到达的时间。血标本上送肇庆市第一人民医院检验科，开展新冠抗体检测，每份样本需用独立包装袋封装，按A类感染物质三层包装安全运输。出发前，送检单位需和市第一人民医院检验科取得联系。4.2.6 市CDC复核检测市CDC实验室在样本接收前尽可能向
10、送样单位了解样本信息，特别是标本的人群来源、样本类型、数量、CT值等，指导送检单位用非灭活病毒采样管，植绒拭子采集多部位样本（鼻咽拭子、咽拭子和肛拭子），使用不含有抗凝剂的真空采血管采集血液标本3-5ml。病毒实验室人员在做好相应生物安全防护要求的条件下，仔细检查样本的包装、类型、数量、状态及与送检单信息的一致性，如均符合检测技术要求，则在检测样品接收信息表中填写完整的样本交接记录，记录收样时间，送检人、收样人签名确认。收样时如发现样本有渗漏现象，立即拍照并通知送检单位该样本不及格，需退回与重新采样；如无渗漏现象，核酸提取前充分震荡样本。采取每一支样本作双份核酸提取，采用24套有效期内不同厂家
11、的实时荧光RT-PCR核酸检测试剂检测，每孔提取液再作双份平行核酸检测。如市CDC复核阳性，则联系医疗卫生机构重新采集非灭活型的鼻咽、口咽、肛拭子标本以及非抗凝血标本，在规定时间内和原样一起上送省疾控中心。在未上送前，将复检阳性样本和重采标本放置于-70以下专柜单独保存，双人双锁。如复核结果无法判定阳性，则联系加强监测频次，定期采集样本复测。4.2.7 上送省CDC复核或溯源分析市CDC对于复核阳性或无法确定的标本，应及时将重新采集的样本和原样上送省CDC，进行复核或开展病毒分离和基因测序溯源分析工作。4.2.8 本地感染个案的应急处置紧急应对对于本地发现的疑似阳性或阳性感染者，各医疗卫生机构
12、应快速排除污染可能，复采、复测和上送复核做到三同时，尽最大的可能缩短市县区之间的时间差，尽快明确检测结果，为疫情处置争分夺秒。新型冠状病毒核酸检测可疑或阳性结果处置流程图见附件15.新型冠状病毒实验室检测结果的判断依据5.1根据新型冠状病毒肺炎防控方案(第七版)之附件3实验室检测技术指南，实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：（1）同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新采样，重新检测。如果仍然为单靶标阳性，判定为阳性。（2）两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性，或同种类型标本两次采样
13、检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性。核酸检测结果阴性不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。5.2 血清抗体检测结果的应用血清抗体检测（胶体金、磁微粒化学发光、ELISA）用作新型冠状病毒核酸检测阴性病例的补充检测，在疑似病例诊断中与核酸检测协同使用。实验室确认阳性病例需满足血清新型冠状病毒特异性IgG抗体阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高。6. 支持性文件6.1关于印发新型冠状病毒肺炎防控方案(第七版)通知 联防联控机
14、制综发2020229号6.2 医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行 第二版）1附件1单靶标阳性或灰区重点人群样品-20保存7天阴性新冠病毒核酸检测可疑或阳性结果处置流程图重采非灭活管采集：鼻咽、口咽、肛拭子或粪便阴性实验室自查阳性阴性双靶标阳性真空管采集血液标本3-5mL连同初次样品一同送XX市疾控中心送肇庆市第一人民医院双试剂平行检测血清学检测重新采样：鼻咽拭子、口咽拭子、肛拭子或粪便+血液样品一式两份，一份的核酸类检测样品用于XX疾控中心检测，血液样品送XX市第一人民医院检测。另一份连同阳性样品上送广东省疾控中心同步检测阳性阳性阴性延长医学观察期限增加核酸与康体检测频次样品保存同上样品高压灭菌处理
