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1、第五章 药物的杂质分析第一节 药物中的杂质与杂质限量一、药物的杂质与纯度药物纯度的综合评定：外观性状、理化常数、杂质检查、含量测定 药物的含量不可用100%-杂质含量%表示二、杂质的来源1、原料药生产中引入的杂质示例：安乃近的生产可能引入的杂质为中间体MAA中存在少量的AA与甲醛、亚硫酸氢钠缩合产生的4N去甲基安乃近，以及微量MAA、双甲氨基安替比林甲烷(MAA-CH2-MAA)、甲醛亚硫酸氢钠和亚硫酸氢钠等。 （试剂、溶剂、还原剂等）2、制剂生产中引入的杂质示例：肾上腺素注射液抗氧剂焦亚硫酸钠稳定剂EDTA-2Na3、药物贮藏中引入的杂质易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双
2、键等氧化反应：利血平氧化产物无降压作用水解：盐酸普鲁卡因水解产物对氨基苯甲酸及二乙氨基乙醇 严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安全、有效的一个重要方面 在药物的纯度研究中，必须重视异构体和多晶型对药物有效性和安全性的影响，应控制药物中低效、无效以及有毒的异构体和晶型。三、杂质的种类与分类四、杂质的限量1、定义：药物中所含杂质的最大允许量2、表示：百分之几或百万分之几（ppm）3、计算： 药物中的杂质在不影响疗效和不发生毒性的原则下允许有一定限量。通常不测定其准确含量，只检查杂质的量是否超过限量，所以称为杂质的限量检查。 检查方法：取一定量杂质对照品与一定量供试品在相同条件下处理后，比较结果
3、，以确定杂质含量是否超过规定量。药物中杂质的限量除考虑杂质本身的性质外，还要结合实际的生产水平，参考各国药典的标准来制订。五、检查方法1、对照法注意事项：平行操作原则。 2、灵敏度法在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下不得有正反应出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定 乳酸中草酸盐检、葡萄糖中亚硫酸盐与可溶性淀粉检查3、比较法取一定量供试品依法检查，测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较，不得更大。 肾上腺素中酮体的检查：取本品，加盐酸溶液（92000）制成每 1ml 中含 2.0mg 的溶液，照分光光度法在 310nm的波长处测定，吸收度不得过 0.05。示例1 茶苯海明
4、中氯化物的检查已知：，求：L？解：示例2 谷氨酸钠中重金属的检查已知：S1.0g，C10g/ml，L10106，求：V？解：示例3 肾上腺素中酮体的检查已知：=435，A=0.05，求：L？解： 计算中应注意单位一致稀释体积 ppm的表示方法第二节 药物中杂质的检查方法药物中杂质检查的原理一、化学法与试剂反应产生颜色：铁盐检查与试剂反应产生沉淀：硫酸盐检查与试剂反应产生气体：碳酸盐检查例：苄氨噻嗪中芳香第一胺的检查分子结构中无芳香第一胺基，不能发生重氮化-偶合反应，而芳香第一胺杂质可以发生反应而产生颜色，采用分光光度法检查。可用于配置检验亚硝酸的显色剂（还含有对氨基苯磺酸），作用时亚硝酸先把对
5、氨基苯磺酸重氮化，在与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶联成紫红色的偶氮。二、光谱方法依据药物和杂质对光选择吸收性质差异进行检查。（一）紫外吸收光谱法在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。示例：地蒽酚中二羟基蒽醌的检查在432nm 处，地蒽酚无吸收，二羟基蒽醌有最大吸收规定0.01%地蒽酚氯仿溶液A432nm0.12示例：两性霉素B中两性霉素A的检查在305nm处两性霉素A的吸收最强，而两性霉素B的吸收很小，ChP 通过测定两性霉素B供试品溶液在305nm处的吸光度来控制两性霉素A的限量。（二）红外吸收光谱法检查药物中无效或低效晶型。例：甲苯咪唑中A晶型的检查（C晶型有效晶型， A无效）样品25mg
6、，对照品25mg（含10%A晶型），同法制样，记录IR图谱。（三）原子吸收分光光度法通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的含量。三、色谱法（chromatography）药物中的有机杂质的结构和性质往往和药物相近，色谱法可以利用药物与杂质在色谱性质的差异，能有效的将杂质与药物进行分离和检测。（一） TLC 法1、杂质对照品法适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况。 示例：枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（50mg/ml）对照品溶液： N-甲基哌嗪对照品(50 g/ml)点样 展开 晾干薄层板检视斑点判断结果：供试品
7、溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液品溶液主斑点比较，不得更深。 2、供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用。结果判断：供试品溶液所显杂质斑点与自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液所显主斑点比较，不得更深。示例：吡罗昔康中有关物质的检查结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液所显的主斑点比较，不得更深。 3、杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用当药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，可采用供试品溶液自身稀释对照法检查。
8、示例：盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查 对照品溶液：3-甲基黄酮-8-羧酸0.10 mg/ml判断：供试品溶液如显杂质斑点不得多于2个，其中在与对照品溶液相同的位置上所显杂质斑点的颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深，另一杂质杂质的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深。 4、对照药物法当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。示例：马来酸麦角新碱中有关物质的检查供试品溶液 ：5mg/ml供试品溶液 ：0.2mg/ml对照品溶液：马来酸麦角新碱对照品， 5mg/ml
9、判断结果：供试品溶液主斑点的位置与颜色应与对照品溶液的主斑点一致，如显杂质斑点，其颜色不得深于对照品溶液对应的杂质斑点，并不得有对照品溶液以外的杂质斑点；供试品溶液除主斑点外，不得显任何杂质斑点。（二）HPLC 法1、外标法测定法示例：卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查 供试品溶液： 0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5 g/ml混合溶液：卡托普利和卡托普利二硫化物对照品0.1mg/ml和15 g/ml 适用性试验：用混合溶液R（卡托普利和卡托普利二硫化物）大于4.0 以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超过1.0%，片剂中的不得超过卡托普利标示量的3.0%2、加
10、校正因子的主成分自身对照测定法适用于已知杂质的控制。用杂质对照品测定f杂质，f杂质和相对保留时间直接载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保留时间定位，以f杂质校正该杂质的实测峰面积。分子：杂质对照品的峰面积，分母：药物对照品的峰面积 消除杂质与主成分的响应可能不同所引起的测定误差主成分色谱峰的峰高约为满量程的1025进样：供试品溶液、对照溶液分析时间：主成分色谱峰、保留时间的2倍判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。示例：红霉素A中红霉素B、C组分及有关 物质的检查调节检测灵敏度：对照溶液主成分色谱峰的峰高约为满量程的20进样：供试品溶液
11、、对照溶液分析时间：主成分色谱峰保留时间的4倍校正峰面积： f 红霉素B 0.7 红霉素烯醇醚 0.09 杂质1 0.15其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积3、不加校正因子的主成分自身对照法适用于没有杂质对照品的情况对照溶液：供试品的稀释液调节检测灵敏度进样：供试品溶液、对照溶液分析时间：供试品溶液（主成分色谱峰保留时间的2倍）供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成分的峰面积比较示例：甲氨蝶呤中有关物质的检查进样：供试品溶液 对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的4倍判断：单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%），各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰
12、面积的4倍（2.0%）4、面积归一化法适用于粗略测量供试品中杂质的含量。计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。该法一般不宜用于微量杂质的检查。注意以下问题检测器的选择：应根据对杂质结构的分析进行有目的的选择。对于在紫外光区吸收较弱或无吸收的杂质，可采用其他通用型检测器（如蒸发光散射检测器、质谱检测器等）。二极管阵列检测器(diode array detector ，DAD)是杂质研究，特别是复方制剂中杂质研究的有效手段。通过该检测器可获得各杂质的光谱信息，有助于判断杂质检测波长选择的合理性，并可进行峰纯度检查。检测波长的选择：应选用对各杂质均有较强吸收
13、的波长作为检测波长，当一个测定波长无法兼顾所有杂质时，可选用不同波长分别测定。例如在氯喹那多（chlorquinaldol）及有关物质的HPLC分析中，用DAD检测器选择测定波长，氯喹那多在251 nm和360 nm处有最大吸收，有关物质的最大吸收分别在251, 253，254 nm处，为了兼顾氯喹那多的含量测定，选择测定波长在251 nm处。（三）气相色谱法主要用于药物中挥发性杂质的检查。方法 ：方法同HPLC标准溶液加入法 标准溶液加入法总量加入的杂质对照品的量杂质的量采用下列公式计算： L=Cx/C样100%x 供试品中组分X的浓度；Ax 供试品中组分X的色谱峰面积；x 加入的已知浓度的
14、待测组分对照品的浓度；Ais 加入对照品后组分X的色谱峰面积 示例：异氟烷中的有关物质的检查供试品溶液：0.1%（v/v） 系统适用性试验：理论板数按异氟烷峰计算不低于15000异氟烷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。进样：供试品溶液判断：各杂质峰面积的和不得大于总峰面积的0.5%。（四）毛细管电泳法检查方法与高效液相色谱法相同。示例：盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的检查电泳条件：弹性石英毛细管（内径75m，有效长度56cm），柱温25，操作缓冲溶液为pH4.7咪唑-醋酸缓冲溶液，检测波长214nm，操作电压30kV，压力进样。系统适用性试验：迁移顺序：乙胺和N-甲基吡咯烷， N-甲基吡咯烷峰与乙胺峰的分离度应大于2.0，进样数次，RSD不得过5.0%。供试品溶液：20mg/ml ，内标物 0.1mg/ml 对照品溶液 ： N-甲基吡咯烷对照品， 0.1mg/ml 进样：供试品溶
