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1、贝克曼4代和5代总p亚单位人绒毛膜促性腺激素测定试剂的分析性能验证及比较张凯;国秀芝;孙丹丹;李洪雷;程歆琦【摘要】目的对Beckman第5代化学发光法检测总P亚单位人绒毛膜促性腺激 素(total p-human chorionic gonadotropin,total phCG)试剂分析性能进行评估. 方法参照 CLSI EP15-A、EP6-A、EP9-A2 方案，使用 Beckman UniCel Dxi-800 全自动免疫分析仪评估Beckman第4代和第5代Total phCG试剂盒的精密度、 分析测量范围、稀释回收率、携带污染率及第4代和第5代试剂的可比性.选择 335名表观健康
2、女性建立5代phCG的参考区间(年龄19 84岁，其中绝经后162 名).结果第4代和第5代试剂检测低、中、高水平质控物的批内CV分别为 2.2%- 5.0%和 2.0%- 2.5%,总 CV 分别为 3.5% 5.1%和 2.4%- 2.6%;定量下 限分别为0.337和0.275 IU/L;2种试剂携带污染率均小于3%;分别使用wash buffer、蒸馏水、生理盐水对样本进行1:1-1:199倍稀释后,使用第4代和第5 代试剂分别测定,稀释回收率分别为92%- 114%和99%- 113%.第5代与第4 代试剂比对试验的回归方程为Y=1.144X+ 10.61 (R2 =0.990),百
3、分偏差为- 10.34% - 35.62%.绝经后女性的phCG水平显著高于绝经前女性(Pv0.01),第 95百分位数分别为2.10和5.60 IU/L.结论第5代试剂的各项指标能够满足临床 需求,但两种试剂之间存在一定的系统偏差,实验室应重新建立和使用新的参考区间, 并做好临床沟通.Objective To evaluate the performance of Total phCG (4th IS and5th IS) reagents with Chemiluminescence immunoassays.Methods According to the standard of CLI
4、S EP15-A,EP6-A,EP9-A2,the precision,linearity range (AMR),correlation,dilution recovery rate,carryover,limit of quantitation (LOQ) were evaluated.The reference ranges of the total 0hCG(5th IS) reagent were established by 335 healthy women(age ranges:18-84,include 162 post-menopausal).Results The tot
5、al 3hCG (4th IS and 5th within-run of the three quality control products(L,M,H) were 2.2% 5.0%,2.0% 2.5%.The total CVs were3.5% 5.1%,2.4% 2.6%.Limits of quantitative determination (LOQ) of the two reagents were 0.337 and 0.275IU/L.The carryover of two reagents were both lower than 3%.The recovery ra
6、tes of two reagents with concentration of three different dilutions(Buffer,distilled water and saline) were 92% 114%,99% 113%.The regression equations of the Total phCG(5th IS)compared with total 0hCG(4th was Y=1.144X + 10.61 (R2 =0.990),deviation was-10.34% 35.62%.Post-menopausal womens Total phCG
7、was higher than peri-menopausal (P 0.01),the 95% percentile were 2.10 and 5.60 IU/L.Conclusion The performance of total phCG (5th IS) reagents can be accepted,but there was system deviation between the two reagents.Each department should establish its own reference range and good communication with
8、clinical departments are highly recommended.【期刊名称】标记免疫分析与临床年(卷),期】2017(024)002【总页数】5页(P221-225)【关键词】总P亚单位人绒毛膜促性腺激素;性能验证;参考区间作 者】 张凯;国秀芝;孙丹丹;李洪雷;程歆琦【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京100730; 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学 院北京协和医学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医 学院北京协和医院检验科,北京100730;中国医学科学院北京协和医
9、学院北京协和 医院检验科,北京100730【正文语种】中文总P亚单位人绒毛膜促性腺激素(totaiphuman chorionic gonadotropin, TotaiphCG )是胎盘合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，有a、p两个亚基组 成1,其中 a 亚基与促卵泡激素(folliclestimulating hormone , FSH )、促 黄体激素(luteinizing hormone , LH )和促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone , TSH )等相同，而p亚基则决定了 HCG的生物学和免疫学特性。 Totalp-hCG指含有p亚基的HCG,
10、包括完整的天然HCG、游离p-hCG、p核心 片段等2。研究证实totalp-hCG是临床诊断早孕、异位妊娠、先兆流产、葡 萄胎和滋养细胞肿瘤等疾病及治疗后随访的重要指标3。化学发光免疫学方法(chemiluminescence immunoassay , CLIA )是目前 totalp-hCG测定的常规方法，不同试剂厂家的p-hCG检测结果的可比性还存在 定的差异，针对HCG检测的溯源性和可比性现状，世界卫生组织(World Health Organization , WHO )推出了第 5 代 HCG 国际标准物质(07/364), Beckman公司的新一代总phCG( 5th IS
11、)检测试剂盒即溯源至07 / 364。为了 解Beckman公司第5代总phCG试剂盒的检测性能，本实验室在Beckman Uni CelDxi-800全自动免疫分析仪上对比评估了 Beckman第4代和第5代总phCG 试剂盒的精密度、分析测量范围、稀释回收率、携带污染率及可比性,并建立了第 5代phCG的参考区间。1. 1仪器Beckman UniCel DxI800全自动免疫分析仪。1. 2试剂Beckman Coulter公司生产的第4代和第5代总phCG试剂盒及其配 套校准品。2.1 精密度评价 将伯乐公司的低、中、高3水平免疫分析质控品（货号370，批号分别为40301、40302
12、、40303 ）复溶后各分装20份于-20冻存。根据 CLSIEP15-A文件方案4,用第4代和第5代试剂分别测定3个浓度的质控， 连续测5天，每天测4次。计算并对比2种试剂各个浓度的批内不精密度和总不 精密度，并确认其不精密度是否与厂商标注的符合。2 . 2定量下限（limit of quantitation , LOQ ）收集1份低值血清（浓度为4.35 IU/L）。连续测定低值血清10次，计算均值、SD和CV%，应保证此低 值标本的CV% v 20%。使用零浓度定标液（S0 ）将标本稀释2倍后重复测定10 次，计算均值、SD和CV%，如果CV%仍小于20%，则继续进行2倍稀释并重复 测定
13、10次，计算均值、SD和CV%，依次类推，直到稀释至2n倍当CV%大于 20%。2.3线性范围上限验证收集1份浓度接近第4代试剂说明书声称的线性范围上限 和下限的血清各1份（浓度分别为9 . 83、930.82 IU/L）。参考CLISEP6-A 文件5,用1份高浓度血清（H ）和1份低浓度血清（L）按1 . 0 H、 0.9:0.1 L、0 .8 H:0.2 L、0 .7 H:0.3 L、0 .6 H:0.4 L、0 . 5 H:0.5 L、0.4 H:0.6 L、0 .3 H:0.7 L、0 .2 H:0.8 L、0 . 1 H:0.9 L、1.0 L ,配成11个浓度的混合血清。使用两种
14、试剂对混合血清按浓 度由低到高各测3次求均值,计算各混合血清与预期浓度的百分偏差,并拟合直 线回归方程。2.4稀释回收实验按照第4代试剂检测结果，收集1份浓度接近1000 IU/L的 血清，并准备3种稀释液体（Wash Buffer、蒸馏水、生理盐水）。分别用3种 稀释液将标本进行1:1、1:4、1：9、1:19、1:99、1:199稀释，每样本测3 次，求均值并计算回收率，以 12 卫计委临检中心室间室评允许误差（ 125%） 为标准，回收率在87 . 5%112 . 5%之间为可接受。25 样本携带污染实验按照第4代试剂检测结果，收集浓度接近 200000，100000，10000，100
15、0 IU/L 各 1 份（分别为 H1、H2、H3、H4）,同时收集 浓度为0.10.5 IU/L之间的血清充分混合（L0）。使用同一根样本针，按 H1、L01、L02、L03、H2、L01、L02、L03、H3、L01、L02、L03、H4、L01、 L02、L03的顺序连续测定，比较每一高值标本后的L01和L03的偏差并除以高值 标本的浓度，计算样本携带污染率。2 6比对实验按照第4代试剂检测结果，收集50份浓度范围0 1000 IU/L的 血清，分别用2种试剂进行测定。参考CLIS EP9-A2文件6,以4代试剂结 果为X,5代结果为Y，绘制散点图，计算回归方程Y二b X + a,并计算
16、各样本的 偏差（bias ）和百分偏差（bias% ）。2 7参考区间的建立选择173例月经规律和162例绝经1年以上的表观健康人 群,排除肿瘤、糖尿病、高血压、冠心病、肾功能不全等慢性疾病以及子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫腺肌症等妇科疾病，年龄范围在19-84岁。空腹采集静脉 血，分离血清后使用第5代试剂进行测定，取单侧第95百分位数作为总phCG的 参考区间上限。采用Excel 2010及SPSS 19 0软件进行统计分析。相关性分析采用Pearson相 关分析；线性回归采用简单线性回归分析；采用K-S正态分布检验检查数据正态 性；使用独立样本t检验，比较月经规律和绝经后女性的总phCG水平。P v 0 05认为差异具有统计学意义。第4代和第5代试剂检测低、中、高水平质控物的批内CV分别为2 2% -5 0% 和 2.0% -2.5%,总 CV分别为 3.5
