薄层色谱中展开剂的选择

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1、薄层色谱中展开剂的选择2007-04-05 02:03（一）有机合成中展开剂的选择做有机合成时走板子是常有的事，展开剂的选择就至关重要了。选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大 的顺序排列大概为：石油迷己烷苯乙醚THF乙酸乙酯丙酮 乙醇甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往 使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶 剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，展开剂的比例要靠尝 试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首 先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离 效果好的展开剂。展开剂的选择条件：对的所需成分有良好的 溶解性；

2、可使成分间分开；待测组分的Rf在0.20.8之间， 定量测定在0.30.5之间；不与待测组分或吸附剂发生化学 反应；沸点适中，黏度较小；展开后组分斑点圆且集中； 混合溶剂最好用新鲜配制。 一般来说，弱极性溶剂体系的基本 两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯 来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、 黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相 组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素， 以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁 醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性 很大的生物碱类化合物的分离。很

3、多时候,展开剂的选择要靠自 己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我们在实验中，为了 实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组 合，最后才找到石油醚一EtOAcHCOOH （5.5： 3.5： 0.1）混合 溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为 1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三 种溶剂） ,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”）， 最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在 展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅 胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中 除去，氨水无疑是较

4、好的选择。）分离效果的好坏和所用硅胶和 溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒 的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中 分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质 含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也 很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的Rf截 然不同 。展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因 素来考虑，在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类 型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细分， 对于分离未知的化学物质，展开

5、剂的选择也是一个摸索的过程， 不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！溶剂：层析过程中 溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂（单 一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展 开剂。洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质 这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离 物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质 为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物 质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则 洗脱剂的极性亦须相应降低。在柱层操作时，被分离样品在加样 时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入

6、。溶解样 品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。然 后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程， 称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。 如果极性增大过诀（梯度太大），就不能获得满意的分离。溶剂 的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（8）来表示。介电常 数高，洗脱能力就大。以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如 硅胶、氧化铝。对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序 相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂 中为强。被分离物质的性质 被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要 素，彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条

7、件下，各个成 分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸 附剂而言，成分的极性大，吸附住强。当然，中草药成分的整体 分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会 更大些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些。总之， 只要两个成分在结构上存在差别，就有可能分离，关键在于条件 的选择。要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强度，与溶剂 的性质这三者的相互关系来考虑。首先要考虑被分离物质的极 性。如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性 基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油醚 或苯进行洗脱。但多数中药成分的极性较大，则需要选择吸附性 能较弱的

8、吸附剂（一般IIIW级）。采用的洗脱剂极性应由小到 大按某一梯度递增，或可应用薄层层析以判断被分离物在某种溶 剂系统中的分离情况。此外，能否获得满意的分离，还与选择的 溶剂梯度有很大关系。现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂 与样品极性之间的关系。如有多组分的混合物，象植物油脂系由 烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。如对于 C-27 甾体皂甙元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得 分离：将混合皂甙元溶于含有 5氯仿的苯中，加于氧化铝的吸 附柱上，采用以下的溶剂进行梯度洗脱。如改用吸附性较弱的硅 酸镁以替代氧化铝，由于硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需 相应降低，亦即采用苯或含

9、 5氯仿的苯，即可将一元羟基皂甙 元从吸附剂上洗脱下来。这一例子说明，同样的中草药成分在不 同的吸附剂中层析时，需用不同的溶剂才能达到相同的分离效 果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系。 （二）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析 方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一 薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。 1薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层 析的比较。2吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析 相同。主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细， 一般应小于 250 目，并要求粒度均匀。用于薄层

10、层析的吸附剂或 预制薄层一般活度不宜过高，以IIIII级为宜。而展开距离则随 薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般 不超过 10 厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。3展开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为一定值时（如II 或III级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂 的选择。中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同 而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。但在实际工作中，经 常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。实例谈薄层色谱展开剂选择2007/12/08 12:18 P.M.实例谈薄层色谱展开剂选择 根据本人的几年薄层层析经验，参考药

11、典等国家药品标准和有关文献，将2000 版药典一部里部分有代表性的对照品的薄层层实例按展开剂极性排序，并 对其规律做一些分析。以下的分析和介绍是总体描述性的，目的是快速、简便地 选择展开剂。如果想了解展开剂选择的各种理论，请参考其他专著。 #TfaMVM E 选择展开剂，要依据溶剂极性和他们的混溶性，溶剂对被分析物的溶解性， 以及被分析物的结构。这里只讨论药典里通常使用的以硅胶为固定相主体的正相 薄层，也不考虑板的活性。列出溶剂极性参数表，方便以下比较展开剂。环已烷：-0.2、石油醚（I类， 3060C）、石油醚（II类，6090C）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、 苯：2.7

12、、二氯甲烷：3.1、异丙醇：3.9、正丁醇：3.9、四氢呋喃：4.0、氯仿：4.1、 乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 1 。关于溶剂混溶性，一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶， 比如正己烷与甲醇。多元展开剂，主体的两种溶剂不能混溶，就需要通过第三种 溶剂来调和。比如：石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、环已烷和甲醇、水之类的。一般正相色谱，固定相为极性，被分析物质的极性越大，需要极性更大的展 开剂。了解被分析物的极性可以通过分析其结构获得，很难获得它的极性指数。物 质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部

13、分。例如下面以苯丙烷 为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增 加了。， 依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应展开剂分别为：正己烷乙醚冰醋酸 (5:5:0.1)、苯冰醋酸甲醇 (30:1:3)、氯仿甲醇甲酸(9:1: 0.5)、石油醚乙酸乙酯甲酸(3:6: 1) 醋酸丁酯甲酸水(7:2.5:2.5)。(由于薄层板、比移值不同的原因，展开剂 极性比较是相对的，并非绝对的后者大于前者)。现在最重要的问题是，不同化合物，怎么定它的极性，又用什么标准来定它 对应的展开剂呢？以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。首先是极性较小的挥发性物质。比如：冰片

14、：石油醚(3060C)醋酸乙酯 (17:3)、厚朴酚：苯一醋酸乙酯(9:1.5)、a -香附酮：苯一醋酯乙酯一冰醋酸 (92:5:5)、丹皮酚：环己烷醋酸乙酯(3:1)，这类化合物，以石油醚、正构烷 和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙 酯为调节Rf (比移值)的溶剂。为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影 响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。极性较小的不挥发性物质。比如：P -谷甾醇：环己烷一醋酸乙酯一甲醇 (6:2.5:1)或者环己烷丙酮(5:2) 、熊果酸：甲苯醋酸乙酯冰醋酸 (12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿乙

15、醚冰醋酸 (2:2:1)、大黄素：苯醋酸乙酯甲醇(15:2:0.2)或者苯乙醇 (8:1)、丹参 酮IIA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)、靛 玉红、靛蓝氯仿乙醇(9:1)或者苯氯仿丙酮(5:4:1)。这类物质展开剂极性 比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性小的母核大，而极性 大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分子量减小、母 核结构中不饱和健的增加(尤其是出现苯环)，极性基团的增加，都使极性增加， 展开剂极性也增大。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可以从 环己烷甲苯二甲苯苯氯仿的顺序，按照极性要求选

16、择。这里注 意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、 展开慢，造成斑点扩散；另外，羟基的氢键作用力也有不利。调节Rf值的溶剂， 从醋酸乙酯甲醇丙酮乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的， 但从它的挥发性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷 和苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过 提高展开剂的极性。皂苷类。人参皂苷：氯仿一甲醇一水(65:35:10) 10C以下放置的下层溶液或 正丁醇醋酸乙酯水(4:1:5)的上层溶液或氯仿醋酸乙酯甲醇水 (15:40:22:10) 10C以下放置的下层溶液、芍药苷：氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲 酸(40:5:10:0.2)、黄芩苷：醋酸乙酯丁酮醋酸水(10:7:5:3)、橙皮苷： 苯醋酸乙酯甲酸水(1:12:2.5