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1、基因工程原理练习题及其答案一、填空题1 基因工程是_1970_年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2 基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达。3 基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择。4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的_ 限制性酶切图谱。5 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自属名的第一个字母；第二、三两个字母取自种名的前两个字母；第四个字母则用 株名 表示。6部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量
2、；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。7第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是EcoRl。8限制性内切核酸酶BsuRI和Hae的来源不同，但识别的序列都是GGCC，它们属于异源同工酶。9DNA聚合酶I的Klenow大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶的活性。10为了防止DNA的自身环化，可用_碱性磷酸酶_去双链DNA_ 5端的磷酸基团_。11EGTA是_ Ca2+_离子螯合剂。12测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有 5-3合成酶的活
3、性，而没有3-5外切酶的活性。13切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的5一3合成酶和5一3合成酶的作用。14欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平。15反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有核酸水解酶H的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的RNA水解掉。16基因工程中有3种主要类型的载体：质粒DNA、病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体。17就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点：
4、 便于外源DNA的插入。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18 一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测 不出质粒，这种现象叫质粒消除(或治愈)。19 pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl，它的四环素抗性基 因来自于pSCl01，它的氨苄青霉素抗性基因来自于pSF2124(R质粒)。20YAC的最大容载能力是1000kb，BAC载体的最大容载能力是300kb。21pSCl01是一种严紧复制的质粒。22pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过pBR322和M13两种质粒改造而来。它的复制子来自pMBl，Amp抗性基因
5、则是来自转座子。23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增； 二是对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。24 野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记。25 黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自质粒、COS位点序列来自l噬菌体，最大的克隆片段达到45kb。26 野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记。27噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共
6、同构成的，其中来自质粒的主要结构是复制区，而来自噬菌体的主要结构是IG区。28l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基 因组的75105的范围内。29 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 。30 用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc， 其目的是中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力。31 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析。32Clark发现用Taq DNA聚合酶
7、得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的T载体 。33在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在第二链合成时形成的发夹环。34乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脱水。35 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号36 受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态_。37 DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法。38 将含有外源基因组一
8、个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组DNA克隆，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组DNA文库。39将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个cDNA克隆，源于同一批RNA制备 物的克隆群则构建了一个cDNA文库。40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用聚合酶链式反应(PCR)可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0C时吸附DNA, 42C时摄人DNA。42目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为：(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法等。43PCR扩
9、增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选。44 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为基因组DNA 探针和cDNA探针。45如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5突出的黏性末端，则可以用Klenow酶填补的方法进行3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3突出的黏性末端，可以用T4DNA聚合酶进行3末端标记。46单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针。47根据Nort
10、hern杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录。48差示杂交(differential hybridization)技术需要两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因。49RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜) 上，同一放射DNA探针杂交的技术称Northern印迹。50在Southern印迹技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。51可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有53合成酶和3 5外切核酸酶
11、的活性。52根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子。53Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别： (1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件。54放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记。二、选择题(单选或多选)1 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( c ) (a)AKornberg (b)WGilbert (c
12、)PBerg (d)BMcClintock2 第一个作为重组DNA载体的质粒是( c ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( b )不太恰当。 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 (c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4型限制性内切核酸酶： ( b ) (a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c)限制性识别非甲基
13、化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5下面有关限制酶的叙述哪些是不正确的?( a ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶 (b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端6第一个被分离的类酶是： ( c ) (a)EcoK (b)Hind (c)Hind (d)EcoB7在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( b ) (a)反
14、应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度8在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( d ) (a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA9在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( d ) (a)S1单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31核酸酶10限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( b ) (a)双链DNA的特定碱基对 (b)双链DNA的特定碱基序列 (c)特定的三联密码 (d)以上都正确11下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( d )。 (a)Sau3A I (b)EcoRI (c)hind III (d)Sau 3A112限制性内切核酸酶的星号活性是指：( a )(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。 (b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快 (d)识别序列与原来的完全不同13下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( d ) (a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂 (c)含有非Mg2+的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低14关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( b )不太恰当 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成
