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1、七、问答答题1阐述述原核生生物的转转录终止止。 (1)转转录终止止的两种种主要的的机制是是什么? (2)描描述翻译译怎样能能调节转转录终止止。 (3)为为什么在在细菌转转录终止止中很少少涉及到到Phoo因子? (4)怎怎样能阻阻止转录录的终止止?2复制制 DNNA的聚聚合酶(DNAA依赖的的 DNNA聚合合酶)也也有校正正功能，解解释为什什么RNNA聚合合酶没有有这种功功能。3讨论论原核生生物基因因表达的的聚合作作用反应应定向的的重要性性。假如如核糖体体从3端到55端读它它的模板板 mRRNA的的话，那那么将会会发生什什么情况况?4概括括细菌细细胞内的的转录过过程。5. 概概括典型型原核生生物
2、启动动子的结结构和功功能，并并解释什什么是保保守序列列。6转录录如何在在基因或或基因组组末端终终止?7(11)如何何区分由由启动子子起始转转录的RRNA片片段与55端被加加工过的的RNAA片段; (2)证证明多肽肽是从氨氨基端到到羧基端端方向合合成的。8比较较 Ecooli rrRNAA和 ttRNAA的转录录和加工工。9区别别可诱导导和可阻阻遏的基基因调控控。10衰衰减作用用如何调调控E. colii中色氨氨酸操纵纵子的表表达?11比比较并指指出细菌菌和真核核生物RRNA 翻译译机理的的异同。12什什么是摇摇摆假说说?13指指出E.colli和真真核生物物翻译起起始的不不同。14SSN Co
3、hhen于于19773年构构建了三三个重组组体， pSCC1022， ppSC1105， pSCC1099请说明明这三个个重组体体是如何何获得的的?各说说明了什什么?15基基因克隆隆是如何何使含有有单个基基因的 DNAA片段得得到纯化化的?16什什么是细细菌的限限制修饰系系统(rresttricctioon-mmodiificcatoon ssysttem, R-M ssysttem)17细细菌的限限制修饰系系统有什什么意义义? 18说说明限制制性内切切核酸酶酶的命名名原则要要点。19类限制制酶具有有哪些特特点?在在基因工工程中有有什么作作用?20类限制制酶有哪哪些特点点?21何何谓限制制性内
4、切切核酸酶酶的切割割频率?22什什么是限限制性内内切核酸酸酶的星星号活性性?受哪哪些因素素影响?23双双酶消化化法(ddoubble diggestts)绘绘制限制制性内切切核酸酶酶酶谱的的原理。24什什么是 DNAA多态性性(DNNA ppolyymorrphism)?25限限制性片片段长度度多态性性(reestrricttionn frragmmentt leengtth ppolyymorrphiism，RRFLPP)。26计计算下列列三种酶酶各自在在某染色色体 DDNA序序列上识识别位点点间的平平均距离离： Alu ：5AGCCT 3”EcooR : 5GAATTTC 33 TTCGA
5、A 55 3CTTTAGGG 55Acy:5GPuuCGPPyC 3 3CPyyGCPuu5 (注： Pyy=任何一一种嘧啶啶； PPu=任任何一种种嘌呤)图15.1酶切电泳图谱12：Hind 切割；34：coRV 切割；56：Hind +co RV；1、3、5是质粒 DNA： 2、4、6是15号克隆。27在在细菌质质粒 ppBP11的四环环素抗性性基因 tettR的中间间有一个个Hindd的切点点。用HHindd 切割割果蝇基基因组 DNAA，以 pBPP1为载体体构建基基因组文文库。分分子杂交交证明克克隆155带有果果蝇的目目的基因因。用HHindd和EcoRV对对克隆115进行行了酶切切
6、分析，电电泳结果果如图115.1(用用酶切的的 pBBP1质粒DDNA作作对照)，旁边边标出了了片段的的大小。 (11)绘制制含有插插入片段段和不含含插入片片段时的的 pBBPl的的限制性性图谱，并并标明四四环素抗抗性 基基因的位位置; (22)如果果用克隆隆在另一一个与 pBPP1完全全不同源源载体上上的四环环素抗性性基因作作为探针针，进 行 Souutheern印印迹杂交交，预测测上述电电泳图会会出现什什么样的的杂交带带? (33)如果果用克隆隆15的的果蝇 DNAA片段作作为探针针进行 Souutheem印迹迹杂交，放放射自显显影 的的结果又又是如何何?28为为什么大大多数内内切酶被被称
7、为“限制”酶。29据据Sciiencce杂志志报道:一种重重要的遗遗传疾病病可由导导致 DDNA中中碱基替替换的诱诱变剂在在体外进进行人工工诱导。设设计一种种快速用用以鉴定定疾病基基因型的的检测方方法。30为为了绘制制长为33.0kbb BamH 限制性性片段的的限制性性图谱，分分别用EEcoR 、Hpaa EcoR 十 Hpa消化这这一片段段的三个个样品，然然后通过过凝胶电电泳分离离 DNNA片段段，溴化化乙锭染染色后观观察DNNA带型型(图115.2)。请请根据这这些结果果，绘制制一个限限制性图图谱，图15.2 用EcoR 、Hpa 单独切割及用这两种酶混合切割30kbBamH片段产生的
8、DNA带要要标明EE.cooR 和Hpaa识别位位点间的的相对位位置，以以及它们们之间的的距离(kb)。31119677年，有有5个实实验室几几乎同时时独立发发现了DDNA 连接接酶，每每个实验验室的实实验有什什么特点点?32简简述 DDNA和和RNAA连接酶酶的催化化反应机机制。33. 影响 DNAA连接酶酶催化连连接反应应的因素素有哪些些?34什什么是KKlennow酶酶?有哪哪些活性性?在基基因工程程中有什什么作用用?35. 如何利利用 TT4 DDNA聚聚合酶制制备3隐含末末端或双双链平末末端?36. 如何利利用 TT4 DDNA聚聚合酶进进行双链链 DNNA的33末端标标记?37如如
9、何利用用 T44 DNNA聚合合酶制备备平末端端?38反反转录酶酶有两种种类型，一一是来源源于禽类类骨髓母母细胞瘤瘤病毒(AMYY, avviamm myyelooblaastoosissvirrus)，另一一种来源源于鼠类类莫洛尼尼氏白血血病毒(MMLV，MMolooneyy muurinne lleukkemiiaviirus)，它们们之间有有什么不不同?39与与E.ccoliiRNAA聚合酶酶相比，细细菌噬菌菌体的 SP66RNAA聚合酶酶、 TT7RNNA聚合合酶和 T3 RNAA聚合酶酶具有哪哪些优越越性?40什什么是多多核苷酸酸激酶的的向前反反应和交交换反应应?41细细菌碱性性磷酸
10、酯酯酶和小小牛肠碱碱性磷酸酸酯酶有有什么不不同?在在基因工工程中有有什么用用途?42外切核核酸酶(lambbda exoonuccleaase)基本活活性是什什么?在在基因工工程中有有什么应应用?43MMn2+、 MMg2+对 DDNasse (deeoxyyriboonuccleaase )的活活性有什什么影响响? DDNasse 在基因因工程中中有什么么作用?44比比较 SS1-Maappiing和和 Foootpprinntinng在原原理上、方方法上、应应用上有有何不同同?45什什么是复复制子(reppliccon)?46什什么是质质粒的相相容性?什么是是不相容容群?机机制是什什么?4
11、7什什么是质质粒的带带动转移移?48说说明变性性定位法法和限制制性内切切核酸酶酶定位法法研究质质粒复制制起点的的原理。49 Co11El衍衍生质粒粒拷贝数数调节机机理的机机理是什什么?50 R1质粒拷拷贝数受受到怎样样的调节节控制?51质质粒如何何维持在在细胞中中的稳定定?52. 引起质质粒不相相容性的的主要原原因是什什么?53由由于基因因工程是是人为改改变遗传传信息的的操作，因因此必须须注意被被操作基基因的安安全，进进行 严格的的监控，质质粒载体体的安全全性是十十分重要要的。请请问质粒粒载体的的安全条条件包括括哪几个个方面?54请请指出质质粒 ppSC1101的的一些生生物学特特性(包包括结
12、构构和遗传传)及在在基因工工程中的的作用。55. 自然界界中具备备理想条条件的质质粒载体体为数不不多，即即使是 Co11E1和 ppSC1101这这两个自自然质粒粒也不尽尽人意，通通常需要要进行改改造，请请问质粒粒改造包包括哪些些基本内内容?56. 质粒改改造的发发展过程程如何?57. 在质粒粒中如何何增减酶酶切点?58有有人用限限制性内内切核酸酸酶EccoR I分别别切割松松弛型质质粒 CCo1E1和严紧紧型质粒粒 pSSC1001(各各有一个个切点)，然后后重组连连接形成成一个杂杂种质粒粒 pSSC1334，请请推测这这种质粒粒有什么么特性和和用途。59现现分离了了4种新新的大肠肠杆菌 H
13、frr菌株，通通过中断断接合实实验，针针对每一一菌株确确定了高高频转移移的标记记基因和和它们进进入 FF受体的的时间分分别为：标记基因因和第一一次进入入的时间间Hfr11Hfr22Hfr33Hfr44man13miinmal29lys16pur6trp6met14arg9trp3his23thr4mal2thr31pur3uvr20his32lac23gal14(gall、lacc、mall、mann不能发发酵半乳乳糖、乳乳糖、麦麦芽糖和和甘露糖糖；arrg、hiss、mett、trpp 生长长需要精精氨酸、组组氨酸、赖赖氨酸、甲甲硫氨酸酸、嘌呤呤和色氨氨酸；uuvr：紫外线线敏感)。任何何没
14、有给给出的标标记都是是不能高高频转移移的。上上述数据据能够说说明大肠肠杆菌的的染色体体是环状状的吗?以分钟钟表示图图距构建建一个大大肠杆菌菌染色体体的连锁锁图。假假定整个个染色体体用了1100分分钟转移移，而且且苏氨酸酸被认为为位于00分钟或或10OO分钟处处。60YYAC克克隆载体体常出现现哪些问问题?61为为什么野野生型的的噬菌体体 DNNA不宜宜作为基基因工程程载体?62什什么是蓝蓝白斑筛筛选法?63蓝蓝白斑筛筛选法为为什么也也会有假假阳性?64什什么是cc筛选法法?65噬菌体体载体具具有哪些些优点与与不足?66什什么是 M133的IGG序列区区?有何何特点和和功能?67将将野生型型的 MM13改改造成基基因工程程载体，首首先是进进行酶切切位点的的改造，请请问 MM13中中的EcoR 最初是是如何引引入的?68以以置换型型噬菌体体作为载载体进行行克隆时时，为什什么说能能够形成成噬菌斑斑的就一一定是重重组体?69 M133系列载载体具有有哪些优优缺点?70粘粘粒载体体具有哪哪些特点点与不足足?71辅辅助噬菌菌体 DDNA和和相应的的噬菌粒粒是如何何协同工工作的?72. 克隆的的 DNNA在质质量上有有什么要要求?73为为什么从从细胞中中分离
