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1、 丙型肝炎病毒实验活动风险评估报告一、生物学特性（一）种类和病毒分型丙型肝炎病毒（Hepatitis Cvirus，HCV）引起的丙型肝炎曾被称为肠道外传播的非甲非乙型肝炎（PT-NANB）。病毒颗粒呈球形，有包膜，直径约5565nm。基因组为单正链线状RNA，长度约为9.5kb。基因组由5端非编码区（5UTR）、编码区和3端非编码区（3UTR）组成。5端非编码区是HCV基因组中最保守的序列，是设计诊断用PCR引用的首选部位。编码区仅含一个长的开放阅读框（ORF），编码一个大分子的多聚蛋白前体。该前体蛋白在病毒蛋白酶和宿主信号肽酶的作用下切割产生病毒的结构蛋白和非结构蛋白。病毒的结构蛋白包括核
2、心蛋白C和包膜蛋白E1、E2。非结构蛋白包括NS2、NS3、NS4a、NS4b、NS5a和NS5b。对于3端非编码区的功能尚不清楚，可能与病毒复制有一定关系。根据HCV NS5区基因序列的同源性，可将HCV分为6个基因型，11个亚型，即1a、1b、1c、2a、2b、2c、3a、3b、4a、5a、6a。其中，欧美流行株多为1a、1b、2a、2b和3a；中东地区以4a为主；亚洲包括我国以1b、2a和2b亚型较为多见。（二）来源1989年，美国学者Choo等应用了分子克隆技术在实验室感染PT-NANB的黑猩猩血浆中首次获得了病毒的cDNA克隆，测定了约70%的HCV基因序列，并利用这些基因表达的蛋白
3、质为抗原，检测到PT-NANB病人血清中的特异性抗体。此后，又获得了来自PT-NANB患者血清的病毒全基因组序列，从而确定了PT-NANB的病原体，并将命名为丙型肝炎病毒。1991年，国际命名委员会将其归类为黄病毒科丙型肝炎病毒属。（三）传染源主要传染源为急、慢性患者和无症状HCV携带者。慢性患者和病毒携带者有更重要的传染源意义。（四）传播途径传播途径主要为输血及血制品传播。此外，亦可通过非输血隐性途径的微小创伤、性接触、家庭密切接触及母婴接触进行传播。（五）易感性人群对HCV普遍易感染，同性恋、静脉注射者及接受血液透析的患者为高危人群。（六）潜伏期急性感染丙型肝炎病毒13周，在外周血可检测到
4、HCV RNA。通常，潜伏期为226周，平均50d；输血感染者的潜伏期较短，约为733d，平均19d。出现临床症状时，仅50%70%患者的抗HCV阳性，3个月后约90%患者的抗HCV阳转。（七）剂量一效应关系目前，尚未见有HCV对人体准确感染剂量的报道。HCV的感染主要与暴露途径和感染方式密切相关。（八）致病性HCV感染引起的临床过程轻重不一，可表现为急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带。HCV感染极易慢性化，40%50%的丙肝患者的可转变成慢性肝炎，部分可发展成肝硬化肝癌。肝癌患者血中抗HCV阳性率高。目前认为，HCV的致病机制与病毒的直接致病作用和免疫病理损伤有关。实验证明，丙型肝炎患者血清HC
5、V-RNA的含量与血清丙氨酸转移酶的水平呈正相关，提示HCV的复制与肝细胞损伤有关，病毒在复制过程中可能直接损伤肝细胞。异常的细胞免疫反应是HCV另一重要的致病机制。HCV感染后不能诱导有效的免疫保护反应。实验感染的黑猩猩恢复后，在用同一种病毒株攻击黑猩猩，黑猩猩几乎无力保护。（九）变异性HCV的结构蛋白包括核心蛋白C和胞膜蛋白E1及E2。其中，胞膜蛋白E1和E2是两种高度糖基化的蛋白。编码这两种蛋白的基因具有高度变异性，导致胞膜蛋白的抗原性发生快速变异。这种变异引起的免疫逃逸作用是病毒在体内持续存在而感染易于慢性化的主要原因，也是HCV疫苗研制的一大障碍。（十）环境中的稳定性HCV对理化因素
6、抵抗力不强，对氯仿、甲醛、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂敏感，加热100 5min、紫外线照射、甲醛（1：6000）、20%次氯酸等均可使之灭活。血液或血制品经60处理30h可使HCV的传染性消失。（十一）药物敏感性对丙型肝炎尚缺乏特效药，已证明IFN-对早期HCV有较高效率。目前，HCV感染的首选治疗方案是IFN-和利巴韦林（RBV）联合治疗。（十二）消毒剂敏感性HCV对氯仿、甲醛、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂敏感，甲醛（1：6000）、20%次氯酸等也均可使之灭活。（十三）物理灭活HCV对理化因素抵抗力不强，加热100 5min、紫外线照射等均可使之灭活。血液或血制品经60处理30h后，HCV的传染
7、性消失。（十四）在宿主体外存活一般，病毒离开宿主会在很短时间内死亡。HCV也是如此，一般在10min左右就会死亡。（十五）与其他生物和环境的交互作用国内外研究已证实丙型肝炎和乙型肝炎是肝癌的重要病因。国外资料的Meta分析结果显示HCV感染对肝癌的危险比值比（OR）达11.5，而且与HCV的混合感染表现出协同作用。HCV在外环境中较易死亡，但在血液或血制品中易于成活。（十六）预防和治疗方案预防措施我国已规定，必须对献血员进行抗HCV检测，以减少HCV的感染和传播。对血制品亦需进行HCV检测以防污染。治疗措施由于HCV免疫原性不强，且毒株易于变异，因此疫苗的研制较为困难。目前尚无疫苗用于特异性预
8、防。对丙型肝炎尚缺乏特效药，已证明IFN-对早期HCV有较高效率。目前HCV感染的首选治疗方案是IFN-和利巴韦林（RBV）联合治疗。二、实验室相关活动风险评估与控制（一）实验室感染性因子的种类、来源和危害感染性因子的种类本实验室可能的感染因子为HCV本身。感染性因子的来源用于HCV抗体检测的血液样本。样本采集与检测过程中涉及的所有实验场所。实验室操作中可能产生的含病毒的气溶胶。感染性因子可能造成的危害被污染的实验器材、器皿等对实验室环境造成污染。实验室废弃物对环境造成污染。实验人员暴露后感染。实验室含病毒的气溶胶实验室环境造成污染。（二）实验室常规活动过程中的风险评估与控制实验方法风险点识别
9、 若采用国家标准、行业标准之外的其他未经确定的实验方法，或在使用国家标准、行业标准之前未进行技术确认，操作时可能存在安全风险。风险控制措施 尽量采用国家标准、行业标准或经过充分验证的实验方法；在使用新的或变更过的国家标准、行业标准之前，必须经过严格的技术确认。样本采集所用器材 一次性采血针、真空采血管、消毒棉签及一次性利器盒。风险点识别采血过程中若被急性或者慢性丙肝患者的血液污染的皮肤、黏膜，或者被含有HCV的血液污染了的针头刺破皮肤，则被感染的可能性很大。血液标本溅洒可能造成人员或环境污染。风险控制措施 采血前做好个人防护，穿戴防护服、口罩、帽子、手套；抽血前检查针管的密闭性，用过的针头直接
10、放入利器盒内，禁止用手直接接触使用后的针头或将使用后的针头重新套上针头套；采血管用真空抗凝管，采好血后直立于试管架中，防止倒翻；消毒棉签等污染物放入医疗废弃物专用袋中，统一进行消毒处理。样本的包装和运输所用器材 真空采血管、95千帕样品运输罐、B类标本运输箱（UN3373冷藏箱）、运送车辆。风险点识别 若是用不合格包装进行运输、容器密封不严，则将不能安全有效的防止运输过程中包装容器意外破损，从而产生污染扩散的可能。风险控制措施 严格按照生物安全的要求，采用三层容器包装。第一层采用真空采血管装样本，应密闭防渗漏；95千帕样品运输罐，可容纳并保护第一层容器，密封不易破碎、耐压力房渗漏且易消毒；第三
11、层采用B类标本运输箱，要容纳并保护、固定第二层容器，且易于消毒。样本应由中心专车运回实验室。样本接收风险点识别 如果在运输途中意外发生样本破裂、血液溢漏，也可能对样本接收人员造成污染。风险控制措 样本直接送至实验室，由专业检验人员接收，接收样本前做好个人防护，穿戴防护服、帽子、口罩、双层乳胶手套。若有样本管意外破裂，则立即在生物安全柜内将尚存留的样本移出，废弃物放入带盖的防刺破的塑料罐中，被污染的容器用20%次氯酸溶液等消毒液浸泡后再清洗。样品检测所用材料 离心机、生物安全柜、移液器、洗机板及酶标仪等设备。风险点识别离心过程中离心管破裂造成离心机污染。实验操作过程中血液样本溅洒，从而造成人员或
12、台面、地面等环境污染。洗板、读板时液体溅出从而污染设备表面或工作台面。风险控制措施 所有检测操作均在BSL-2实验室中进行，检测人员在实验前按照二级生物安全防护要求做好个人防护；加样移液操作在生物安全柜内进行，动作轻缓；判读结果时酶标板轻拿轻放，避免液体溅出；待实验完毕，先消毒手部，再脱去手套并立即洗手；若有意外情况发生，应及时采取有效措施。离心过程中离心管破裂 应马上关闭电源，让离心机停止工作，静止30min。然后缓慢打开离心机盖，将离心机平稳地拿到生物安全柜中。如果发生泄漏，则将配制好的1%的次氯酸钠消毒液灌入离心杯腔体中消毒30min，然后弃去消毒液和离心管碎片，将离心杯清洗后擦干。样本
13、溅洒污染设备表面 可用24%次氯酸溶液或75%酒精擦拭消毒。台面、地面及人员暴露于污染物的处理措施同“采样部分”。在任何可能导致潜在的传染性物质溅出的操作过程中，应保护好面部、眼睛和嘴；发生液体溅出、溢出等事故，明显暴露于传染源时，应立即向科室负责人报告，及时处理并对事故的发生与处理作记录，必要时进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。阳性样本保存所用器材 生物安全柜、移液器、带螺旋盖的塑料管一个密封的塑料冻存盒。风险点识别 HCV阳性标本若保存不当，则易造成人员和环境污染。风险控制措施 按照二级生物安全防护要求做好个人防护；样本的保留在生物安全柜内，进行动作要轻缓；所有样本的血清或血浆
14、都保留在带螺旋盖的塑料管内，在装入可密封的塑料冻存盒中，置于-20以下冰箱内保存，严格实行双人双锁管理。实验室的清洁和消毒风险点识别 工作完毕后若不及时对工作台面、生物安全柜等进行消毒，则有可能会会造成实验室环境污染或人员感染。风险控制措施 工作完毕后，及时对检测所涉及的工作台面积地面用100倍稀释的施康清洗消毒液檫拭。用消毒液擦拭后要干燥20min以上；生物安全柜用7075%酒精擦拭消毒。待实验和消毒完毕，先脱去手套，再脱去防护服，并正确使用肥皂和流水洗手。废弃物处置所用器材 医疗废弃物专用袋、硬质耐高压且防渗漏的垃圾桶、高压灭菌器。风险点识别 剩余的阳性标本很大的污染源，若采血过的针头处理
15、不当，则存在人员被刺伤，甚至感染HCV的存在风险。风险控制措施 实验过程中产生的所有感染性废弃物，包括不再需要的剩余样本、酶标反应板、移液头等所有实验过程涉及的用品，需置于装有医疗废弃物专用袋的硬质耐高温且防渗漏的垃圾桶中，经121高压灭菌1520min后才可运出实验室；针头、破碎玻璃等损伤性废弃物必须放入利器盒，利器盒严禁再次打开。装满针头等利器的一次性利器盒严禁再次打开，须密封好后，同上述垃圾一起处理。所有处理完毕的废弃物集中存放，由有资质的医疗废弃物处理单位上门收集、集中处理。同时，做好交易记录，所有相关记录定期整理归档。（三）实验室常规活动中其他风险评估与预防控制措施电力风险点识别 若实验室没有布置双路供电，或电力供电不稳定，存在实验活动突然中断、实验设备停止工作等所带来的相关安全风险。预防控制措施 实验室尽量要布置双路供电，没有布置双路供电的应配置备用电源，以确保高压灭菌器、生物安全柜等重要设备的安全运行。电气操作风险点识别 实验室活动涉及的电气操作，包括实验室工作区内电气设备的启动、关闭、安装和维修；设备层内UPS、空调机组等电气设备的启动、关闭和维修等。这些电气操
