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1、DNA琼脂糖凝胶电泳SOP1. 2.5%琼脂糖凝胶的配置（40ml）(1) 称取1g 琼脂糖置于干净的三角瓶中，加入1TAE 电泳缓冲液 40 ml，轻轻晃匀后放到微波炉中加热（边加热变拿出摇晃以便于加快琼脂糖溶化），至琼脂糖颗粒全部溶解后取出冷却。(2) 待琼脂糖溶液冷却到60左右，加入溴化乙锭（EB）溶液，使终浓度为0.5g/ml, 并充分混匀。(3) 在制胶膜的适当位置插上梳子（根据实验需要选择不同规格的梳子），将琼脂糖溶液倒入制胶模中，胶厚度一般在3-5mm之间。（注意：不要产生气泡，溶液温度太高，会使得水分过分蒸发，也会使胶板变型，影响电泳效果）。 (4) 在室温下使胶凝固（大约30
2、分钟），小心垂直向上拔出梳子，然后把胶放置于电泳槽中，样品孔靠近阴极端。加入1TAE 电泳缓冲液至液面恰好覆盖凝胶。2. 上样电泳 (1) 用移液器吸取9ul样品和1ul的上样缓冲液（10），混匀后，小心加入点样孔（加样量根据孔的大小而定）中，每加一个样均需更换枪头。 (2) 加完样后，合上电泳槽盖，打开电源开关，调节电压至110V，可见溴酚蓝条带由负极向正极移动，当溴酚蓝条带移动到距离凝胶前沿约2cm，停止电泳。3. 紫外观察将凝胶置于凝胶成像系统中，在紫外灯上观察电泳结果，DNA存在处显出橘红色荧光条带。（注意：波长302nm的紫外适合核酸的观察和分析，波长为365nm的紫外适合制备观察及切割条带，以减少对DNA的破坏）附：不同浓度琼脂糖凝胶的分离范围凝胶中的琼脂糖含量（w/v）线性DNA分子的有效分离范围(bp)0.51000 300000.7800 120001.0500 100001.2400 70001.5200 30002.050 20002.5小于50
