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1、一 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。1mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）:将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清
2、蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml， 然后分装成小份贮存于 -20C。1mol/L二硫苏糖醇（DTT）:在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl）:溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）:溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH
3、至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O 和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl:力口 8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-0-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20C。1mol/LMgC
4、l2:溶解20.3g MgCI26H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20 C。20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加 水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20C10mg/mlRnase （无 DNase） （DNasefree RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5
5、.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5，于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCI）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10%SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100%三
6、氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% Xga（5-溴-4-氯-3-吲哚一0-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20C。100xDenhardt 试剂(Denhardts regent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll, 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20C贮存。10x标准
7、DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L 贮液100mmol/L MgCI21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L 贮液5mmol/L盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）0.5ml 10 mg/mL 贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（
8、dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇20g2.5mol/L氯
9、化钠50ml 5 mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠水补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20xSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二水）88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37C温浴至少12h，然后在15 psi条件下高压灭菌20min,以使残 余的 DEPC 失活。 D
10、EPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（ deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（ phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷
11、酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g 于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCI1ml 1mol/L Tris-HCl (pH7.4-8.0, 25C)1mmol/L EDTA200ul 0.5 mo
12、l/L EDTA (pH 8.0)水98.8mlTris 缓冲液( Tris-HCl buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50xTris -乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱242g1mol/L乙酸57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L)100 mmol/L
13、 EDTA200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)水补足1L5xTris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱54g445 mmol/L硼酸盐27.5g硼酸10 mmol/L EDTA20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)水补足1L染料1%漠酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型漠酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF（ xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ ethid
14、ium bromide）小心称取1g漠化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）6x碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠300ul 10N氢氧化钠6 mmol/L EDTA120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)18%聚蔗糖（400型）1.8g0.15%漠甲酚绿15mg0.25%二甲苯青FF25mg水补足到10ml6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚蓝1.5ml 1%漠酚蓝0.15%二甲苯青FF1.5ml 1 %二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)15%聚蔗糖（400型）1.5g水补足到10ml6x漠酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝2.5ml 1%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF2.5ml 1 %二甲苯青 FF15%聚蔗糖（400型）1.5g水补足到10ml6x甘油凝胶上样液（4C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝1.5
