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1、微生物的培养与应用同步练习一、选择题1(2020浙江7月选考，19)下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化2(2020江苏高考，19)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是()A倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B图中、区的细菌数量均太多，应从区挑取单菌落C该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色二、非选择
2、题3(2020全国卷，37)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_。甲、乙培养基均属于_培养基。(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2107个/mL，若要在每个平板上涂布100 L稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_倍。(3)在步骤的筛选过程中
3、，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_(答出1点即可)。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：_。(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即_。4微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？微生物接种的核心是什么？5平板划线法在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？目的是什么？6.(2021湖北八校联考)回答下列与微生物实验室培养有关的问题：(1)在制备固体培养基时需加入凝固剂，常用的凝固剂是_。(2)为防止外来杂菌入侵，对_等可采用干热灭菌法
4、进行灭菌。(3)如图为用平板划线法接种后的示意图。在划线接种的整个操作过程中，对接种环至少需进行_次灼烧灭菌。接种后盖上皿盖，将平板_放入恒温箱中培养，这样放置的目的是_。(4)为统计培养液中细菌的数目，稀释后取少量菌液滴加到培养基表面，用涂布器涂匀，这种接种方法称为_。用该方法统计样本细菌数时需要设置对照组，其目的是_。(5)筛选能分解纤维素的细菌时，应在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入_。7有报道称单位面积智能手机屏幕的细菌数比马桶按钮上的多。如图是某校甲、乙两个生物兴趣小组展示的实验调查结果。回答下列相关问题：(1)在制备该培养基的过程中，除了添加微生物所需的基本营养物质外，培养基还需满
5、足微生物生长对_等的要求。由图中2组培养结果可知，该实验接种微生物的方法为_。(2)通过观察菌落的_(答两点)等特征，可对手机屏幕和马桶按钮上存在的微生物进行初步鉴定。但若要进一步确定是否存在大肠杆菌，可以加入_指示剂进行鉴定，若培养基中出现_菌落，则说明存在大肠杆菌。(3)按图示面积取样，小组成员测定某手机屏幕上的细菌数量，将10 mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1 mL稀释倍数为102的培养液接种到四个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为38、40、42、29，则该手机屏幕上的细菌数为_个/厘米2，为了使该实验统计的数据更准确，应另外设置对照实验，实验设置为_。8.常用的刚果红染色
6、法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红，这两种方法各有哪些优点与不足？9.(2021赣中南五校联考)回答下列有关微生物培养与运用的问题：KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 gFeCl30.1 gX1 g维生素微量琼脂15 g(1)如表是筛选异养型细菌的培养基配方。从物理性质上看该培养基属于_培养基，其中成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供_。制备该培养基的一般操作顺序是计算称量_灭菌_。对培养基进行灭菌的常用方法是_。(2)如图A、B是纯化微生物培养的两种接种方法，C、D是接种后培养的效果。某同学接种培养后获
7、得图C所示效果，则其采用的接种方法是_(填“A”或“B”)；接种时可能的失误操作是_。AB C D(3)微生物强化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。为筛选和纯化该类微生物，应向培养基中添加_作为唯一碳源；培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取_就可获得高效菌株。10.下面是有关获取分解纤维素的微生物的实验过程，请回答有关问题：(1)为确保能够在土壤样品中分离出所需要的纤维素分解菌，一般要进行_培养，以增加其浓度。在培养过程中影响纤维素分解菌数量变化的因素有_(答出三点即可)。(2)为避免杂菌污染，接种操
8、作需要在_进行，分别吸取0.2 mL稀释了103107倍的土壤样液，加入固体培养基上，用_将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板。适宜条件下培养，观察并统计菌落数，结果如表所示，由此计算出每毫升土壤样液中的菌落数为_。用这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目_(填“低”或“高”)，原因是_。稀释倍数103104105106107菌落数/个1号平板4783672772652号平板4963542612083号平板509332254293(3)为确定得到的菌是不是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶实验。其中纤维素酶活性的测定方法是对纤维素酶彻底水解纤维素所产生的_进行定量测定。答案1 A2
9、B3 (1)高压蒸汽灭菌琼脂选择(2)104(3)S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长(4)取淤泥加入无菌水中，涂布(或稀释涂布)到乙培养基上，培养后计数(5)水、碳源、氮源和无机盐4不是。微生物的接种方法还包括斜面接种、穿刺接种等，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。5划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。这样做的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散以便获得单个菌落。6. (1)琼脂(2)玻璃器皿和金属用具(3)6 倒置 避免培养基被污染和防止培养基水分过快挥发(4)稀释涂布平板法
10、 判断培养基是否被杂菌污染(或判断培养基灭菌是否合格)(5)刚果红7 (1)pH、特殊营养物质、氧气 稀释涂布平板法(2)形状、大小、隆起程度、颜色(两点即可) 伊红美蓝 黑色(3)1.6104 取空白培养基涂布0.1 mL无菌水，在相同环境下培养8.方法一是传统的方法，不足是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题；不足是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分；方法二的另一不足是有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。9. (1)固体碳源和氮源溶化倒平板高压蒸汽灭菌法(2)B稀释涂布平板法涂布不均匀(3)石油降油圈大的菌落10. (1)选择养分、空间、温度、pH和有毒代谢废物等(答出三点即可)(2)酒精灯火焰附近涂布器1.32108低活菌会相互重叠，在培养基上只表现为1个菌落(3)葡萄糖
