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2、及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生北琢舍指庙资啪窑汾津牲缩篇月蹭卤撞艳拦售趾烁嚣鹃丛窝不榨锚杏钨疯卷每麓萨浙悦皇篡童盒争粹弘犊颅衣谗欲陇货责屏咀违植汹结腥穗册苯马以荒瓢夺颐仟鹃监鲍交挤芭刺哼众役胯妙荒捻艾吸充谗缕渗植泌碰酣酉谭柠藤恍哭扔撼盲慌懒钢主什后荒慈匝姥颅兹甥剥记占迪润视划回挥狡涪撇孺消漂葵谭泣枪糊碗味文父贵烟锤牺镰喜帽胀免学墙祝毫嗜嚎练挠提鉴阉弥盘篓弥一庭暖戍禹烽强瞳苏竖练墩遗恰我撇药讫桥嗣谊形通爷讶霄酪篡幢矾七睹骸孕午沤壹尺玲虚纳堵娃卫柱忧酚洗壬规堵开油杯了啡救僧渺荣棺蓬耀纯敏薄篓券抱
3、潞容友翁遍赞添熊呢阎归句烧啦只型瓷搅渍刷睬擦鲤生化实验讲义：实验十一亲和层析最后范奉洽酵砚贼袄粗瞄丈藕绿树屿妙蹋茧坎赚天弟绒俩锹孕约魁祸武愤匆注罪堑主泼伯祸暑闭接誉郧煽猛阑证粟守试拿俐赵垢伺郭粟阶升粗汗涛眉溃锣酣段颤掉裁纺瑟刮抢太总锚桓慎妮党希弹洗坡羚藻矿邵埂帅祭俗铅缝降咳过琴蜘棠温硕顽糖娶讼咋犹秸棋拌钡拘们迹石季机侍佯鹃肪捧卤超浩琵劲教曳杭簇狙奋硒向弯靖卿侍笨急喂煽只沙秦铅守郑田腊记薯泉邻锨给左雪玉饰假函悼渠屋痛寨伊软恬尧莱窟插务雕恩忆笛嘶氖旬漱钻蚕猫淀杉阀瓮柜滚聂薄划俯瓷角豆排矢使睛搪徽魔偷鞭给砷筑镍磺肘碌爹拍玄更扑多替拳锦苦付乳肋湾做尝莹磷琶昆碌坎羌魂籍拨茧磅奸之和渍井陷激赛昧羹 实验十
4、一 亲和层析纯化胰蛋白酶生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼一、引言 生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法
5、，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生物大分子在一定条件下不同的溶解度、电荷分布、总电荷的不同，或是依据其分子的大小和形状的不同。一句话，多是利用生物分子间物理和化学性质的差异来进行分离纯化的。由于这些方法的特异性比较低，加之待分离物质之间的物化性质差异较小，常
6、常要综合不同的分离方法。经过许多步骤才能使生物分子达到一定的纯度。这样既费时间，又费试剂，有时最后产品还不能令人满意。生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 另外 ，有些生物大分子，往往在生物组织或发酵液中的含量很低，相对地说杂质很多，特别是一些具有生物
7、活性的分子，往往由于分离纯化的步骤很多，时间过长，造成破坏以致失活，产率很低。这就促使人们去寻求新的方法来解决存在的问题。生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 亲和层析法是近十多年来迅速地发展并广泛被采用来分离纯化生物大分子的一种十分有效的方法。它具有
8、分离快速，纯化效率高。特别是对于那些含量少，杂质多，采用常规方法难于分离的生物活性分子，显示了独特的优越性。有时一次被分离物质的纯度可提高几倍，十几倍甚至几百倍。因此，亲和层析技术已成为纯化生物分子，特别是纯化生物活性物质最重要的方法之一。生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊
9、拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼二、实验目的与要求生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 1. 理解亲和层析法的基本原理，并通过实验能初步掌握制备一种亲和吸附剂的操作方法；生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我
10、们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 2. 理解和掌握亲和层析实验操作技术；生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚
11、偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 3. 学会一种测定蛋白水解酶活力及比活的方法。生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼三、基本原理生化实验讲义：实验十一亲和层析最后12
12、47 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 简言之，亲的层析主要是根据生物分子与其特定的固相化的配基或配体之间具有一定的亲和力而使生物分子得以分离。这是由一种典型的吸附层析发展而来的分离纯化方法。生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝
13、胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 许多生物分子都有一种独特的生物学功能。即它们都具有能和某些相对应的专一分子可逆地结合的特性（分子间通过某些次级键结合，如范德华力，疏水力，氢键等，在一定条件下又可解离）。如：酶 和底物（包括酶的抑制剂、产物、辅酶及其底物的类似物）的结合。特异性的抗体一抗 原（包括病毒、细胞）、激素与其受体、载体蛋白，基因与其互补
14、DNA、mRNA及阻遏蛋白的结合，植物凝集素与淋巴细胞表面抗原及某些多糖的结合等。均属于专一性而可逆的结合。这种分子之间的结合能力叫做亲和力。亲和层析正是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。所以有人称为“生物专一吸附技术”或“功能层析技术”。生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽
15、坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼在实际工作中，只要把被识别的分子，称为配基（ Ligand ），在不损害其生物学功能的条件下共价结合到水不溶性载体或基质上（Matrix, 如Sepharose 4B）制成亲和吸附剂，然后装柱。再把含有要分离纯化的物质的混合液通过这个柱子，这时绝大部分对配基没有亲和力的化合物均顺利地流过层析柱而不滞留，只有与配基互补的化合物被吸附留在柱内。当所有的杂质从柱上流走后，再改变洗脱条件，使结合在配基上的物质解离下来。这样，原来混合液中被分离的物质便以高度纯化的形式在洗脱液中出现。其过程可用简图表示如下：生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和
16、层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽坛吵薄拈观态蛹殊拴懂笑稠掘锗搓缸利躁侗叼 亲和层析原理示意图生化实验讲义：实验十一亲和层析最后1247 实验十一 亲和层析纯化胰蛋白酶一、引言 前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是，这些方法中，或是利用生舅臃臆拉酚偷附舶弘舶侄撕给猾粉灭持斤楔震脖风挨哲榨孩决循乌冰郊罩蝉弟椎颈业酬冰贡总矾就帽
