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1、培本方拆方调节哮喘大鼠内源性糖皮质激素作用处径的实验研究【摘要】目的研究培本方对哮喘大鼠内源性糖皮质激素G各作用处径的调节作用。方法采用VA卵蛋白致敏、激发复制大鼠慢性哮喘模型，以阿斯美胶囊为对照药，通过放免法检测血清RT皮质酮、血浆ATH促肾上腺皮质激素和下丘脑RH促肾上腺皮质激素释放激素的含量及免疫组化法检测肺组织GR糖皮质激素受体的表达，讨论培本方及其拆方对大鼠哮喘模型的部分作用机制。结果模型对照组较正常对照组RT及ATH含量均显著降低、GR蛋白表达亦明显降低、RH含量无明显改变；培本方全方组及拆方组改善RT，ATH，GR的影响作用更为显著。结论调节内源性G的作用处径可能是培本方抗哮喘作
2、用的机制之一。【关键词】培本方拆方内源性糖皮质激素哮喘大鼠AbstratbjetiveTstudytheadjustentfPEibenfangnthefuntinalrutefendgenusGinastharats.ethdsAstharatsdelasestablishedbyVAthrughsensitizingandhallenging.Asieiapsuleasusedaspsitiventrlediine.ByinvestigatingRTinbldseru,ATHinbldplasa,RHinhypthalausandGRinthelungissue,theeffetsfPei
3、benfangnasthaerebserved.ResultsThelevelsfRT,ATHandGRindelgruperelerthanthseinnralgrup;inPeibenfanggrupandPeibenfangpatibilitygrup(part),theseindexesinreasedrearkably.nlusinneftheehanissfPeibenfangagainstasthaistadjustthefuntinalrutefendgenusGinastha.KeyrdsPeibenfang;patibility;EndgenusG;Astha;Rats哮喘
4、反复发作可导致内源性G浓度下降，体内低浓度的G会加重哮喘的炎症反响，形成恶性循环，同时缺乏的应激激素反响将增加过敏性哮喘的易感性，也许这是哮喘长期反复发作的机理之一。培本方是由著名老中医徐辉光教授积30余年临床之经历，根据中医“久病成虚“缓那么治本的理论，独树一帜创立的以平补气血阴阳药物为主组成的复方，作为支气管哮喘患者缓解期用药，在临床上获得了较好的疗效。本实验旨在讨论培本方通过调节内源性G的作用处径用于哮喘防治的机制。1材料和方法1.1动物雄性安康SD大鼠，清洁级，60只，体重13010g，由中国科学院上海实验动物中心提供。动物批号：SXK沪2022-0002。1.2药品、试剂及仪器大鼠R
5、T试剂盒，美国DSL；ATH放免试剂盒，北京北方生物技术研究所；神经肽-RH放免药盒，第二军医大学神经生物学教研室；GR一抗R，美国Santaruz；免疫组化EnVisin试剂盒即用型，丹麦Dak公司；卵蛋白VA，美国siga公司；402A超声雾化器，江苏鱼跃医疗设备。实验所需中药材由上海康桥中药饮片提供。阿斯美胶囊，日本三共株式会社。1.3动物模型复制SD大鼠60只，随机分成6组，即正常对照组、模型对照组、培本方全方组、培本方拆方组由全方中补益气血的药物黄芪、当归组成、培本方拆方组由全方中补益阴阳的药物淫羊藿、女贞子组成、阿斯美组，每组10只。于实验第0，7天，除正常对照组给予1%氢氧化铝佐
6、剂，各组动物均以新颖配制的致敏液1g/lVA，溶于1%氢氧化铝佐剂内作皮下注射，每鼠在两侧后足跖、腹股沟、腰、背、颈部共取10点，每点注射0.05l，同时腹腔注射0.5l，共计1l。于实验第14天开场，将大鼠置于自制雾化箱403020内，用超声雾化器以雾化量0.8l/in雾化1%VA生理盐水溶液15in，1次/d，以激发哮喘。正常对照组雾化以生理盐水。连续激发3周后，停顿激发6d，然后激发1次，24h后处死。1.4给药方法于实验第14天开场灌胃给药，1次/d，直至处死前1日。培本方全方组、培本方拆方组、培本方拆方组、阿斯美组，分别按1l/100g体重灌胃给予相应的水煎液，给药量分别为23.2，
7、8.2，9.5，25.11gkg-1d-1。正常对照组和模型对照组：按1l/100g体重灌胃给予生理盐水。1.5标本制备及检测血液：25%乌拉坦4l/kg腹腔注射，腹主动脉取血，2l注入事先参加30lEDTA-二钠和40l抑肽酶的离心管内，立即颠倒混合，4静置，离心取血浆；其余血液室温静置后离心，取血清。肺组织：迅速开胸，取出肺组织，适量剪取左肺上部，浸泡于10%中性甲醛缓冲液中固定，脱水石蜡包埋，制成4厚的切片。下丘脑：断头，迅速摘取下丘脑，称重后置入液氮内，后转入-70冰箱内冻存。血清RT，血浆ATH和下丘脑RH均采用放射免疫分析法检测，实验过程参照试剂盒说明书进展。肺组织GR表达按丹麦D
8、ak公司免疫组化试剂盒Envisin系统操作说明进展，每组随机选取6张切片，用高明晰度图文分析系统分析GR阳性细胞的平均总面积averagegeneralarea和平均光密度averageD值，每张切片取2个视野，计算平均值。1.6统计学分析数据采用s表示，组间比拟采用方差齐性检验及单因素方差分析，相关分析采用线性回归法，所有资料的统计分析均采用SPSS11.0frinds软件包完成。2结果2.1各组大鼠血清RT，血浆ATH和下丘脑RH程度的比拟结果见表1。表1培本方拆方对大鼠血清RT略结果显示，与正常对照组比拟，模型对照组血清RT和血浆ATH含量显著降低P0.01或P0.05，下丘脑RH含量
9、无明显改变；与模型对照组比拟，各给药组均可以显著升高RT含量，可明显升高ATH含量的是培本方全方组和培本方拆方组P0.01，明显升高RH含量的是培本方拆方组P0.05；与阿斯美组比拟，RT含量明显升高的是培本方全方组和拆方组P0.05，影响ATH含量有统计学意义的是培本方拆方组P0.05。2.2各组大鼠肺组织GR表达的比拟结果见表2。表2培本方拆方对大鼠肺组织GR表达的影响略结果显示，GR阳性细胞可表达于肺内各级支气管，几乎所有的类型的细胞都可以表达，免疫反响主要定位于胞浆及胞核内见图16。由表2可以看出，与正常对照组比拟，模型对照组GR阳性细胞的平均面积及平均光密度均明显降低均为P0.01；
10、与模型对照组比拟，培本方全方组及拆方组能明显升高GR阳性细胞的平均面积分别为P0.01,P0.05，培本方全方组及培本方拆方，组能明显升高平均光密度值分别为P0.01，P0.05，P0.05，阿斯美组无显著影响。2.3培本方影响哮喘大鼠RT作用的相关性分析结果见表3。结果显示，培本方通过影响内源性G而发挥防治哮喘的作用与ATH和GR有一定的相关性。表3培本方影响哮喘大鼠RT作用的相关分析略3讨论有不少临床及实验研究说明，哮喘存在下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴不同程度的抑制现象13，体内G浓度缺乏，使哮喘炎症反响加重并增加过敏性哮喘的易感性，也许这是哮喘长期反复发作的机理之一。G在体内发挥作用依赖于
11、与细胞内GR的结合，GR是决定靶细胞对G反响性的关键因素之一。GR缺陷在哮喘发病机制中具有重要意义4，可能是导致哮喘开展、炎症迁延的重要原因。有研究说明，哮喘患者肾上腺皮质功能尚未受到明显损害，其GR功能即存在异常5。目前用于治疗哮喘的药物以部分治疗作用为主，亟待加强整体调节药物的研发和应用。以平补气血阴阳立法的培本方，由黄芪、当归、女贞子、淫羊藿等药组成，扶正固本，长于对机体的整体调节。曾通过大鼠同种被动皮肤过敏实验、急性小鼠耳肿胀实验、福氏完全佐剂小鼠气囊法等实验，证实培本方具有良好的抑制炎症介质的释放、抗炎、抗过敏、调节T淋巴细胞的免疫功能等作用6，7，为进一步研究培本方的作用机制奠定了
12、良好的实验基矗现代药理研究证实方中黄芪能进步血浆皮质醇含量，增强肾上腺皮质的功能，可通过内源性G发挥协同作用，并减少外源性G的应用所引起的不良反响8；淫羊藿可保护外源性G对下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺轴形态与功能的抑制，对NEi神经-内分泌-免疫网络调节起重要的作用9；补阴药女贞子煎液可促使ATH促肾上腺皮质激素的合成与释放来影响肾上腺皮质束状带细胞合成与分泌G10。基于上述的实验根底，本实验旨在通过观察培本方对哮喘大鼠内源性G各个作用环节的影响，讨论培本方防治哮喘的作用机制。实验结果显示，经抗原激发后，哮喘模型组动物RT和ATH，GR程度显著降低，提示哮喘动物存在内源性G功能缺陷。培本方全方组
13、及拆方，组均能显著改善哮喘大鼠RT程度，可明显升高ATH含量的是培本方全方组和培本方拆方组，能明显升高GR阳性细胞的平均面积和平均光密度值是培本方全方组及拆方组，提示培本方防治哮喘的作用机制与调节内源性G有关，且此作用机制与方中补益阴阳的部分关系更为明显。【参考文献】1沈自尹，施赛珠，查良伦，等补肾法防治哮喘及其内分泌和免疫方面的观察J.中医杂志，1981，225：341.2张海波，罗文侗，刘志民支气管哮喘患者外周血白细胞糖皮质激素受体的改变J.第二军医大学学报，1994，154：310.3童舜华，吴敦序，包照日格图，等小青龙汤对哮喘大鼠肺组织糖皮质激素受体和-受体等程度的影响J.中国中医根底
14、医学杂志，1999，53：18.4胡克糖皮质激素受体与支气管哮喘J.国外医学呼吸系统分册，1994，142：61.5刘辉国，牛汝楫，胡道桢支气管哮喘患者外周白细胞糖皮质激素的受体变化J.中华内科杂志，1994，333：150.6郭忻，毛平，耿娅，等培本方抗炎免疫作用的研究J.中成药，1998，207：28.7郭忻，冯怡，符胜光，等培本方抗变态反响的研究J.中成药，1997，1912：31.8石瑞如，刘艳红，翁世艾，等人参、黄芪、枸杞子对老年大鼠一些内分泌激素的调节作用J.中医药学报，1998，263：56.9蔡定芳，沈时谋，陈晓红，等仙灵脾减轻外源性糖皮质激素抑制神经内分泌免疫作用的临床与实验研究J.中国中西医结合杂志，1998，181：4.10郝泗城，毕平，宇克莉，等女贞子对大鼠垂体促肾上腺皮质激素细胞的影响J.天津师大学报自然科学版，1997，173：49.
