《2023年猪肉中氯丙嗪残留量测定国家标准方法的优化》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2023年猪肉中氯丙嗪残留量测定国家标准方法的优化（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、2023年猪肉中氯丙嗪残留量测定国家标准方法的优化 打开文本图片集 摘要：目的 针对猪肉中氯丙嗪残留量测定的国家标准方法回收率较低的情况，对国标方法进行优化。方法 对萃取步骤中水相的pH和反萃取步骤中有机相的用量进行考察，选择合适的条件，建立氯丙嗪残留量测定方法。结果 萃取步骤中水相的最适pH为-0.3，即用2mol/L的盐酸替代pH=3的磷酸二氢钾缓冲液。反萃取步骤中甲基叔丁基醚的最适用量为3mL，省去氮气浓缩步骤，减少操作步骤和实验时间，可保证反萃取率高和可操作性强。该方法的检出限为0.15g/kg，回收率在85.57%95.97%之间（RSD=4.7%，n=6）。结论 该方法可提高国标方
2、法的灵敏度和回收率，可操作性强，适用于猪肉中氯丙嗪残留量的检测。 关键词：猪肉；氯丙嗪；兽药残留；国家标准氯丙嗪（Chlorpromazine），又名冬眠灵，是第一个抗精神病药，临床上主要用于治疗精神分裂症、躁狂症和其他精神病性障碍。近年来，一些不法商人常常在畜禽长途运输过程中使用大量的氯丙嗪，以减轻畜禽的应激性，降低死亡率1。氯丙嗪进入人体后会产生许多不良反应，危害人体的健康2-3。现行国家标准（以下简称国标）中测定猪肉中氯丙嗪残留量的标准为GB/T 20763-2023。笔者实际应用中发现，按国标方法测得的氯丙嗪回收率较低（在10%左右）。本实验对该国标方法进行优化，以提高方法回收率，兼顾
3、其可操作性和准确性。1仪器与设备Agilent 1100-API3000液质联用仪（美国Agilent；美国Applied Biosystems）；XS205电子天平（十万分之一）（瑞士Mettler Toledo）；BSA2202S电子天平（百分之一）（德国Sartorius）；PB-10 pH计（德国Sartorius）；TW20恒温水浴箱（德国Julabo）；HY-2往复振荡器（常州澳华仪器有限公司）；LG10-2.4A高速离心机（北京京立离心机有限公司）；MS3 digital漩涡混合器（德国IKA）。2样品与试药盐酸氯丙嗪（含量100.0%，批号：100460-202301，中国食品
4、药品检定研究院），甲醇、乙腈、无水乙醇、甲酸（均为色谱纯），盐酸（优级纯），甲基叔丁基醚、甲酸铵、氢氧化钠、磷酸二氢钾（均为分析纯），所用水为超纯水。3方法与结果3.1液相条件色谱柱 Thermo Scientific Hypersil ODS（C18）柱（2.1mm150mm，5m）。流动相：A相为0.01mol/L甲酸铵溶液（用甲酸调节pH=4.0），B相为甲醇-乙腈（3：2，v/v），梯度洗脱：03min，保持70%A；36min，70%A线性变化至40%A；616min，40%A线性变化为35%A；1617min，35%A线性变化为20%A；1719min，20%A线性变化为70%A，
5、1930min，保持70%A。流速：0.3mL/min；柱温：35；进样量：20？L。3.2质谱条件以三重四极杆质谱仪作为检测器，ESI源，正离子扫描，MRM监测模式。IS：5500.0 V；NEB：12；CUR：8；CAD：6；源温：550。定量离子对（m/z 319.386.2，CE：29eV）；定性离子对（m/z 319.358.2，CE：60eV）；采集时间：200ms；DP：46V；FP：240V；EP：7V；CXP：14.5V。3.3溶液的制备3.3.1样品溶液的制备精密称取2g均匀猪肉样品于50mL聚丙烯离心管中，加入200L乙腈进行涡流混合，混合后加入400L 11mol/L氢
6、氧化钠溶液，并进行涡流混合30s。在（805）水浴中放置1h，在此期间，对每个测试样品进行涡流混合30s 2次。1h后，将样品取出，冷却至室温。加入12mL甲基叔丁基醚，置于振荡器上高速振荡15min，离心15min（4000rpm）。吸出上清液，将上清液转移至50mL聚丙烯离心管中，待净化。在上述50mL聚丙烯离心管中加入2mol/L盐酸3mL，振荡10min，离心10min（4000rpm），弃去甲基叔丁基醚层。加入1mL 11mol/L氢氧化钠溶液，摇匀，加入3mL甲基叔丁基醚，振荡15min，离心5min（4000rpm），吸取甲基叔丁基醚层，用0.22m微孔滤膜过滤，即得。3.3.2
7、对照品溶液的制备氯丙嗪标准储备液（104.1？g/mL）：精密称取0.01041g盐酸氯丙嗪对照品，置于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；氯丙嗪标准中间液（1.04？g/mL）：精密量取1.00mL氯丙嗪标准储备液于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得；氯丙嗪标准使用液（104.1ng/mL）：精密量取2.00mL氯丙嗪标准中间液于20mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。3.4方法学考察3.4.1线性关系精密吸取氯丙嗪标准使用液500L、1.00、2.50、5.00、10.00、50.00mL，分别置于100mL容量瓶中，用空白样品提取液稀释至刻度
8、，摇匀，即得浓度为0.5252.05ng/mL的氯丙嗪系列标准溶液，分别测定其峰面积。以氯丙嗪对照溶液浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=53813X+16752，R2=0.9996，说明氯丙嗪在0.5252.05ng/mL范围内线性关系良好，如图1所示。图1 盐酸氯丙嗪标准溶液曲线图3.4.2精密度以10.41ng/mL的氯丙嗪标准溶液重复进样6次。测得平均峰面积为626000，RSD=1.1%，表明仪器精密度较高。3.4.3回收率试验以不含氯丙嗪的空白猪肉为基质，以1.04、2.08、10.41g/kg三个水平进行回收率试验，氯丙嗪的回收率在85.57%95.97
9、%之间（RSD=4.7%，n=6），表明本方法具有较高的回收率，准确度较好。3.4.4重复性取6份不含氯丙嗪的猪肉样品，分别精密加入氯丙嗪标准使用液200L，按样品溶液制备方法制备加标溶液，同批进行液质测定，测得氯丙嗪的平均峰面积为364000，RSD=2.7%，表明本方法重复性较好。3.4.5检出限与定量限在阴性猪肉样品中添加一定量的氯丙嗪，按定量离子对色谱峰的信噪比等于3为检出限，信噪比等于10为定量限，得出方法检出限为0.15g/kg，定量限为0.4g/kg。3.5实际样品的检测按本实验建立的方法，对市场上采购的不同猪肉样品进行测定，均未检出氯丙嗪。4讨论4.1 pH对萃取率的影响 针对
10、国家标准GB/T 20763-2023中氯丙嗪回收率较低的情况，笔者分别对该方法中的萃取、反萃取、氮气浓缩等步骤进行试验，结果发现，萃取步骤中水相的pH是影响氯丙嗪萃取率的主要因素（其主要影响氯丙嗪的质子化，进而影响氯丙嗪的水溶性）。笔者对该步骤中水相的pH进行了考察。所用水相为：pH分别为4、3、2、1的1mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（用盐酸调节pH）；浓度分别为0.2、0.5、1、2mol/L的盐酸。所用有机相为：10.41ng/mL的氯丙嗪甲基叔丁基醚溶液（精密量取1.00mL氯丙嗪标准中间液，置于100mL量瓶中，用甲基叔丁基醚稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照溶液）。实验步骤为：将12
11、mL有机相置于50mL聚丙烯离心管中，加入3mL不同pH的水相，振荡10min，离心10min。取上层溶液和对照溶液经0.22m微孔滤膜过滤后进样，记录峰面积。对照溶液的峰面积以100%计，将不同水相pH条件下测得的氯丙嗪峰面积值与对照峰面积比较，可得出上层溶液中氯丙嗪的剩余量，进而计算出各水相pH条件下氯丙嗪的萃取率，如表1所示。本方法选择水相的pH值为-0.3，即采用2mol/L的盐酸。4.2反萃取溶剂用量的选择 国标方法中氮气浓缩仪的使用增加了操作步骤，会在一定程度上造成氯丙嗪的损失，本实验用一定量的甲基叔丁基醚反萃取，经滤头过滤后直接进样，并对甲基叔丁基醚的用量进行了考察。实验步骤如下
12、：精密移取800L氯丙嗪标准中间液，置于25mL量瓶中，用2mol/L的盐酸稀释至刻度，摇匀，即得氯丙嗪盐酸溶液。精密量取3.00mL氯丙嗪盐酸溶液（含盐酸氯丙嗪99.84ng）于50mL聚丙烯离心管中，加入1mL 11mol/L氢氧化钠溶液，摇匀。分别加入2、3、5、10mL甲基叔丁基醚，振荡15min，离心5min（4000rpm）。吸取上层溶液，经0.22m微孔滤膜过滤后进样，记录峰面积，计算不同体积甲基叔丁基醚反萃取的氯丙嗪的量和反萃取率。2、3、5、10mL甲基叔丁基醚对应的氯丙嗪反萃取率依次为72.34%、93.43%、72.52%和67.80%。因此，本方法选用3mL甲基叔丁基醚
13、溶液对氯丙嗪进行反萃取。目前，文献报道的猪肉中氯丙嗪残留量的测定方法较多，其中，能用于确证的主要有气质联用法4-5和液质联用法6-8，前者氯丙嗪的回收率不是太高4，或者用到了昂贵的内标物（D6-氯丙嗪）5，后者用到的仪器基本上为较高配置的超高效液相色谱-串联质谱6-7，普及性不高，张骏等采用的氯丙嗪的萃取与反萃取方法与国标方法基本一致8。本方法采用的检测仪器为高效液相色谱-串联质谱，是目前应用较为广泛的检测手段。萃取步骤和反萃取步骤可净化提取液，且萃取率均较高，可不使用昂贵的内标物即可达到较高的回收率和较低的检出限，适用于猪肉中氯丙嗪残留量的检测。参考文献：1刘学剑.盐酸氯丙嗪在畜禽生产中的应
14、用J.当代畜禽养殖业，1995，（3）：8.2张春旺，潘心红，冯彩群.一起由氯丙嗪引起的食物中毒的快速测定J.中国卫生检验杂志，2023，11（1）：109，112.3鲁桂芳，滕青贤.氯丙嗪不良反应回顾性分析J.中国医院用药评价与分析，2023，7（5）：388-390.4许世富.猪肉中氯丙嗪GC/MS残留检测方法的研究D.合肥：安徽农业大学，2023.5单美娜，徐晓枫，蒲云霞，等.气相色谱质谱法测定猪肉中氯丙嗪残留J.中国食品卫生杂志，2023，25（5）：438-440.6齐士林，吴敏，严丽娟，等.超高效液相色谱-质谱对动物源食品中氯丙嗪、异丙嗪及其代谢物的测定J.分析测试学报，2023，28（6）：677-681.7孙雷，张骊，徐倩，等.超高效液相色谱-串联质谱法检测猪肉和猪肾中残留的10种镇静剂类药物J.色谱，2023，28（1）：38-42.8张骏，王硕，张燕，等.猪肉中多种兽药残留液质联用检测技术的研究J.食品研究与开发，2023，35（6）：70-74，136.编辑/王敏
