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1、流动注射化学发光法测定氨苄西林钠的含量【摘要】 目的 建立测定氨苄西林钠新方法。方法 在氢氧化钠介质中，高碘酸钾氧化鲁米诺产生化学发光，氨苄西林钠显着增强该体系的发光，据此建立了一种简单、快速测定氨苄西林钠的流动注射化学发光新方法。结果 在优化的试验条件下，线性范围为10g/ml，检出限(3)为/ml，对1g/ml氨苄西林钠进行了11次平行测定，其相对标准偏差为%。结论 将本法用于粉针剂中氨苄西林钠的测定，结果令人满意。【关键词】 化学发光； 流动注射分析； 氨苄西林钠 ABSTRACT Objective To establish a chemiluminescence (CL) metho
2、d for the determination of ampicillin sodium. Method It was found that the light emission produced by the oxidation of luminol by postassium periodate in the basic medium was enhanced by ampicillin sodium. A new, simple and rapid method has been developed for the determination of ampicillin sodium.
3、Results In the optimum conditions, CL intensities are proportional to the concentrations of ampicillin sodium in the 10g/ml range. The limit of detection is /ml and the relative standard deviation (RSD) is% for g/ml (n=11). Conclusion The method has been applied to the determination of ampicillin so
4、dium in the commercial preparations, injection, and chemical product with satisfactory results. KEY WORDS Chemiluminescence; Flow-injection analysis; Ampicillin sodium 氨苄西林钠具有广谱抗菌作用，可用于治疗肺炎、支气管炎、肠胃炎、白痢、霍乱、伤寒及皮肤感染等。目前中国药典采用高效液相色谱法1测定氨苄西林含量，此外氨苄西林钠的含量测定还有紫外吸收分光光度法2，3、荧光法4，5等。本文报道一种化学发光法测定氨苄西林钠含量的方法。 1
5、 材料与方法 仪器及试剂 IFFLD-型流动注射化学发光仪(西安瑞迈电子设备有限公司)。U-4100紫外-可见-近红外分光光度计(日立，日本)；F-4500荧光分光光度计(日立，日本)。 氨苄西林钠标准溶液(500g/ml)：准确称取50mg氨苄西林钠标准品(中国药品生物制品检定所)，溶解于100ml的容量瓶中，用二次蒸馏水稀释至刻度配成储备液，需要时用二次蒸馏水稀释至所需浓度；高碘酸钾(10-2mol/L)：准确称取用二次蒸馏水配成储备液；鲁米诺：用/L的氢氧化钠溶液配成/L储备液，需要时稀释至所需刻度；其余试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。 实验方法 按图1所示，将高碘酸钾溶液和鲁米诺溶液在
6、d点汇合后再与注入载流中的氨苄西林钠在e点汇合， a：二次蒸馏水；b：10-5mol/L高碘酸钾； c：10-5mol/L鲁米诺；S：样品；P1、P2：蠕动泵； V：注射阀；F：流通池；W：废液；D：光电倍增管； PC：个人电脑；d、e：d和e汇合点 图1 测定氨苄西林钠的流动注射装置示意图 氨苄西林钠对化学发光产生强烈的增强作用，实验参数由IFFM-D型流动注射分析仪设定。 标准曲线的绘制：准确移取一定体积的氨苄西林钠标准储备液(500g/ml)于一系列25ml具塞比色管中，配制成浓度为10g/ml系列溶液。按照图1装置装好流路，开启蠕动泵，待基线稳定后进样进行测定，以峰高定量。 2 结果与
7、讨论 反应动力学 实验表明，该体系的化学发光强度在注射2s内达到最大值，5s后体系发光强度减弱至基线，可见该体系是一个快速化学发光反应。 参数的选择 实验证实，溶液采用图1所示的进样方式，流动注射仪两个泵的速度均为/min(单管)，聚乙烯的内径为，进样体积160l，混合管与三通管之间的管长为8cm，负高压为-650V；增益为2时，体系具有最大的信噪比。 条件的选择 (1)氢氧化钠浓度的影响 氢氧化钠的浓度对高碘酸钾氧化鲁米诺化学发光有明显影响，考查10-310-2mol/L范围内氢氧化钠溶液与化学发光强度的关系。试验显示，氢氧化钠浓度增大，发光强度也随之增大，但基线也随之升高，故以信噪比(S/
8、N)作为氢氧化钠浓度对化学发光影响的衡量标准。当氢氧化钠的浓度为10-3mol/L时信噪比最大，故选择该浓度为最佳浓度。 (2)高碘酸钾浓度的影响 高碘酸钾的浓度直接影响化学发光强度。试验显示，随着高碘酸钾浓度增大，化学发光强度和基线也随着升高。当浓度增加到10-5mol/L时信噪比达最大值，故选择该浓度作为高碘酸钾的最佳浓度。 (3)鲁米诺浓度的影响 在1120mol/L的浓度范围内考查鲁米诺浓度对化学发光强度的影响。试验表明，鲁米诺浓度在10-5mol/L时信噪比最大，故选择该浓度为鲁米诺的最佳浓度。 体系的分析特性 在选定的试验条件下，测定氨苄西林钠的线性范围为10g/ml，回归方程为I
9、=+(r=，n=11)，c的单位为g/ml，对g/ml氨苄西林钠进行11次平行测定，其相对标准偏差为%，检出限(3)为/ml。 干扰试验 试验了共存物质对测定氨苄西林钠的影响，当氨苄西林钠浓度为g/ml，干扰水平为5%时，800倍的淀粉、葡萄糖、CaCl2、NH4Cl、(NH4)2C2O4；600倍的K+、Na+、NO-3、NH+4、尿素、糊精、C2O2-4、Br-、麦芽糖；400倍的Mg2+、EDTA；200倍的CuSO4、FeCl3均不干扰测定。 3 样品分析 精确称取适量的氨苄西林钠粉针剂，用二次蒸馏水溶解至测定线性范围内后按照标准曲线的方法进行测定，结果见表1。 4 机制探讨 试验发现
10、该发光是一个快速发光，从试剂混合到发光达到最大值只需要2s，5s以后降到基线。分别测定鲁米诺-高碘酸钾、氨苄西林钠-高碘酸钾以及鲁米诺-高碘酸钾-氨苄西林钠混合溶液的荧光光谱。结果表明，仅在425nm波长处有一个荧光峰，这是氨基邻苯二甲酸的荧光峰6。分别测定鲁米诺、氨苄西林钠以及两者的混合溶液的紫外吸收光谱却没有发现有新的光谱产生，这说明鲁米诺和氨苄西林钠之间没有相互作用而产生新的物质。通过以上实验证明，该体系的化学发光是由氨基邻苯二甲酸离子(鲁米诺的氧化产物)产生的，而不是氨苄西林钠。 分别测定鲁米诺-高碘酸钾和鲁米诺-高碘酸钾-表1 氨苄西林钠粉针剂的测定结果氨苄西林钠的化学发光光谱。结果
11、表明，仅在425nm处有一个发光峰出现(与氨基邻苯二甲酸的最大发光波长相一致)，因此，可以推断出，氨苄西林钠只是增强该体系的化学发光。其反应历程可归纳 (1)氨苄西林钠+溶解氧+氢氧化钠羟(基)氢氧基(和/或过氧化物酸根)+其它反应产物； (2)鲁米诺+羟(基)氢氧基(和/或过氧化物酸根)+高碘酸钾3-氨基邻苯二甲酸离子*； (3)3-氨基邻苯二甲酸离子*3-氨基邻苯二甲酸离子+h(425nm)。 【参考文献】 1 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)M. 北京：化学工业出版社，2000：356. 2 Mahgoub H, Aly F A. UV-Spectrophotometric
12、determination of ampicillin sodium and sulbactam sodium in two-component mixtures J. J Pharm Biomed Anal,1998,17(8):1273.3 Xu L, Wang H, Xiao Y. Spectrophotometric determination of ampicillin sodium in pharmaceutical products using sodium 1,2-naphthoquinone-4-sulfonic as the chromogentic reagent J.
13、Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc,2004,60(13):30073012.4 Wang H Y, Xiao Y, Han. Simultaneous determination of carvedilol and ampicillin sodium by first-derivative fluorometry in the presence of human serum albumin J. J Anal Sci,2005,21(5):537540.5 Xiao Y, Wang H Y, Han. Simultaneous determination of carvedilol and ampicillin sodium by synchronous fluorimetry J. J Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc,2005,61(4):567573.6 Shevlin P B, Neufeld H A. Mechanism of the ferricyanide-catalyzed chemiluminescence of luminol J. J Org Chem,1970,35(7):21782182.
