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1、山羊胚胎移植技术在农村牧区的推广论文关键词: 敏盖绒山羊、同期发情、超数排卵、胚胎移植论文摘要:从农村牧区养殖业的生产实际出发,系统论述了敏盖内蒙古白绒山羊在生产性胚胎移植中的技术程序。主要包括:提前的准备工作：选择适宜的供、受体羊，并加强饲养管理；胚胎移植条件的准备：在适宜的季节,用宁波激素厂促卵泡素,以减量法进行供体超排；供、受体比例为1:812;用阴道栓配合促性腺激素,或用氯前列烯醇()进行受体同期发情处理；从供体输卵管手术回收的胚胎,移植于受体羊输卵管；完整的记录体系。胚胎移植是现代生物工程高新技术，能充分发挥优良母畜的繁殖潜力，迅速扩大优良畜群和纯种规模，加速杂交改良速度，缩短改良周
2、期和育种进程，增加双胎率，防止不育，尽快培育出我国优良绒山羊新品种。是一项投资少、见效快、利润丰，具有事半功倍的良种扩繁和现代育种技术。1内蒙古鄂尔多斯伊金霍洛旗苏布尔嘠镇先后引入辽宁绒山羊品种与当地白绒山羊育种形成了敏盖内蒙古白绒山羊品种进行养殖，收益较大，一些农牧民积极购买此绒山羊搞起了养殖,而且其他地区的人也常在这里购买此羊回去将把这些羊作为供体羊进行胚胎移植，使得此品种在市场上处于供不应求的状态，为满足需求和帮助农牧民脱贫致富，政府投大量资金进行胚胎移植来提高繁殖率，同时也加快了山羊胚胎移植技术在农村牧区的迅速发展与推广。1 关于开展农村牧区零散养殖胚胎移植的建议在广大农村牧区每户养殖
3、数很少，而开展胚胎移植工作又需要进行集中处理，所以根据这一特点，提出以下建议，供参考 分户饲养与集体饲养相结合 要在同期发情处理的第15天将所要接受移植的个体全部结合到一块进行集中饲养，集中饲养时间为8-10天。胚胎移植受体羊只的统计在胚胎移植前3个月进行村内移植受体羊统计，具体数量根据现有供体羊的数量进行确定，供受体参考比例为1：10。胚胎移植处理时间确定鄂尔多斯地区一般在每年8月下旬至11月上旬进行同期发情处理较为合适。 受体羊的选择及饲养管理 受体选择受体羊健康状况良好, 膘情适中，选择繁殖机能正常，无传染性疾病、无生殖器官疾病，年龄在26岁之间的经产的羔羊断奶一月以上的母羊。而且在移植
4、前2个月进行定期驱虫，以利于个体抓膘，提高同期发情及受胎率。公母分群所要进行移植的羊只一定要进行公、母羊分群饲养，以防受体羊只提前怀孕而流产造成不必要的经济损失。饲养管理要求被处理个体在移植前加强饲养管理，使个体达到中等膘情，但也不能过肥或过瘦。从同期发情放栓之日起要适当增加豆类饲料和萝卜等多汁饲料的供应，进行短期优饲能提高同期发情及受胎率。供体羊的选择及饲养管理 供体选择 供体羊(敏盖内蒙古白绒山羊)为经产2-5胎的母羊，身体健康状况良好,生殖器官正常, 正常繁殖史,繁殖力较高, 遗传性稳定，生产性能优良，羔羊断奶1个月以上，未孕。 供体的饲养管理 对供体羊进行常规传染病和寄生虫病的防治。饲
5、养管理遵循一般繁殖羊群的原则。保持羊群体况适度,根据羊群营养状况适时调整日粮标准,即增加蛋白质、能量饲料补充料,并注意矿物质和维生素的供应。 供体羊准备期的日粮配制A、 优青草2公斤B、 优质紫花苜蓿干草粉公斤或鲜紫花苜蓿公斤C、 胡萝卜公斤D、 干玉米秸、胡萝卜秧等混合草粉公斤E、 精料公斤， 2准备工作物品准备器材高压灭菌锅、 20ml 注射器、 10ml 注射器、5ml 注射器、1ml 注射器、胚胎移植手术架、手术刀片、医用缝合线、体视显微镜、冲胚管、集卵皿、培养皿、消毒卫生纸、医用喷壶 、黑色记号笔、宫颈扩张器、移胚器、检胚皿、剪毛剪、外科剪、手术刀、止血钳、创巾钳、持针钳、手术镊、缝
6、合针、创巾、止血纱布、脱脂棉、盆等。 药品 冲胚液、胚胎培养液、冰袋、生理盐水、新洁尔灭洗涤液、碘酊、酒精、青霉素、黄胺粉、FSH 、孕马血清、CIDR、阴道海绵栓、氯前列烯醇(PG)、黄体酮、麻醉剂、苏醒灵等。胚胎移植操室准备 50m2的以上房间,分隔为2个房间，胚胎移植手术室和胚胎操作室。并设置工作台及药械台等。室温保持在22-25,并用新洁尔灭进行室内消毒。 3. 供、受体羊的同期发情及供体的超排具体方案日 期供体山羊受体山羊0天早8时，放置海绵栓5天早8时，放置阴道海绵栓9天早8时，取出海绵栓、放入一新的海绵栓15天晚6时，肌注PMSG200iu晚6时，肌注PMSG200iu16天晚6
7、时，肌注FSH28-30iu17天早8时，肌注FSH28-30iu晚6时，肌注FSH23-25iu18天早8时，肌注FSH23-25iu晚6时，a、肌注FSH18-20iu b、肌注 晚6时、肌注19天早8时，a、撤出海绵栓b、肌注FSH18-20iu晚6时，a、开始试情 b、发情后立即静注LH130-140IU c、发情后立即进行输精 早8时，撤出阴道海绵栓 晚6时，开始试情20天进行手术输精(发情12小时)早8时试情22天输卵管冲胚输卵管移植4 胚胎回收及胚胎检查 供体羊术前准备 胚胎回收手术前1天停止饲喂草料而只给少量饮水，否则由于腹压过大，会造成手术的困难和供体生殖器官的损伤。饲喂干草
8、的母羊，停饲的时间不能少于24小时，饲喂青草或在草地上放牧的羊，停饲时间可减少至18个小时。在术前一天术部进行剪毛和剃毛，常有许多剃断的毛粘于皮肤，很难消除干净，手术中易带入创口造成污染，可采用干剪毛湿剃毛，剪毛完毕后用肥皂涂于要剃毛的部位，再用剃毛刀剃毛，然后用干毛刷将断毛刷除干净。第二天进行冲胚手术。 供体羊冲胚供体羊的冲胚手术在授精后68-72小时进行。首先，对供体羊全身麻醉，术部消毒后,采取前低后高半仰姿势将其保定在手术台上。在腹底部偏右侧距乳房基部3-4cm处做一长4-5cm的纵向切口，逐层切开,切开腹膜后,将中指和食指伸入腹腔在骨盆腔前沿膀胱之下触摸子宫角,把子宫角牵引到切口之外,
9、再把卵巢引出,检查黄体发育情况,如果黄体发育正常，即冲胚。冲胚时，在输卵管伞部前端插入一个带有胶管的回收圆针，并用手卡住，准备收集冲出的胚胎；再向输卵管的壶腹部处,插入装有冲胚液的进液针头,缓慢推入冲胚液，将胚胎冲入器皿中,冲胚液用量30-50ml。一侧冲洗结束时,除去器械,检查针孔,确认无出血现象,将输卵管送回腹腔内,然后按同一操作办法进行另一侧冲胚。两侧冲洗完毕后,将子宫送回腹腔并向腹腔内注入2530生理盐水,最后逐层进行缝合。 胚胎检查检卵将收集的冲卵液于37温箱内静置10-15分钟。胚胎沉底后，移去上层液。取底部少量液体移至平皿内，静置后，在视体显微镜下先在低倍(10-20倍)下检查胚
10、胎数量，然后在较大倍数(50-100倍)下观察胚胎质量。吸胚用移植器先吸一段1cm长的保存液，再吸一段的空气，然后吸取胚胎。含胚胎的液柱不超过。吸胚是为了移取、清洗、处理胚胎，要求目标准确，速度快，带液量少，无丢失。吸胚可用1毫升的注射器装上特别的吸头进行，也可使用自制的吸卵管。胚胎质量鉴定正常发育的胚胎，其中细胞(卵裂球)外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。无卵裂现象(未受精)和异常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。 处于二分体到四分体的胚胎 胚胎保存用吸卵管吸取发育成熟的胚胎,放入PBS培养液中保存,在24-26下,保存时间不超过4-5小时。5 受体羊胚胎移植(术前准备同供体
11、)首先，对受体羊注射麻醉剂，实行全身麻醉，术部消毒,采取前低后高半仰姿势将受体羊保定在手术台上,在腹底部偏右侧距乳房基部3-4cm处做一个长4-5cm的纵向切口,逐层切开,切开腹膜后,引出子宫、输卵管以及卵巢，检查黄体，无黄体或黄体过小的受体羊不能做胚胎移植；若有孕妊黄体,且生殖系统无炎症,即作为受体羊。将受体羊黄体一侧的输卵管伞部拔开，用装入胚胎的注射器从此处插入3-4，将胚胎注入输卵管内。移植结束后,把子宫角送入腹腔,在创口洒上抗菌素，防止感染，按手术要求缝合好腹壁创口。6 术后护理供体术后护理及配种繁殖 胚胎回收手术后注意伤口护理,注意观察，有问题及时处理。对季节性繁殖的品种,为了不影响
12、其自然繁殖及次年羔羊管理,当年只进行一次超排,并在下次发情时配种,自然繁殖。 受体术后护理与妊娠、分娩 完成受体胚胎移植后,应加强术后护理、观察，对妊娠受体适当增加日粮营养,以满足妊娠需要,妊娠后期更应加强管理,防止流产,并做好接产和羔羊护理工作。 7 结果与存在的问题 总体移植情况 共处理供体63只，其中怀孕3只，未发情1只，未冲胚1只，可用胚493枚，未受精卵141枚，共处理受体500只，受体移植数量 431只。 存在的问题 由于参加胚胎移植的人员中有几个是教师，所以移植只好安排于暑假期间，但是对于鄂尔多斯地区来说，最佳的移植时间一般是在8月下旬-11月上旬，略有些早，影响供体的超排效果。
13、 超排效果不够稳定，利用外源性促性腺激素刺激多排卵并不能每次都得到预期效果，不同的个体对超排处理的反应差异极大，排卵率很不稳定，有的个体甚至对超排处理毫无反应或排卵数很少，也有的个体经超排处理后卵巢上虽有大量卵泡发育，但无排卵发生。10 当地农牧民意识比较差，不懂这方面的知识，在苏布尔嘎村时，有几家牧民在输精前一天的晚上偷着利用了种公羊与自家不进行胚胎移植的发情母羊配种，以至第二天所采精液品质下降，造成供体羊受精率降低。出现了很多未受精卵。 胚胎回收率低，位于输卵管或子宫角内的胚胎并不能够全部回收，而且排卵数过多往往会降低胚胎的回收率，其原因可能是卵巢体积太大，排出的卵子未能进入输卵管伞而丢失。11 考虑到农牧民工作忙等问题，在刚移植完就让其各自把羊拉回去或赶回去，我认为路程稍微远的应该过几天运输或赶。否则造成术部损伤不利于愈合或造成早期流产等。 8总结与展望随着胚胎移植技术的不断改进和完善，先进设备的应用以及专门人才的大量培养，胚胎移植会像今天的人工受精技术那样被广大农牧民接受和采用。在21世纪，将是生物工程技术迅速发展并日益完善的世纪，它会对传统的繁殖技术带来新的突破。我们相信，随着繁殖技术的发展完善，它将为人类建设美好的明天做出更大的不可替代的贡献。
