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1、维康（VICAM）黄曲霉毒素分析方法汇编（附国标 GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法和荧光光度法GB/T 18980-2003 乳和乳粉中黄曲霉毒素M的测定免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法和荧光光度法）、 维康4系列荧光计的标定与测定1、荧光计的标定通过下列操作步骤可以随时进行标定试验，即使在测定试验中，显示表明不需要进行标定。操作按键显示读数Vicam V2.0 Ready按OPTIONSCalibrate Test (标定试验)按 ENTER（test name试验名称）按SELECT TEST键（反复按键，屏幕滚动显示）（试验方法的选择
2、）（AflaTest,黄曲霉毒素 测定）按ENTER 键（打开测试盖）（插入红色标定管）（标定值如果不对，请键入正确值）Open The LidInsert Red VialHigh Cal XX PPB按ENTER 键（关上测试盖）（打开测试盖）（取出红色标定管）（插入绿色标定管）（标定值如果不对，请键入正确值）Close the Lid Reading High Cal. Saving Hi Intensity Open the Lid Remove Red Vial Insert Green Vial Low Cal 0 PPB按ENTER 键（关上测试盖）（打开测试盖）（取出绿色标定管
3、） （打印标定值）Close the Lid Reading Low Cal. Saving Low Intensity Open the Lid Remove Green Vial Vicam V2.0 Ready2、测定试验仪器标定好后，请按照下列步骤进行测定试验。操作按键显示读数Vicam V2.0 Ready按 SELECT TEST键（反复按键，屏幕滚动显示）（test name，试验名称）（test name selected 试验方法的选择） （AflaTest，黄曲霉毒素测定）按ENTER 键（打开测试盖）（插入样品）（关上测试盖）（打开测试盖）（取出样品）（插入下一个样品，关
4、上测试盖。或者：Start Run Test0.00 Open The Lid 0.00 Insert Sample 0.00 Close the Lid Waiting xxx sec. Reading Sample. x.xx Open the Lid x.xx Remove Sample x.xx Insert Sample按STOP键Vicam V2.0 Ready为了打印第二份试验结果，在插入下一个样品之前，按PRINT键，然后按STOP键。二、荧光分析所要求的材料与设备荧光分析所要求的材料C/N编号物品12022AflaTest-P Column 黄曲霉毒素免疫亲和柱,Fluoro
5、meter & HPLC (50/box)20652Disposable Pipets 一次性移液管(50/pk)31240Fluted Filter Paper 折叠式槽纹滤纸，24 cm (100 filters per pack)31955Microfibre Filters 微纤维过滤器，11 cm (100 filters per pack)31967Kim Wipes试管擦拭纸(1 box)32010AflaTest Developer黄曲霉毒素分析用显色剂(50 mL)33020Mycotoxin Calibration Standards 真菌毒素标定标准物33030AflaT
6、est FGIS Calibration Standards, FGIS 标定标准物33040AflaTest-M Calibration Standards,黄曲霉毒素 M1 标定标准物33501Tween-20 土温-20 (50mL) (for nutmeg, oregano & alfalfa)34000Disposable Cuvettes 一次性测试管(250 per pack)35016Methanol, HPLC Grade 色谱级甲醇(4*4 L)Distilled, reverse osmosis or deionized water 蒸馏水Noniodized sodiu
7、m chloride (salt, NaCl)氯化钠Zinc Acetate (for cocoa)醋 酸锌Aluminum Chloride (for cocoa)氯化铝0.22 micro nylon syringe disk filters (for peanut hulls & corn gluten)荧光分析所要求的设备C/N编号Description 物品20050Graduated cylinder 量筒，50 mL20100Digital Scale with AC Adapter 电子称20200Commercial Blender with Stainless Steel
8、Container 不锈钢搅拌器20250Graduated cylinder 量筒，250 mL20501500 mL Bottle Dispenser for Methanol 甲醇用分配器(0-3 mL range)20600500 mL Bottle Dispenser for developer显色剂分配器(0-3 mL range)20700Wash Bottle 洗瓶,500 mL21020Single Position Pump Stand, 1 位泵流操作台36020Filter Funnel 漏斗，65 mm (10 per pack)G8000MF-2000 Mini F
9、luorometer, MF-2000 型荧光计23040Vortex Mixer 混合器36222Filter Funnel 漏斗，105 mm (4 funnels)centrifuge,离心机 2000g (for milk test only)五、大米、玉米、小麦、花生、花生酱、杏仁、阿月浑子、杏仁果、贾如树坚果等坚果中黄曲霉毒素分析操作步骤1.0测量范围：0-50 ppb20 检测限（LOD）： 1.0 ppb30标定值的设置：使用真菌标定标准物仪器绿色红色黄色Vicam 4系列-1221124.0试验准备4.1标定荧光计。4.2配制AflaTest显色溶液（一天配制一次，原装显色溶
10、液：纯水 =1： 9）。4.3配制甲醇冰（60： 40体积比）溶液（每周配制一次，或根据需要配制）。4.4试剂空白试验（1mL甲醇+1mL显色剂置于测试管中），荧光计读数应为0。4.5纯水空白试验（2 mL纯水置于测试管中），荧光计读数应为0。50样品提取5.1称取25g磨细的样品，5g氯化钠；置于搅拌杯中。5.2加入125 mL甲醇/水（60： 40）溶液。5.3盖上搅拌杯的盖子，高速搅拌1-2分钟。5.4取下盖子，将提取物到入折叠式滤纸上，滤液收集于干净的容器中。（如果过滤特别慢, 请先将50ML混合物离心，然后取上清夜过滤）60提取物的稀释6.1移取20 mL上步的滤液，置于干净的容器中
11、。6.2用20 mL纯水将滤液稀释，混匀。6.3将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL。70分离柱色谱操作7.1将上步10mL滤液（10mL=1.0g的样品），以1-2滴/秒的流速全部通过AflaTest-P亲和柱, 直至空气进入到亲和柱中。7.2将10 mL纯水以2滴/秒的流速通过亲和柱。7.3将7.2步再重新操作一次，直至空气进入到亲和柱中。7.4用1.0 mL HPLC级的甲醇以1-2滴/秒的流速淋洗亲和柱，将所有样品淋洗液（1 mL） 收集于玻璃测试管中。7.5将1.0 mL AflaTest显色剂加到测试管的淋洗液中。混匀后，将测试管置于已标定好了的
12、 荧光计中。60秒后，读数。（注：如果同时用荧光法和HPLC进行测定：从7.4步的1.0 mL淋洗液中取100山 置于测试管中，然后加100山 的纯水，混匀后、注入HPLC中。剩下的900山 淋 洗液中加入900山的显色剂，立即混匀、将测试管置于已标定好了的荧光计中。 60秒后，读数。）六、植物油中黄曲霉毒素分析操作步骤1.0测量范围：0-50 ppb2.0 检测限（LOD）： 1.0 ppb30标定值的设置：使用真菌标定标准物仪器绿色红色黄色Vicam 4系列-12211 240试验准备4.1标定荧光计。4.2配制AflaTest显色溶液（一天配制一次，原装显色溶液：纯水 =1： 9）。4.
13、3配制甲醇冰（60： 40体积比）溶液（每周配制一次，或根据需要配制）。4.4试剂空白试验（1 mL甲醇+1 mL显色剂置于测试管中），荧光计读数应为0。4.5纯水空白试验（2 mL纯水置于测试管中），荧光计读数应为0。50样品提取5.1称取25g样品，5 g氯化钠；置于搅拌杯中。5.2 加入 125 mL 甲醇/水（60： 40）。5.3盖上搅拌杯的盖子，高速搅拌1-2分钟。5.4取下盖子，将提取物到入折叠式滤纸上，滤液收集于干净的容器中。60提取物的稀释6.1移取10 mL上步的滤液，置于干净的容器中。6.2用10 mL纯水将滤液稀释，混匀。6.3将上步稀释液通过玻璃微纤维滤纸过滤，滤液收
14、集于玻璃注射器筒中，量取10 mL。70分离柱色谱操作7.1将上步10 mL滤液（10 mL=1 g的样品），以1-2滴/秒的流速全部通过AflaTest-P亲和柱, 直至空气进入到亲和柱中。7.2分别用10 mL纯水以2滴/秒的流速通过亲和柱，清洗亲和柱2次。7.3用1.0 mL HPLC级的甲醇以1-2滴/秒的流速淋洗亲和柱，将所有样品淋洗液（1 mL）收集于玻璃测试官中。7.4将1.0 mL AflaTest显色剂加到测试管的淋洗液中。混匀后，将测试管置于已标定好了的 荧光计中。60秒后，读数。（注:如果同时用荧光法和HPLC进行测定:从7.4步的1.0 mL淋洗液中取lOOpl 置于测
15、试管中，然后加lOOpl的纯水，混匀后、注入HPLC中。剩下的900pl淋 洗液中加入900口的显色剂，立即混匀、将测试管置于已标定好了的荧光计中。 60秒后，读数。）十二、测定黄曲霉毒素HPLC法的试验条件设置11 柱：反相 C18 柱（Cloversil C18, 4.6*150mm, Cosmosil C18, 4.6*150mm, Waters Nova pak C18,5mmX100mm,4ym cartridge, Whatman Partisphere RTF C18, 4.6X 150mm or Merck C18 column, 5 mm X 12.5 cm, 5pm）。1.2流动相：甲醇：水（45： 55）脱气。1.3 流速：0.8 mL/min.1.
